异柠檬酸脱氢酶基因突变的弥漫性较低级别胶质瘤中α地中海贫血伴智力低下综合征基因缺失与1p/19q联合缺失的表达分析

目的探讨不同亚型异柠檬酸脱氢酶(IDH)突变弥漫性较低级别胶质瘤中α地中海贫血伴智力低下综合征X染色体连锁基因(ATRX)缺失和1号染色体短臂和19号染色体长臂(1p/19q)联合缺失的表达及意义。方法回顾性分析2012年6月至2017年6月确诊并在苏州大学第一附属医院和常熟市第二人民医院手术及放化疗治疗的IDH突变型成年较低级别弥漫性胶质瘤患者142例,依据组织学分型分为星形细胞瘤与少突胶质细胞瘤两组,采用免疫组化法检测ATRX缺失,FISH法检测1p/19q联合缺失,比较两组ATRX缺失及1p/19q联合缺失的差异,χ2检验评价各参数间相关性的显著性。平均随访40个月(10-88个月),分析ATRX缺失及1p/19q联合缺失与生存时间之间的关系。结果星形细胞瘤组ATRX缺失显著高于少突胶质细胞瘤组,少突胶质细胞瘤组1p/19q联合缺失显著高于星形细胞瘤组,差异有统计学意义(P<0.05)。星形细胞瘤组中ATRX缺失的患者预后优于野生型ATRX的患者,中位生存时间分别为46、40个月,差异有统计学意义(P<0.05)。少突胶质细胞瘤组中1p/19q联合缺失患者的预后优于1p/19q正常患者,中位生存时间分别为53个月、42个月,差异有统计学意义(P<0.05)。结论ATRX缺失和1p/19q联合缺失可用于鉴别IDH突变型星形细胞瘤与少突胶质细胞瘤,可作为评价IDH突变型弥漫性较低级别胶质瘤预后的独立因素。联合应用基因变异的分类比单纯组织学分类更准确。

一个伴α地中海贫血X连锁智力低下综合征家系的基因突变研究

目的对1个x连锁智力低下伴d地中海贫血综合征（alphathalassaemia／mentalretardationsyndrome，X-linked，ATR-X）的家系进行致病基因突变研究。方法根据患者的临床表型和家系的遗传特点，应用x染色体短串联重复序列位点的连锁分析，定位智力低下的基因位点，初步锁定目的基因后，应用聚合酶链反应技术扩增致病基因外显子及剪切位点，应用DNA序列测定技术分析患者及其父母的致病性突变。地中海贫血基因检测确定患者基因型。结果连锁分析提示ATRX基因可能是家系智力低下的致病基因。全部3例患者ATRX基因第9外显子均存在C．736C〉T（P．R246C）突变。3例患者的母亲及祖母均为该突变携带者。其余8名家系成员均未检测到该基因突变。a地中海贫血检测证实先证者及另1例患者均携带a珠蛋白基因的缺失，基因型分别为结论该家系ATRX基因的错义突变e．736CT位于该基因突变热点区域，P．R246C可能影响ATRX蛋白锌指蛋白结构域的功能，可能是该家系ATR-X综合征的发病原因。

ATRX新致病性变异致X连锁智力低下家系分析

目的:分析一个α地中海贫血X连锁智力障碍(ATR-X)综合征家系的致病基因突变。方法:对该ATR-X综合征家系先证者进行全外显子组测序,通过生物信息学分析筛选候选的致病基因突变位点,利用聚合酶链反应(PCR)和Sanger测序验证该家族成员的致病突变位点。结果:全外显子组测序发现先证者的X染色体ATRX基因存在半合子变异(c.161;62del,p.Ser54Ter),家系成员Sanger测序结果表明该变异在家系中符合遗传共分离规律。结论:ATRX基因c.161;62del变异为引起该家系ATR-X综合征的遗传学因素。

成人胶质母细胞瘤TERT启动子和ATRX突变预后价值

目的探究成人胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)中端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)启动子,α-地中海贫血伴智力低下综合征基因(alpha-thalassemia/mental retardation syndrome X-linked,ATRX)突变对预后的影响。方法收集2020年至2022年在徐州医科大学附属医院神经外科行手术治疗的82例GBM患者病理及随访资料。TERT启动子区(C228T和C250T)及ATRX突变检测采用多重PCR扩增+二代测序(next generation sequencing,NGS)方法,根据患者HE染色切片的镜下结果将其分为低级别组织形态的GBM和高级别组织形态GBM两组,分析两组GBM患者TERT启动子和ATRX突变率的差异。GBM患者预后的影响因素采用多因素COX回归分析。结果两组GBM患者中TERT启动子突变率(25.0%vs.75.8%,χ^(2)=12.584,P<0.01)存在统计学差异。年龄≤60岁、术中肿瘤全切、术后放疗、化疗、TERT启动子非突变是影响GBM患者预后的独立保护性因素(P<0.05)。结论TERT启动子突变的GBM患者预后较差、临床中常规检测TERT启动子并结合其他分子标记物有助于正确评估GBM患者预后,有较高临床价值。

