茜草炭复合提取物对子宫内膜异位症模型大鼠在位内膜增殖、凋亡及内膜组织VEGF、NF-κB的影响

目的探讨茜草炭复合提取物(QCS)对子宫内膜异位症模型大鼠在位内膜增殖、凋亡及内膜组织中血管内皮生长因子(VEGF)、核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法采用自体移植法建立子宫内膜异位症大鼠模型;将造模成功的大鼠随机分为假手术组、模型组、孕三烯酮组、QCS低剂量组、QCS中剂量组、QCS高剂量组。干预4周后,观察并记录各组异位病灶体积变化;免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA),TUNEL技术检测在位内膜细胞的增殖、凋亡;免疫组化法检测VEGF及NF-κB蛋白的表达,逆转录聚合酶链反应(RTPCR)技术检测NF-κB mRNA的表达。结果治疗后病灶体积减小,孕三烯酮组及QCS中、高剂量组均较模型组显著降低(P<0.05),且高剂量组效果显著优于孕三烯酮组(P<0.05);孕三烯酮及QCS中、高剂量均能显著促进在位内膜细胞凋亡,抑制增殖(P<0.05),且高剂量组效果显著优于孕三烯酮组(P<0.05);孕三烯酮组及QCS中、高剂量组在位内膜VEGF、NF-κB蛋白及mRNA的表达显著下调(P<0.05),且高剂量组下调效果显著优于孕三烯酮组(P<0.05)。结论茜草炭复合提取物能通过促进在位内膜凋亡、抑制其增殖及下调内膜组织中VEGF、NF-κB蛋白及mRNA的表达等机制治疗子宫内膜异位症。

曼月乐对子宫内膜异位症患者在位内膜增殖与凋亡的影响

目的:从增殖与凋亡的角度探讨左炔诺孕酮宫内节育系统(曼月乐)防治子宫内膜异位症的作用机理。方法:采集中、重度子宫内膜异位症患者放置曼月乐前后的在位内膜,以透射电镜观察细胞形态,TUNEL法检测细胞凋亡率,免疫组化法检测Ki-67的表达。结果:放置曼月乐后,在位内膜腺体细胞Ki-67表达为阴性,凋亡率由24.4±35.0%升高至51.0±37.8%(P=0.027);间质细胞Ki-67的免疫组化HSCROE评分由2.0±1.2降至1.5±0.9(P=0.001),凋亡率由35.3±30.2%升高至76.4±11.2%(P=0.008)。结论:曼月乐能显著抑制内异症患者在位内膜的增殖并诱导凋亡,从而减少通过经血逆流进入腹腔的活性细胞数量,达到防止异位种植的效果。

药物治疗对子宫内膜异位症患者在位内膜凋亡的影响

目的探讨药物治疗,包括左炔诺孕酮宫内节育系统(LNG-IUS)、口服甲羟孕酮(MPA)或注射促性腺激素释放激素类似物(GnRHa)对子宫内膜异位症患者在位内膜凋亡的的影响。方法采集中、重度子宫内膜异位症患者术前以及放置LNG-IUS、口服MPA或注射GnRHa后的在位内膜,以末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡率,透射电镜观察细胞形态,RT-PCR检测内膜中凋亡相关蛋白Bax、Fas和Fas-LmRNA的表达。结果放置LNG-IUS后,在位内膜腺体细胞凋亡率由(24.4±35.0)%升高至(51.0±37.8)%(P=0.027),间质细胞凋亡率由(35.3±30.2)%升高至(76.4±11.2)%(P=0.008)。电镜下的凋亡状况,按程度由强至弱依次为:注射Gn-RHa、放置LNG-IUS、口服MPA。子宫内膜异位症患者在位内膜中Fas-LmRNA的表达率显著高于正常对照(P<0.05),但药物治疗前后3种凋亡相关蛋白mRNA的表达差异均无显著性。结论药物治疗可促进在位内膜凋亡,其诱导内膜细胞凋亡的作用由强至弱依次为:注射GnRHa、放置LNG-IUS、口服MPA。

