含肟酯/醚结构的枯茗醛衍生物合成及抑菌活性

以孜然精油的主要成分枯茗醛为原料,设计合成了系列含肟酯/醚结构的枯茗醛衍生物18个,并通过^(1)H NMR、^(13)C NMR和HRMS进行了结构表征;以地毯草黄单胞柑橘致病变种和水稻黄单胞菌为对象,采用浑浊度法对目标化合物的抑菌活性进行了评估。抑菌活性测试结果表明:化合物(Z)-4-异丙基苯甲醛-O-(3-甲氧基苯甲酰基)肟(4i)在质量浓度50μg·mL^(-1)下对地毯草黄单胞柑橘致病变种的抑制率为3280%,优于对照药剂叶枯唑(1688%);目标化合物(Z)-4-异丙基苯甲醛-O-(苯甲酰基)肟(4d)、(Z)-4-异丙基苯甲醛-O-(4-三氟甲基苯甲酰基)肟(4h)和(Z)-4-异丙基苯甲醛-O-(3-甲氧基苯甲酰基)肟(4i)在质量浓度100μg·mL-1下对地毯草黄单胞柑橘致病变种的抑制率分别为60.3%、31.37%和33.30%,优于对照药剂叶枯唑的抑制率(45.82%)。

PCR、DIA与致病性测定法检测柑桔溃疡病菌的比较

依据柑桔溃疡病菌全基因组序列的独有保守区域设计筛选出的特异性引物对JYF5/JYR5,用于柑桔溃疡病菌的PCR检测,具有很好的检测特异性、灵敏度和稳定性。同时比较了PCR与DIA(斑点免疫结合技术)及传统的致病性测定法在检测灵敏度、稳定性及田间样品检出率等方面的差异。结果表明,PCR的检测灵敏度可达103～104cfu·ml-1(每个反应体积约10个细菌),明显高于DIA(104～105cfu·ml-1,每个样点约300个细菌);PCR、DIA和致病性测定法检测田间显症样品的检出率均可达到100%,而检测柑桔无症样品的检出率依次降低。此外,通过排除PCR抑制物质和在PCR反应体系中加入终浓度为15%的甘油,有效地降低了检测中存在的假阴性。

柑橘溃疡病菌PCR快速检测技术研究初报

应用柑橘溃疡病菌独有的保守基因设计并合成了引物对,建立柑橘溃疡病菌PCR检测技术。PCR检测结果 表明,来源于不同产地的病菌菌株均可扩增出靶标带,而水稻白叶枯病菌不能扩增出靶标带;2×10～2×105 个·ml-1的溃疡病病菌悬浮液也均可扩增出靶标带,说明该PCR技术具有很强的特异性和检测灵敏度。研究结果也 表明,来源于福建、四川和安徽的柑橘溃疡病菌具有同源性。

4种药剂防治柑橘溃疡病的田间试验

柑橘溃疡病是一种严重危害柑橘的细菌性病害,是国内外检疫的对象。其病原菌是薄壁菌门黄单胞杆菌属地毯草黄单胞杆菌柑橘致病变种Xanthomnoasxaonpoodi,p.v.citriv.citri。近几年,此病害在我国柑橘产区的发生、流行有加重趋势,我国云南、广西、广东、海南、台湾、福建、浙江、江苏、湖北、湖南、江西各省区和四川、贵州的部分地区均有不同程度的发生和流行。柑橘溃疡病为害叶片、枝和果实，严重的造成大量落果、落叶或枝梢枯死，以及幼树死亡，果实染病后影响外观品质和商品价值，此病易传播难防治，一直是柑橘尤其是橙类生产上的难题。

钙对枳生长发育及柑橘溃疡病抗性的影响

【背景】柑橘溃疡病是由柑橘黄单胞杆菌柑橘致病变种(Xanthomonas citri subsp.citri,Xcc)引起的细菌性病害,可侵染枝、叶、果,危害几乎所有的柑橘主栽品种。前期对湖南省39个柑橘园的调查结果显示柑橘果园土壤酸化和交换性钙缺乏严重,叶片中均存在钙缺乏现象。钙是植物所需大量元素之一,钙缺乏会造成植物营养失衡,生长势下降,植物免疫水平受影响。然而,钙元素对柑橘溃疡病抗性的影响尚不明确。【目的】分析对柑橘溃疡病敏感的枳(Poncirus trifoliata)在不同钙浓度处理下叶片注射接种Xcc后的致病差异,探讨钙在Xcc侵染枳叶片过程中的作用。【方法】采用沙培法对枳实生苗进行0、0.75、3、30 mmol·L^(-1)钙浓度处理,分别测定枳生长期的生物量、叶绿素a和b浓度、根系和叶片钙元素含量、观察根系活性氧(ROS)的产生和胼胝质沉积,并分析枳叶片接种Xcc后细胞壁合成相关基因及免疫途径相关基因诱导表达变化特征。【结果】以3 mmol·L^(-1)钙处理为对照,0、0.75和30 mmol·L^(-1)钙处理后,枳地上部和地下部生长发育均受抑制,叶绿素a和b浓度降低;根系与叶片中的钙含量与外源钙施加量成正比;不同钙浓度处理后根系中产生ROS和胼胝质沉积,在3 mmol·L^(-1)处理时达到最大值;枳叶片接种Xcc后,随着钙浓度增加,叶片症状逐渐减轻,但Xcc的生长量无明显差异;相较于3 mmol·L^(-1)处理,参与细胞壁合成相关基因PtCESA4在0 mmol·L^(-1)处理下受Xcc诱导先上调表达后下调表达,在30 mmol·L^(-1)处理下受Xcc诱导上调表达,PtPME和PtFLA在0 mmol·L^(-1)处理下受Xcc诱导下调表达,在30 mmol·L^(-1)处理下受Xcc诱导上调表达;叶片接种Xcc 0、2、4、6 dpi后免疫途径相关基因PtGSL、PtGST1、PtWRKY22在30 mmol·L^(-1)处理下受Xcc诱导表达水平高于0和3 mmol·L^(-1)处理。【结论】钙缺乏和过量均会影响枳生长发育,引起叶片失绿,根系产生ROS和胼胝质沉积均有所减少。施钙后接种Xcc,叶片表面的感病症状明显减弱,但菌含量与对照无显著差异。钙可能通过调控细胞壁合成相关基因促使细胞壁增厚,从而抑制Xcc突破叶片表皮形成典型症状。