3D-APTw及ADC直方图分析预测IDH突变型WHO 2/3级胶质瘤中ATRX基因突变的价值研究

目的评估3D-酰胺质子转移加权成像(APTw)、表观扩散系数(ADC)直方图分析预测异柠檬酸脱氢酶(IDH)突变型WHO 2/3级胶质瘤中α地中海贫血伴智力低下综合征X连锁(ATRX)基因突变的价值。方法选择自2017年6月至2023年10月于南方医科大学珠江医院神经外科中心功能神经外科就诊并经手术病理确诊的78例IDH突变型WHO 2/3级胶质瘤患者为研究对象,其中52例为ATRX野生型,26例为ATRX突变型。收集患者术前3D-APTw、ADC图像资料,经后处理后分别采用基于包含瘤周水肿的病灶勾画方式以及基于肿瘤实体的病灶勾画方式对病灶进行分割,之后分别从3D-APTw及ADC图像中提取直方图特征(10百分位数、90百分位数、最大值、平均值、中位数、最小值、偏度、峰度、熵、全距、均匀性和方差)。采用单因素分析比较ATRX突变型组与ATRX野生型组患者间各直方图特征的差异,采用多因素Logistic回归分析筛选ATRX基因突变的独立预测因子并用独立预测因子构建Logistic回归预测模型。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估各独立预测因子及Logistic回归预测模型对ATRX基因突变的预测价值。结果(1)基于包含瘤周水肿的病灶勾画方式时,单因素分析示ATRX突变型组与ATRX野生型组患者间相对3D-APTw最小值、3D-APTw偏度、相对ADC 90百分位数、相对ADC平均值、相对ADC中位数、ADC峰度、ADC偏度、ADC均匀性及ADC熵的差异均有统计学意义(P<0.05)。基于肿瘤实体的病灶勾画方式时,单因素分析示ATRX突变型组与ATRX野生型组患者间相对3D-APTw 90百分位数、3D-APTw偏度、相对ADC 90百分位数、相对ADC平均值、相对ADC中位数、ADC峰度、ADC偏度、ADC均匀性及ADC熵的差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)基于包含瘤周水肿的病灶勾画方式时,多因素Logistic回归分析示3D-APTw偏度及ADC峰度为IDH突变型WHO 2/3级胶质瘤患者中ATRX基因突变的独立预测因子(OR=0.168,95%CI:0.034~0.800,P=0.025;OR=0.508,95%CI:0.319~0.807,P=0.004),以此2个直方图特征构建的Logistic回归预测模型为P(Y=1|X)=1/1+e^(-(1.827-1.785×3D-APTw偏度-0.678×ADC峰度))。基于肿瘤实体的病灶勾画方式时,多因素Logistic回归分析示3D-APTw偏度及ADC峰度为IDH突变型WHO 2/3级胶质瘤患者中ATRX基因突变的独立预测因子(OR=0.164,95%CI:0.034~0.791,P=0.024;OR=0.496,95%CI:0.312~0.788,P=0.003),以此2个直方图特征构建的Logistic回归预测模型为P(Y=1|X)=1/1+e^(-(1.585-1.810×3D-APTw偏度-0.702×ADC峰度))。(3)ROC曲线分析显示:基于包括瘤周水肿的病灶勾画方式时,3D-APTw偏度、ADC峰度作为独立预测因子的曲线下面积(AUC)分别为0.725(95%CI:0.608~0.842,P=0.001)、0.794(95%CI:0.685~0.904,P<0.001);Logistic回归预测模型的AUC为0.836(95%CI:0.729~0.942,P<0.001),当最佳阈值为0.505时,其预测ATRX基因突变的敏感度为73.10%,特异度为90.40%。基于肿瘤实体的病灶勾画方式时,3D-APTw偏度、ADC峰度作为独立预测因子的AUC分别为0.705(95%CI:0.587~0.823,P=0.003)、0.808(95%CI:0.704~0.913,P<0.001);Logistic回归预测模型的AUC为0.844(95%CI:0.739~0.949,P<0.001),当最佳阈值为0.399时,其预测ATRX基因突变的敏感度为84.60%,特异度为80.80%。结论3D-APTw及ADC直方图分析能在一定程度上预测IDH突变型WHO 2/3级胶质瘤中ATRX基因是否发生突变。