MMP9、TIMP1及VEGF在子宫内膜异位症患者在位内膜的表达

研究基质金属蛋白酶 9(matrixmetalloproteinase 9,MMP9)及其抑制剂 (tissueinhibitorofmetalloproteinase 1,TIMP1)和血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)在子宫内膜异位症 (endometriosis,EM)患者的在位内膜中的表达。采用免疫组化SP法分别检测 4 5例EM(研究组 )在位内膜及 32例子宫肌瘤 (对照组 )的在位内膜中MMP9、TIMP1及VEGF的表达。MMP9、TIMP1、MMP9 TIMP1和VEGF在研究组和对照组的表达分别为 0 336 ,0 2 76 ;0 2 5 3,0 2 6 7和 1 2 93,1 0 34;0 372 ,0 2 88。其中MMP9、MMP9 TIMP1和VEGF在研究组中的表达显著高于对照组内膜 (P <0 0 1)。EM患者的在位内膜中MMP9、VEGF高表达可能是EM发生发展的重要原因。诊刮筛选出高MMP9、VEGF表达的在位内膜可望成为预测和诊断EM的方法之一。

细胞间粘附分子-1在子宫内膜异位症在位内膜、腹腔液及异位灶中的表达及分析

目的:探讨ICAM 1与子宫内膜异位症的关系。方法:收集子宫内膜异位症患者(研究组)腹腔液30份、在位子宫内膜2 1份、异位病灶组织8份及非子宫内膜异位症患者中正常盆腔(对照组)腹腔液2 5份、子宫内膜2 0份。应用酶联免疫吸附试验双抗体夹心法测定腹腔液sICAM 1和免疫组化方法测定在位内膜、异位灶内膜ICAM 1表达。结果:子宫内膜异位症患者腹腔液中sICAM 1水平明显高于对照组(P <0 .0 1 ) ,子宫内膜的ICAM 1表达低于对照组同期子宫内膜的表达(P <0 .0 5 ) ,异位灶组织ICAM 1表达明显高于其在位内膜(P <0 .0 1 )及对照组内膜(P <0 .0 5 )。结论:子宫内膜异位症患者子宫内膜、腹腔液、异位灶内膜细胞间粘附分子的异常表达可能与子宫内膜异位症的发生发展关系密切。

内异停方对子宫内膜异位症血清VEGF及在位内膜VEGFR-2的影响

目的:评价内异停方治疗子宫内膜异位症(EMs)疗效,观察内异停对EMs患者血清VEGF水平及在位内膜VEGFR-2的影响。方法:将76例EMs的患者分为两组,治疗组采用内异停方治疗,对照组采用桂枝茯苓胶囊治疗,2个月为1个疗程,观察2个疗程,评价临床疗效,并以ELISA方法检测血清VEGF,以免疫组化的方法检测在位内膜VEGFR-2的变化。结果:内异停方治疗EMs总有效率达88. 00%,优于对照组桂枝茯苓胶囊(58. 33%)(P <0. 05);内异停可明显降低血清CA125及VEGF水平(P <0. 05),与对照组相当;内异停组与对照组(未用药)在位内膜VEGFR-2比较,VEGFR-2表达明显下降。结论:内异停方治疗EMs有效,疗效优于桂枝茯苓胶囊,值得临床运用推广。内异停方可能通过降低EMs血清VEGF水平及在位内膜VEGFR-2水平发挥治疗作用。

子宫内膜异位症患者在位内膜特质的研究

为研究子宫内膜异位症患者在位内膜的分子生物学特质,采用免疫组化方法检测56例子宫内膜异位症患者(研究组)及35例肌间型子宫肌瘤患者(对照组)的在位内膜中基质金属蛋白酶9(MMP9)及其抑制剂(TIMP1),血管内皮生长因子(VEGF),雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的表达,利用图像分析仪测定相应密度代表其表达强度,发现研究组中MMP9、VEGF的表达及MMP9/TIMP1的比值均显著高于对照组,且ER丧失周期性变化规律.得出子宫内膜异位症患者在位内膜中MMP9、VEGF高表达及ER丧失周期性变化规律的分子生物学特质可能与子宫内膜异位症的发生发展有关的结论.

