圣路易脑炎终于在美国暴发

健康报王有国的报导:圣路易脑炎是由一种嗜神经病毒引起,传染源主要是野鸟和家禽。城市中鸽子和麻雀在病毒繁殖中起重要作用。

豆鼠对流行性乙型脑炎病毒和圣路易脑炎病毒感受性的比较研究

圣路易脑炎与流行性乙型脑炎(以下简称乙型脑炎),在临床、传播媒介、流行季节和病毒性质上都很类似。在免疫血清学上虽有一定区别,但对实验室常用的动物中,主要只有小白鼠有高度的易感性,而在易感程度、感受途径和症状上,两者都没有显著区别。在免疫血清学方面,不仅操作比较麻烦,并且二者的抗原构造也有相似的部分,出现某种程度的交叉反应。因此,我们认为进一步寻找对这两型病毒在易感性上有区别的动物种,对病毒生物学性质的研究以及实际应用都是必要的。

圣路易斯脑炎病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为建立快速检测圣路易斯脑炎病毒(St.Louis encephalitis virus,SLEV)的TaqMan荧光定量RT-PCR方法。根据圣路易斯脑炎病毒非结构蛋白NS5基因保守序列,成功重构TaqMan探针与特异性引物,利用实时荧光定量(RT-PCR)技术对此脑炎病毒进行检测。运用重组质粒pUC57-NS5标准品完成标准曲线绘制,该标准品包括了选定检测序列,对应的相关系数则是0.9999,敏感性则为661 copies·mL-1。本研究中,圣路易斯脑炎病毒TaqMan荧光定量RT-PCR方法与同种属的西尼罗病毒、登革热病毒、乙型脑炎病毒和黄热病毒无交叉反应。该方法可以为圣路易斯脑炎病毒的流行病学调查和传染病监测提供一种技术基础。

携带圣路易斯脑炎病毒特异基因片段的重组假病毒颗粒的构建与鉴定

目的制备含有圣路易斯脑炎病毒(SLEV)pr M基因片段的假病毒颗粒,旨在提供安全、可靠、稳定的核酸阳性质控品。方法根据armored RNA技术原理,构建携带含有SLEV prM基因片段的重组质粒pSE380-MS2-SLEV,转化大肠杆菌后利用IPTG进行诱导表达,三氯甲烷法纯化后利用透射电镜观察重组假病毒颗粒形态。通过DNaseⅠ和RNase A双酶消化实验评价重组假病毒颗粒的核酸酶耐受性,并结合温度敏感性实验分析假病毒颗粒中核酸片段的稳定性。利用荧光定量RT-PCR法对该假病毒颗粒进行验证。结果 PCR扩增和测序分析显示,pr M基因片段正确克隆至载体p SE380-MS2。经大肠杆菌表达可形成直径约为25 nm的均一、球形重组假病毒颗粒。核酸酶消化和温度敏感性实验表明假病毒样颗粒包装的病毒核酸能耐受核酶的降解,37℃条件下存放20 d仍保持稳定。荧光定量RT-PCR检测该假病毒颗粒检测限可达1.8×103拷贝/ml,且与同属的其他病毒无交叉反应。结论成功构建了含有SLEV prM基因片段的假病毒颗粒,具有良好的核酸酶耐受性和稳定性,可作为核酸阳性质控品对核酸提取与检测过程进行全程监控。