TERT启动子突变、ATRX表达水平在人脑胶质瘤病人预后评估中的作用

目的探讨端粒酶逆转录酶(TERT)启动子突变、α-地中海贫血伴智力低下综合征基因(ATRX)表达水平在人脑胶质瘤病人预后评估中的价值。方法回顾性分析2016年6月~2018年6月手术治疗的102例人脑胶质瘤的临床资料。术后检测脑胶质瘤组织TERT启动子突变及ATRX表达情况。所有病人术后随访2年。结果102例中,低级别胶质瘤48例(WHO分级Ⅱ级),高级别胶质瘤54例(Ⅲ级31例,Ⅳ级23例)。低级别组TERT启动子突变率(37.50%,18/48)明显低于高级别组(59.26%,32/54;P<0.05),而ATRX表达阳性率(60.42%,29/48)明显高于高级别组(37.04%,20/54;P<0.05)。多因素Cox比例回归风险模型结果显示,TERT启动子突变、ATRX表达阴性是生存预后不良的独立危险因素(P<0.05)。生存曲线分析显示,TERT启动子突变型胶质瘤病人较野生型病人生存期明显缩短(P<0.05),ATRX表达阴性胶质瘤病人较表达阳性病人生存期明显缩短(P<0.05)。结论TERT启动子突变、ATRX基因表达对人脑胶质瘤预后评估具有重要价值。

联合IDH1、1p/19q和ATRX对胶质瘤分子分型的临床意义

目的探讨联合异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)、1号染色体短臂和19号染色体长臂(1p/19q)和α-地中海贫血/智力低下综合征X染色体连锁基因(ATRX)对胶质瘤分子分型的临床意义。方法回顾经术后病理证实的104例胶质瘤患者的临床及组织病理资料,采用免疫组织化学法对其存档病理组织蜡块进行IDH1突变、ATRX表达缺失检测,采用荧光原位杂交法检测1p/19q缺失情况,通过门诊复查和电话等方式随访患者的术后生存情况,联合IDH1、1p/19q和ATRX将胶质瘤患者进行分子分型(A型:IDH1突变,1p/19q缺失;B型:IDH1突变,1p/19q完整;C型:IDH1野生,ATRX突变;D型:IDH1野生,ATRX野生),并分析不同分子分型患者临床病理特征及预后间的差异。结果联合分子分型与胶质瘤患者的年龄、组织学分级、卡氏功能状态(KPS)评分与病理分型均有关(P<0.05),其中与病理学分型的相关性最大,而与性别、肿瘤部位和肿瘤大小无关(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,4组分子分型的胶质瘤患者术后总生存期差异显著(Log-Rank:χ2=31.631,P<0.001),其中B型患者的中位生存期最长,D型患者中位生存期最短。COX风险回归分析显示,胶质瘤患者的预后与患者年龄、组织学分级、KPS评分、病理分型、IDH1、ATRX、联合分子分型和治疗方案均独立相关(P<0.05),而与患者性别、肿瘤部位、大小和1p/19q缺失无关(P>0.05)。结论联合IDH1突变、1p/19q杂合缺失和ATRX突变对胶质瘤患者进行分子分型,有助于临床诊断,还可能为患者术后生存情况提供参考。

ATRX在中枢神经细胞瘤中的表达模式及意义

目的探讨中枢神经细胞瘤地中海贫血伴精神发育迟滞综合征基因(ATRX)的表达模式。方法选择中枢神经细胞瘤19例、弥漫性星形细胞瘤IDH突变型(WHO Ⅱ级)20例和间变型弥漫性星形细胞瘤IDH突变型(WHO Ⅲ级)10例,采用免疫组化染色法检测ATRX蛋白表达,观察ATRX在中枢神经细胞瘤的表达模式。结果 ATRX在中枢神经细胞瘤细胞核中呈弥漫阳性,表达率为100%(19/19);ATRX在弥漫性星形细胞瘤IDH突变型和间变型弥漫性星形细胞瘤IDH突变型的病例中阴性,失表达率分别为80%(16/20)和60%(6/10);ATRX失表达率在中枢神经细胞瘤与星形细胞瘤中的差异显著(P<0.001)。结论 ATRX在中枢神经细胞瘤中的表达无缺失,在星形细胞瘤与中枢神经细胞瘤鉴别中有一定的意义。