孕激素对子宫内膜异位症患者在位内膜T淋巴细胞分泌的受激活调节因子表达的影响

目的探讨正常T淋巴细胞表达和分泌的受激活调节因子(RANTES)与子宫内膜异位症(EM)发病的关系以及孕激素治疗的可行性。方法采集子宫内膜异位症患者术前以及放置左炔诺孕酮宫内节育系统(LNG-IUS)、口服甲羟孕酮(MPA)或注射促性腺激素释放激素类似物(GnRHa)后以及对照组的在位内膜,以半定量RT-PCR方法检测内膜组织中RANTES mRNA的表达。以100U/ml肿瘤坏死因子-α(TNFα)和不同浓度的孕酮(Po)与内膜细胞共孵育24h,观察Po对TNFα刺激RANTES分泌效应的影响。以不同浓度Po预处理细胞48h后,加入TNFα(100U/ml,16h),观察Po对TNFα刺激细胞分泌RANTES的抑制作用。采用ELISA方法检测细胞培养上清中RANTES的分泌量。结果药物干预前,EM组RANTES mRNA的相对表达量显著高于对照组(28.0±9.0vs.22.0±5.6,P<0.05)。放置LNG-IUS(24.0±4.2vs.25.9±4.2,P>0.05)或注射GnRHa(23.0±12.9vs.26.9±5.2,P>0.05)后,子宫内膜RANTES mRNA的表达差异无显著性;MPA组RANTES mRNA表达较用药前显著升高(42.6±3.1vs.24.3±5.7,P<0.05)。单纯Po刺激,培养子宫内膜细胞RANTES的分泌量无明显变化;同时以Po和TNFα刺激细胞,RANTES的分泌显著增加;Po预处理48h后,RANTES的分泌对TNFα的反应性显著减弱。结论EM患者在位内膜本身具有高趋化活性,孕激素防治EM有一定可行性。

体内外孕激素和GnRHa对子宫内膜异位症患者在位内膜血管内皮生长因子表达影响的差异

目的探讨孕激素和促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)对内异症患者在位内膜VEGFs表达的影响。方法子宫内膜细胞体外培养并行药物刺激,体内研究采集放置曼月乐,口服MPA或注射GnRHa后的患者内膜,以半定量RT-PCR方法检测内膜组织中VEGFs mRNA的表达。结果体外研究显示,孕酮和Gn-RHa均抑制内膜VEGFs mRNA的表达,病例组下降的幅度小于对照组。放置曼月乐和注射GnRHa均使在位内膜VEGFs mRNA表达明显升高,口服MPA组的VEGFs升高未达显著性差异。VEGFs mRNA的表达与MMP-9 mRNA呈正相关。结论孕激素和GnRHa体内用药对内异症患者在位内膜VEGFs表达的影响不能用体外干预的效应简单推论。VEGFs升高不一定引发突破性出血。

在位内膜厚度与子宫内膜异位症相关性初探

目的初步探讨在位内膜的厚度与子宫内膜异位症发病及复发的相关性。方法比较子宫内膜异位症患者与非子宫内膜异位症患者增生期、分泌期在位内膜的厚度;同时回顾性分析盆腔内异症保守术后复发的38例患者3年随访期间在位内膜厚度的变化。结果内异症患者的在位内膜在增生期、分泌期均明显增厚(P<0.05);38例保守术后复发子宫内膜异位症患者中有16例在确诊复发前出现增生期在位内膜增厚,复发前第一次发现在位内膜增厚的时间平均为术后10.375个月。结论内异症患者在位内膜厚度与子宫内膜异位症发生、复发密切相关,子宫内膜异位症保守术后在位内膜增厚可能是复发的先兆。

内异康复片对子宫内膜异位症异位和在位内膜血管形成相关因子的实验研究

目的探讨内异康复片对子宫内膜异位症(EMT)大鼠异位和在位内膜血管形成的不同影响,揭示内异康复片治疗EMT的作用机理。方法建立大鼠EMT模型,随机分为内异康复片高、中剂量组、丹那唑组、丹莪妇康煎膏组、模型组和空白组,采用免疫组化SP法染色,半定量检测血管内皮生长因子(VEGF)、内皮抑制素(ENS)在异位和在位内膜中的表达,并通过CD31标记异位子宫内膜血管内皮细胞,测定其微血管密度(MVD)。结果内异康复片高、中剂量组均能显著降低EMT大鼠异位内膜VEGF的表达(P<0.01),升高ENS的表达(P<0.01),并能显著降低EMT大鼠异位内膜血管内皮生长因子/内皮抑制素(V/E)值、MVD(P<0.01)和微血管数目(P<0.05),而对大鼠在位内膜V/E值、MVD及微血管数目的表达与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论内异康复片可能通过对血管形成过程的影响,抑制异位内膜组织血管的生成,促进异位病灶消退,同时使血管形成刺激因子和抑制因子之间相互平衡,但不抑制在位内膜正常血管增生的生理过程。内异康复片可降低异位子宫内膜微血管密度(MVD),可能与异位内膜组织血管生成受到抑制有关。

