小鼠胎脑组织活体转基因技术的建立

目的:建立实用的小鼠活体脑组织基因转染技术。方法:将EGFP质粒(CAGS启动子)注射到胎龄16 d(E16d)的胎鼠侧脑室,用镊形电极隔着子宫壁夹住胎鼠头部,在45 V电压下给予5次电脉冲刺激,每次刺激50ms,间隔1 s;转染后不同天数将胎鼠脑组织完整取出,以4%PFA固定后冰冻切片,进行激光共聚焦照相。结果:EGFP质粒被转入小鼠活体脑组织细胞中并获得表达,动物存活率为90%,GFP阳性率高于80%。结论:通过对麻醉剂、电脉冲刺激、质粒浓度、术中术后处理等多种实验条件的摸索,建立了实用的小鼠胎脑组织活体转基因技术。

N-甲基-D-天冬氨酸受体NR1亚基调控大脑皮层神经元放射状迁移

目的探讨N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体在大脑皮层发育过程中参与调控皮层神经元放射状迁移的情况。方法通过在体子宫内胚胎电转基因和RNA干扰技术(RNAi),在发育的大鼠胚胎脑内干扰NMDA受体的NR1亚基表达,结合荧光免疫组织化学技术,追踪基因转染上的神经元在大脑发育过程中的迁移途径和特征。结果转染上对照质粒的皮层神经元能通过放射状迁移,在出生后第7天(P7)之前迁移到皮层的正确位置,即2～3层,而干扰NR1基因表达后的神经元则不能正常地放射状迁移至皮层的2～3层,P7时仍停留在皮层深层位置,甚至发生区。结论 NMDA受体在大脑皮层神经元放射状迁移过程中起关键性作用,有助于理解胚胎发育过程中迁移的机制并为预防控制神经元迁移异常提供依据。