GnRHa对离体培养异位、在位内膜间质细胞生长抑制及分泌VEGF的影响

目的研究GnRHa对子宫内膜异位症(简称内异症)患者离体培养异位、在位子宫内膜间质细胞生长抑制及分泌VEGF的影响。方法体外原代培养人内异症异位、在位子宫内膜间质细胞,用10-10M、10-8M和10-6M的GnRHa分别干预,用MTT法测定内膜间质细胞的生长增殖情况;用ELISA法测定其分泌的血管内皮生长因子(VEGF)浓度的变化。结果 GnRHa可抑制内异症异位及在位内膜间质细胞的生长增殖,呈剂量和时间依赖性(P<0.05),且对异位内膜间质细胞生长的抑制率明显高于在位(P<0.05);GnRHa可降低异位及在位内膜间质细胞分泌的VEGF的浓度,呈剂量依赖性(P<0.05),且高浓度(10-6M)对异位强于在位(P<0.05)。结论 GnRHa可明显抑制子宫内膜异位症患者异位、在位子宫内膜间质细胞的生长,降低其分泌VEGF的浓度。

雷公藤多苷上调KISS-1表达对子宫内膜异位症在位内膜间质细胞增殖和凋亡的影响

目的研究雷公藤多苷对子宫内膜异位症(EMs)在位内膜间质细胞(ESC)增殖和凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法运用细胞计数试剂盒(CCK-8)和集落形成实验检测雷公藤多苷对EMs ESC细胞增殖的影响。流式细胞术检测细胞凋亡。实时荧光定量PCR检测KISS-1 mRNA表达量。蛋白质印记(Western Blot)检测Ki67、半胱氨酸蛋白酶3前体(Pro-Caspase3)、裂解的Caspase3(Cleaved-Caspase3)和B细胞淋巴瘤相关x蛋白(Bax)表达量。转染KISS-1小干扰RNA至EMs ESC细胞,检测干扰KISS-1表达对雷公藤多苷处理的EMs ESC细胞增殖和凋亡的影响。结果雷公藤多苷处理后EMs ESC细胞活力、克隆形成数、Ki67和Pro-Caspase3蛋白表达显著降低,凋亡率、Cleaved-Caspase3和Bax蛋白表达显著升高,KISS-1 mRNA表达显著升高(P<0.05)。干扰KISS-1表达后,雷公藤多苷处理的EMs ESC细胞活力、克隆形成数、Ki67和Pro-Caspase3蛋白表达显著升高,凋亡率、Cleaved-Caspase3和Bax蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论雷公藤多苷可抑制EMs ESC细胞增殖,并促进其凋亡,其机制可能与上调KISS-1表达有关。

HSF1通过上调MTDH促进子宫内膜异位症在位内膜间质细胞的上皮-间质转化

目的 探讨热休克因子-1(HSF1)和星形胶质细胞升高基因-1(MTDH)对子宫内膜异位症在位内膜间质细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用。方法 分别获取子宫内膜异位症患者(n=20)的在位和异位子宫内膜组织,采用RT-qPCR法、Western blot法和免疫组织化学染色法分别检测各在位和异位子宫内膜组织中HSF1和MTDH的表达情况;离体原代培养在位内膜间质细胞(EuSCs),并通过转染过表达HSF1,采用RT-qPCR法和Westernblot法对过表达HSF1效率进行验证;采用体外侵袭实验和划痕实验对EuSCs组,EuSCs转染pcDNA3.1组和EuSCs转染pcDNA3.1-HSF1组细胞的侵袭和迁移能力变化进行检测;采用细胞形态学成像和westernblot法分别对上述3组细胞的EMT表型和标志物,包括E-钙黏素、N-钙黏素、蜗牛蛋白和波形蛋白的表达水平变化进行检测。结果 与在位子宫内膜组织中HSF1和MTDH的表达水平相比,来源于子宫内膜异位症患者(n=20)的异位子宫内膜组织中对应蛋白质的表达水平升高,差异具有统计学意义(P<0.01);RT-qPCR法和Westernblot法证实在位内膜间质原代细胞中成功过表达HSF1;过表达HSF1后的在位内膜间质原代细胞,相较于过表达HSF1之前,MTDH表达被上调(P<0.01);细胞迁移(P<0.01)和侵袭能力增强(P<0.01),差异具有统计学意义;细胞形态更趋于成纤维样细胞表型,EMT标志物N-钙黏素、蜗牛蛋白和波形蛋白表达被上调(P<0.01),E-钙黏素的表达被抑制(P<0.05),差异具有统计学意义。结论 HSF1通过上调MTDH,调节子宫内膜异位症在位内膜间质细胞的EMT、侵袭和转移能力。