子宫内膜异位症在位内膜细胞对雌二醇超敏状态的研究

目的:观察子宫内膜异位症患者在位内膜细胞对雌二醇的反应性是否有别于正常妇女在位内膜细胞。方法:应用ELISA方法、逆转录聚合酶链式反应和流式细胞术对原代并传代培养的子宫内膜异位症患者和正常妇女的在位内膜细胞在基础状态及在雌二醇刺激后VEGF、MMP-3、MMP-9、TIMP-1和sICAM-1的分泌和(或)mRNA表达进行检测,并观察细胞增殖和凋亡状况。结果:雌二醇刺激后,子宫内膜异位症体外培养的在位内膜细胞分泌VEGF和MMP-3、表达VEGF mRNA以及细胞的增殖指数均较基础状态上调,上调的倍数分别为1.63±0.18、1.28±0.11、1.34±0.14和1.29±0.17倍,均高于对照组的1.33±0.09、1.07±0.13、1.12±0.16和1.11±0.11倍,其P值分别为0.039、0.050、0.038和0.050;子宫内膜异位症在位内膜细胞分泌TIMP-1、表达TIMP-1 mRNA、bax mRNA和凋亡指数在E2刺激后均下调,下调的倍数分别为0.51±0.07、0.66±0.15、0.73±0.08和0.76±0.09倍,均强于对照组的0.85±0.11、0.79±0.09、0.91±0.12和0.88±0.10倍,P值分别为0.043、0.050、0.038和0.029。结论:雌二醇上调内异症在位内膜细胞VEGF、MMPs的合成及增殖活性,以及其下调TIMP-1、凋亡活性的能力均强于正常内膜细胞,即子宫内膜异位症在位内膜细胞对雌二醇的刺激有一种超敏状态。

GnRHa对离体培养异位、在位内膜间质细胞生长抑制及分泌VEGF的影响

目的研究GnRHa对子宫内膜异位症(简称内异症)患者离体培养异位、在位子宫内膜间质细胞生长抑制及分泌VEGF的影响。方法体外原代培养人内异症异位、在位子宫内膜间质细胞,用10-10M、10-8M和10-6M的GnRHa分别干预,用MTT法测定内膜间质细胞的生长增殖情况;用ELISA法测定其分泌的血管内皮生长因子(VEGF)浓度的变化。结果 GnRHa可抑制内异症异位及在位内膜间质细胞的生长增殖,呈剂量和时间依赖性(P<0.05),且对异位内膜间质细胞生长的抑制率明显高于在位(P<0.05);GnRHa可降低异位及在位内膜间质细胞分泌的VEGF的浓度,呈剂量依赖性(P<0.05),且高浓度(10-6M)对异位强于在位(P<0.05)。结论 GnRHa可明显抑制子宫内膜异位症患者异位、在位子宫内膜间质细胞的生长,降低其分泌VEGF的浓度。

少腹逐瘀汤含药血清对子宫内膜异位症在位内膜分泌Ang-1、Ang-2和Tie-2的影响

目的研究少腹逐瘀汤含药血清对子宫内膜异位症在位内膜分泌Ang-1、Ang-2和Tie-2的影响。方法实验分为少腹逐瘀汤含药血清高剂量组、低剂量组及空白对照组。收集接收手术治疗的子宫内膜异位症病人的在位子宫内膜组织,经体外分离、培养,以实时荧光定量PCR分析不同浓度少腹逐瘀汤含药血清对在位内膜细胞表达Ang-1、Ang-2和Tie-2的影响。结果少腹逐瘀汤含药血清能剂量依赖性抑制在位内膜细胞表达Ang-1、Ang-2和Tie-2。结论少腹逐瘀汤含药血清可抑制体外培养的子宫内膜异位症在位内膜细胞Ang-1、Ang-2和Tie-2的分泌,提示少腹逐瘀汤对于治疗子宫内膜异位症可能具有一定的作用。