圣路易斯脑炎病毒NS2B-NS3蛋白酶的原核表达及其抑制剂的筛选

【目的】圣路易斯脑炎病毒(St. Louis encephalitis virus,SLEV)属于黄病毒科,是一种单股正链RNA病毒。黄病毒编码的非结构蛋白NS3在病毒复制以及多聚蛋白加工过程中起着重要作用,NS2B是其发挥作用的重要辅助因子。因此,NS2B-NS3蛋白酶复合物是抗病毒药物的重要靶标。本研究旨在构建SLEV NS2B-NS3蛋白酶的原核表达系统并建立其抑制剂的高通量筛选方法,从而发现其小分子抑制剂。【方法】通过PCR扩增SLEVNS2B-NS3蛋白的编码区,构建原核表达质粒;在大肠杆菌BL21(DE3)中,经异丙基硫代半乳糖苷(Isopropyl β-D-thiogalactoside)诱导得到可溶性的NS2B-NS3蛋白,并用镍亲和层析方法进行纯化;基于荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer)技术检测NS2B-NS3蛋白酶活性,建立其抑制剂的高通量筛选平台。【结果】SLEV NS2B-NS3蛋白酶纯化程度高达95%以上,基于酶活测定的抑制剂筛选平台准确可行。对700多个上市药物进行筛选后,发现原花青素对SLEVNS2B-NS3蛋白酶具有明显的抑制活性。【结论】本研究为SLEVNS2B-NS3蛋白酶抑制剂提供了一种操作方便、高通量的筛选方法,并首次发现了原花青素具有抑制SLEV NS2B-NS3蛋白酶活性的功能,可以作为治疗SLEV感染的潜在靶向药物。

家禽寄生的蜱螨与疾病关系研究进展

家禽寄生的蜱螨很多种类属于人兽共患病的传播媒介或者保存者,从业人员或接触者可能感染相关的疾病。本文通过查阅文献,整理出寄生在家禽中的蜱螨以及可能传播的主要疾病,以期为疾病的防治提供参考。

美国发现致纽约脑炎的新病毒:西尼罗病毒

1999年8、9月份期间,在美国纽约爆发的所谓圣路易脑炎,现已证实是由西尼罗病毒引起的,这是西尼罗热首次在美国发生流行。9月23日,美国疾病预防和控制中心(CDC)已从人体、鸟类和蚊体内分离出西尼罗病毒。 据世界卫生组织(WHO)10月6日电讯,原先诊断为圣路易脑炎的50例病人。

气候变化对蚊媒病毒性疾病流行病学影响研究现状

蚊虫传播的登革热、圣路易斯脑炎、流行性乙型脑炎等病毒性疾病严重威胁着人类健康。气候变化诸如气温和降雨量的变化,可改变蚊虫地理分布、影响蚊虫生长发育和病毒在蚊虫体内的繁殖速度,也改变着疾病流行和传播的特征。现就气候变化对蚊媒病毒性疾病影响的研究进展进行介绍,并综述蚊媒病毒性疾病的流行趋势,试图全面了解气候变化之下蚊虫传播的病毒性疾病流行病学现状。

应用DPO引物技术同时检测5种蚊媒病毒的多重RT-PCR方法

目的应用双启动寡核苷酸引物(Dual Priming Oligonucleotide,DPO)技术建立同时检测日本脑炎病毒(JapaneseEncephalitisVirus,JEV)、黄热病毒(YellowFeverVirus,YFV)、西尼罗病毒(WestNileVirus,WNV)、圣路易斯脑炎病毒(St.Louis encephalitis virus,SLEV)和登革病毒(Dengue virus,DV)5种蚊媒病毒的多重RT-PCR方法。方法利用Primer Premier5.0软件设计5种病毒的特异性DPO引物,对引物浓度、Mg2+浓度和退火温度进行优化,测定多重RT-PCR反应的特异性和敏感性。结果应用DPO引物技术建立的多重RT-PCR方法可特异性扩增JEV、YFV、WNV、SLEV和DV的142 bp、293 bp、377 bp、630 bp和521 bp基因片段,灵敏度分别为5 000 PFU/ml、4 500 PFU/ml、2.3×105copies/μl、2.6×104copies/μl和1.37×104copies/μl,蚊虫模拟添加实验未发生非特异反应。结论应用DPO引物技术建立的针对5种蚊媒病毒的多重RT-PCR检测方法有良好的敏感性和特异性,可以同时对JEV、YFV、WNV、SLEV和DV进行检测。

应用多聚酶链反应快速鉴定黄病毒

应用多聚酶链反应快速鉴定黄病毒［英］／［ＭａｒｉｋｏＴａｎａｋａ．．．ＪｏｆＶｉｒｏｌｏｇｉｃａｌＭｅｔｈ－ｏｄｓ．－１９９３．４１．－３１１］黄病毒属是单链正链ＲＮＡ病毒，至少包括６６种，其中２９种引起人的疾病，主要是通过蚊媒传播，例如登革热病毒，...