GnRHa对子宫内膜异位症内膜间质细胞生长增殖及血管形成的影响

目的:研究GnRHa对子宫内膜异位症异位及在位内膜间质细胞增殖、凋亡及血管形成的影响。方法:体外原代培养人内异症异位及在位子宫内膜间质细胞,用不同浓度的GnRHa分别干预,四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法测定内膜间质细胞的生长增殖活力;Annexin V-FITC和PI双染、流式细胞仪(FCM)检测异位及在位内膜间质细胞凋亡及周期变化;免疫细胞化学检测血管内皮生长因子(VEGF)表达的改变。结果:GnRHa可抑制内异症异位及在位内膜间质细胞增殖且呈剂量依赖关系;GnRHa能明显增加异位及在位内膜细胞的凋亡率(P<0.05),且异位内膜细胞凋亡率明显高于在位内膜(P<0.05);不同浓度的GnRHa作用后,内膜间质细胞均发生细胞周期阻滞,G1期细胞增加,S期细胞减少,此作用随浓度增加而增强(P<0.05);免疫细胞化学测定表明,GnRHa可降低异位及在位内膜间质细胞VEGF的表达(P<0.05),且随GnRHa浓度增加而增强(P<0.05)。结论:GnRHa可明显抑制人内异症异位及在位子宫内膜间质细胞的生长并促进其凋亡,降低异位及在位内膜间质细胞VEGF的表达。

circPVT1在子宫腺肌病内膜组织和细胞中的表达及临床意义

目的探讨人子宫腺肌病(adenomyosis,ADS)内膜组织和细胞中Hsa_cire_PVT1(circPVT1)的表达水平及其临床意义。方法选取2018年6月至2019年2月于首都医科大学附属北京妇产医院因ADS行全子宫切除术的患者45例作为ADS组,同期因宫颈上皮内瘤变Ⅲ级(cervical intraepithelial neoplasia Ⅲ,CIN Ⅲ)或宫颈癌IA1~IB1期行全子宫切除的患者45例入对照组,获取子宫内膜组织。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测ADS组在位、异位内膜及对照组正常子宫内膜组织中circPVT1的表达水平,并分析其与ADS临床特征的相关性。体外培养人原代ADS在位内膜上皮细胞(ADS_EEC)和间质细胞(ADS_ESC)及正常内膜上皮细胞(Con_EEC)和间质细胞(Con_ESC),qRT-PCR技术检测circPVT1在细胞内的表达差异。通过构建慢病毒载体稳定转染sh-circPVT1及其阴性对照组Scramble,干扰circPVT1在ADS_EEC和ADS_ESC中的表达量,利用CCK-8,transwell侵袭实验分别检测干扰circPVT1表达对ADS内膜细胞增殖和侵袭能力的影响。结果circPVT1在ADS在位及异位内膜组织中的表达水平均显著高于正常子宫内膜(P<0.001),但其表达水平在ADS在位与异位内膜组织比较差异无统计学意义(P>0.05)。ADS在位内膜组织中高表达的circPVT1与患者月经量失血评分(PBAC评分)正相关,异位内膜组织中高表达的circPVT1与患者痛经程度疼痛视觉模拟评分(VAS评分)呈正相关。在ADS内膜细胞ADS_EEC及ADS_ESC中,circPVT1表达水平明显高于正常子宫内膜细胞Con_EEC及Con_ESC(P<0.0001)。与干扰阴性对照组相比,sh-circPVT1组ADS_EEC及ADS_ESC细胞的增殖与侵袭能力明显受抑制。结论circPVT1在ADS内膜组织和细胞中表达水平均升高,可能参与ADS发生发展过程,并在一定程度上与患者痛经和月经量异常相关。