TAS102选择性抑制ATRX缺失胶质瘤细胞的实验研究

目的探讨TAS102对α地中海贫血伴智力低下综合征X连锁基因(α-thalassemia mental retardation X-linked,ATRX)缺失U87胶质瘤细胞体外增殖的影响及机制。方法选择ATRX野生型U87细胞和ATRX敲除的U87^ATRX-/-胶质瘤细胞为研究对象,设立U87对照组、U87药物组、U87^ATRX-/-对照组、U87^ATRX-/-药物组,采用CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞周期的变化,β-半乳糖苷酶染色检测细胞老化情况,采用免疫荧光和Western blot检测DNA损伤识别反应通路活化及相关蛋白的表达情况。结果CCK-8检测结果显示,经不同浓度的TAS102培养72 h,U87^ATRX-/-药物组细胞存活率低于U87药物组,U87组细胞IC50值为(10.50±1.52)mg/L,U87^ATRX-/-细胞IC50为(4.72±0.48)mg/L,与U87组细胞相比,U87^ATRX-/-组IC50更低(P<0.01)。细胞周期检测示:U87对照组G2期细胞百分比为(17.86±2.12)%,药物组G2期细胞百分比为(23.04±3.57)%;U87^ATRX-/-对照组G2期细胞百分比为(18.94±3.05)%,药物组为(61.67±1.13)%,与U87药物组相比,U87^ATRX-/-药物组G2期细胞明显增多(P<0.01)。β-半乳糖苷酶染色结果示:U87对照组染色阳性细胞百分比为(7.73±0.71)%,药物组为(29.55±4.12)%,U87^ATRX-/-对照组为(8.70±2.55)%,药物组为(53.64±7.03)%,与U87药物组相比,U87^ATRX-/-药物组染色阳性细胞增多(P<0.01)。免疫荧光检测53BP1的表达显示,U87对照组染色阳性细胞百分比为(14.5±7.39)%,药物组为(21.19±3.68)%,U87^ATRX-/-对照组为(16.75±2.97)%,药物组为(54.27±8.38)%,U87^ATRX-/-药物组53BP1表达较U87药物组明显增多(P<0.05)。Western blot检测不同时间点ATR、CHK1、ATM、CHK2的磷酸化水平,U87^ATRX-/-药物组ATM/CHK2的磷酸化水平增高。结论TAS102能够选择性抑制U87^ATRX-/-胶质瘤细胞增殖,通过诱导细胞衰老和活化ATM-CHK2损伤反应通路,引起细胞周期阻滞于G2期,抑制细胞增殖。

ATRX在胶质瘤诊断及患者预后评估中的应用

目的探讨中国成人幕上胶质瘤中ATRX和p53基因突变在胶质瘤诊断及预后评估中的指导价值。方法选择整合诊断为WHOⅡ级、Ⅲ级的星形细胞瘤，IDH突变型；弥漫性星形细胞瘤，IDH野生型；WHOⅡ级、Ⅲ级的少突胶质细胞瘤，IDH突变型伴1p／19q共缺失，合计83例。采用免疫组织化学染色法检测ATRX蛋白失表达及p53蛋白过表达情况。分析两者的相关性及其与患者总生存期的关系。结果WHOⅡ级、Ⅲ级星形细胞瘤，IDH突变型及WHOⅡ级、Ⅲ级少突胶质细胞瘤，IDH突变型伴1p／19q共缺失的病例中的ATRX失表达率为85．19％（23／27）和0（0／53，P〈0．01）。在ATRX失表达病例中69．57％（16／23）同时存在p53过表达，二者密切相关（P〈0．01）。生存分析结果提示存在ATRX失表达、p53阴性的患者的总生存期长（P=0．013）。结论ATRX基因突变是较低级别星形细胞起源肿瘤的分子遗传特征之一，可以协助p53用于星形细胞瘤的诊断。ATRX联合p53基因突变检测可用于指导胶质瘤的预后评估。

ATRX和P53蛋白在弥漫性胶质瘤中的表达及意义

目的 探讨ATRX和P53基因突变在中国人弥漫性胶质瘤分类中的指导作用.方法 收集2016年至2017年各级星形细胞瘤（IDH突变型或IDH野生型）、各级少突胶质细胞瘤89例.采用免疫组织化学染色法检测ATRX蛋白失表达及突变P53蛋白过表达,分析二者在不同类型弥漫性胶质瘤中的表达特点.结果 星形细胞瘤（IDH突变型）ATRX失表达比（17/24）高于少突胶质细胞瘤（3/16）,P〈0.01;星形细胞瘤（IDH突变型）P53过表达比（15/24）高于少突胶质细胞瘤（1/16）,P〈0.01;星形细胞瘤（IDH突变型）ATRX失表达比为71％（17/24）,高于星形细胞瘤（IDH野生型）的41％（20/49）,P〈0.05.结论 ATRX和P53基因突变是星形细胞瘤（IDH突变型）的分子遗传特征之一,可以辅助用于星形细胞瘤的鉴别诊断.