红掌不同品种对红掌细菌性疫病的抗病性测定

采用分离自不同红掌品种的19个地毯草黄单胞花叶万年青致病变种(Xanthomonas axonopodispv.dieffenbachiea)菌株,通过人工剪叶接种方法,对我国主栽的22个不同红掌品种进行细菌性疫病抗性测定和评价,结果表明,22个红掌品种被区分为高抗、中抗、中感和高感等4类抗病等级,其中高抗品种3个、中抗品种12个、中感品种6个、高感品种1个,未发现免疫品种。此外,研究还发现,在19个供试菌株中,Xad10致病力最弱,Xad3致病力最强。

进境菜豆种子中普通细菌性疫病菌的分离和鉴定

对经甘肃口岸进境的30批菜豆Phaseolus vulgaris种子进行了普通细菌性疫病菌的检测,利用选择性培养基MT从波兰进境菜豆种子上分离到1株细菌597,对该分离物进行菌落形态特征观察、致病性测定、16S rDNA及16S-23S rDNA ITS序列分析和特异性PCR检测。结果表明,该分离物在MT培养基上菌落呈黄色、圆形、黏稠、表面光滑向外隆起、菌落周围有水解圈。分离物597接种菜豆幼苗后导致叶片枯萎,接种点干枯。结合菌落形态、16S-23S rDNA ITS序列、特异性PCR检测结果,将分离物597鉴定为地毯草黄单胞杆菌菜豆致病变种Xanthomonas axonopodis pv.phaseoli。

柑橘溃疡病菌噬菌体的分离鉴定

从中国9个地区采集柑橘溃疡病样本,并通过单菌落形态,PCR特异性引物和16S rDNA测序对地毯草黄单胞菌柑橘致病变种进行分离鉴定,获得17株目标菌。以地毯草黄单胞菌柑橘致病变种标准菌株ACCC 03526为宿主菌,采用双层平板法从南京市污水样本中分离其噬菌体,获得1株地毯草黄单胞菌柑橘致病变种烈性噬菌体,命名为Xac-P9。通过透射电镜对噬菌体Xac-P9形态大小进行观察,结果显示Xac-P9头部直径约58 nm,属于有尾噬菌体目(Caudovirales),短尾噬菌体科(Podoviridae)。对Xac-P9的裂解谱、最佳感染复数、一步生长曲线、热稳定性、pH稳定性、紫外线敏感性及杀菌速率等生物学特性进行测定,结果表明,Xac-P9对17株来源不同的Xac菌株的裂解率为100%,裂解谱宽;最佳感染复数为0.001,此时所获噬菌体效价为6.6×109 PFU·mL^(-1);一步生长曲线表明:Xac-P9潜伏期为20 min,爆发时间为60 min,裂解量为132;Xac-P9在40~60℃条件下具有一定耐受性,在pH 3~13环境中具有活性,对紫外辐射不敏感;30 min对宿主菌ACCC 03526的杀菌率可达90%,150 min后可将宿主菌全部杀灭。

百日草细菌叶斑病种子处理技术

[目的]为了筛选有效防治百日草细菌性叶斑病的药剂。[方法]采用抑菌圈法进行了室内药剂筛选,在此基础上比较了不同药剂、不同质量浓度及不同处理时间对种子萌发、出苗率、发病率、消毒效果及防治效果的影响。[结果]多抗霉素和四霉素室内抑菌效果最好,在300 mg/L时,平均抑菌圈直径大于30 mm,其次是甲醛溶液、过氧乙酸溶液(甲溶液)和30%过氧化氢溶液。结合出苗率、发病率、成苗率和防治效果,多抗霉素(科生)200~300 mg/L处理30~40 min种子消毒效果较好,防治效果达到了100%。[结论]筛选出了5%多抗霉素可以用于种子处理防治百日草细菌叶斑病,研究结果为有针对性的和有效防治该病害提供了科学依据。

菜豆普通细菌性疫病菌在土壤和植株残体中的越冬能力

为评估菜豆普通细菌性疫病菌地毯草黄单胞杆菌菜豆致病变种或褐色黄单胞菌褐色亚种在土壤及植物残体中的越冬能力,对采自黑龙江、内蒙古、山西、河北及新疆的18块菜豆生产田的20份土壤及14份植物残体样品进行病原菌分离和鉴定。在MT选择性培养基上有12个土壤样品和13个植株残体样品提取液产生典型的类似黄单胞菌菌落。选取29个分离物进行致病性测定,有27个分离物对菜豆品种"英国红"致病。利用地毯草黄单胞杆菌菜豆致病变种和褐色黄单胞菌褐色亚种的特异性引物X4c/X4e及褐色黄单胞菌褐色亚种特异性引物Xf1/Xf2对29个分离物进行多重PCR检测,其中17个分离物为地毯草黄单胞杆菌菜豆致病变种,10个分离物为褐色黄单胞菌褐色亚种。结果表明,菜豆普通细菌性疫病菌可以在黑龙江、内蒙古、山西、河北的一些菜豆种植区的土壤及植株残体中越冬存活。