子宫内膜异位症在位内膜及裸鼠模型异位病灶芳香化酶的表达及意义

目的:探讨芳香化酶在子宫内膜异位症(EMs)在位内膜及其裸鼠模型异位病灶中的表达意义。方法:征集EMs组及非异位症(NEMs)组各24例,应用其分泌晚期子宫内膜,建立EMs裸鼠模型,取建模后5d、15d、30d裸鼠异位病灶,RT-PCR及免疫组化方法检测两组在位内膜和异位病灶芳香化酶mRNA及蛋白表达。结果:芳香化酶mRNA表达,EMs组异位病灶(0.894±0.23)表达强于在位内膜(0.685±0.15),P<0.05;阳性表达率(87.50%,83.33%)无差异。NEMs组异位病灶表达强度和阳性表达率(0.920±0.24,95.83%)均高于在位内膜(0.612±0.15,62.50%),P<0.05。两组在位内膜比较,EMs组阳性表达率高于NEMs组,P<0.05。两组异位病灶及各组不同时期异位病灶(EMs组,5d:0.889±0.23;15d:0.990±0.19;30d:0.880±0.29;NEMs组,5d:0.889±0.23;15d:0.905±0.23;30d:0.918±0.22)比较,芳香化酶mRNA表达无差异。芳香化酶蛋白阳性表达率,EMs组异位病灶(95.83%)与在位内膜(91.67%)比较,差异不显著。NEMs组异位病灶(95.83%)高于在位内膜(70.83%),P<0.05。EMs组在位内膜高于NEMs组,P<0.05;两组异位病灶比较,差异不显著。结论:局部雌激素合成增强在EMs发病机理中起重要作用。芳香化酶是EMs等雌激素依赖性疾病在子宫内膜特异性表达标记物。

子宫内膜异位症患者在位内膜的MMP-9和VEGF的表达

目的探索在位内膜是否有异常改变,以证实现有治疗方法的有效性。方法随机选取2013年11月至2014年5月于我院妇科经腹腔镜及病理确诊为子宫内膜异位症的患者40例为内异症组,既往因子宫内膜异位症在我院治疗后未复发的患者38例为治愈组,另选取30例同期健康育龄妇女为对照组。检测并比较三组受检者的基质金属蛋白酶9(MMP-9)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达水平。结果内异症组在位内膜MMP-9和VEGF的表达较治愈组和对照组均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);治愈组MMP-9和VEGF的表达与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05);MMP-9和VEGF的表达存在正相关关系(r=0.805,P<0.05)。结论内异症患者在位内膜的MMP-9和VEGF的表达异常,促进异位病灶形成;手术彻底切除内异症病灶联合药物治疗后MMP-9和VEGF表达恢复正常,延迟复发。

MMP1、MMP2、TIMP2在子宫腺肌症异位内膜和在位内膜中的表达

目的 :探讨 MMP1、MMP2、TIMP2在子宫腺肌症异位内膜和在位内膜中的表达情况 ,研究子宫腺肌症的发病机制。方法 :采有免疫组织化学方法检测 MMP1、MMP2、TIMP2在子宫腺肌症异位内膜 40例和在位内膜 40例中的表达。结果 :MMP1在子宫异位内膜腺体中阳性表达率较高 ( 85 % ) ,异位和在位内膜之间有显著性差异 ;MMP2在子宫腺肌症异位和在位内膜间质细胞、腺体中表达一致 ;TIMP2在子宫异位内膜间质中阳性表达率 ( 1 5 % )低于在位内膜间质细胞中阳性表达率 ( 4 0 % ) ,二者有显著性差异。结论 :MMP1可能参与子宫腺肌症的发生、发展 ;MMP2在子宫腺肌症异位和在位内膜间质细胞中均有较强的表达 ,说明子宫腺肌症异位和在位内膜间质细胞具有同源性 ;TIMP2不仅对 MMP2有抑制 ,且对 MMP1也有抑制作用 ,MMPs- TIMPs平衡失调可能有利于子宫腺肌症的发生。

内分泌腺体来源的血管内皮生长因子在子宫内膜异位症在位内膜及裸鼠模型中的特异性表达及意义

目的探讨内分泌腺体来源血管内皮生长因子(endocrine gland-derived vascular endothelial growth factor,EG-VEGF)在子宫内膜及裸鼠模型表达及意义。方法留取异位症(EM组)和非异位症患者(NEM组)子宫内膜各24例,种植于裸鼠盆腹腔,5、15、30d处死,获取异位病灶。RT-PCR和原位杂交检测EG-VEGFmRNA表达。结果RT-PCR:2组各期异位病灶EG-VEGFmRNA表达均强于在位内膜,P<0.05,15d最强,与30d比较,P<0.05。原位杂交:2组在位内膜和异位病灶腺细胞、间质和血管内皮细胞均见EG-VEGFmRNA杂交信号,30天弱于5d及15d病灶。结论在位内膜也表达EG-VEGF,异位病灶EG-VEGF过表达,表达程度与异位内膜细胞活性相关。