地高辛标记的DNA探针和ID-ELISA检测芜菁花叶病毒的比较

以克隆的芜菁花叶病毒（TurnipmosaicVitusTuMV）外壳蛋白基因的重组质粒PGT3为模板，用PCR的方法合成了长度为0．87kb的地高辛标记的双链DNA探针。用其进行了十字花科蔬菜病毒检测研究。在斑点杂交中，探针检测TuMVRNA的灵敏度为250pg，相当于5ng的病毒，比ID－ELISA检测TuMV的灵敏度高6倍。

地高辛标记探针检测重组双功能水蛭素中的DNA残留量

为检测注射用重组双功能水蛭素半成品中的DNA残留量 ,应用地高辛标记重组双功能水蛭素工程菌DNA ,并以此为DNA探针进行点杂交 ,同时做特异性及灵敏度实验。结果证明 ,该方法检测最低限值可达1pg ,且重复性好 ,特异性强 ,操作较简便 。

地高辛标记探针检测重组白细胞抑制因子-水蛭肽嵌合蛋白宿主DNA残留量的研究

重组白细胞抑制因子一水蛭肽嵌合蛋白（recombinantneutrphilinhibitoryfactorandhiruloghybrid，TNHH）是一种通过基因工程技术改造的新型嵌合蛋白，临床上可用于急性脑栓塞后的脑组织损伤修复，减少脑水肿，防止微小血栓形成从而改善微循环，是一种有前景的心脑血管疾病治疗创新药物，

转基因油菜地高辛标记DNA探针杂交检测方法的建立

通过PCR扩增法制备转基因油菜外源筛选基因FMV35S启动子的DIG-11-dUTP标记DNA探针,与该基因PCR扩增产物进行Southern杂交,通过显色反应对商品化转基因油菜进行检测。本研究对反应基片带正电荷的尼龙膜和硝酸纤维素膜进行了比较,并比较了不同固定条件和杂交条件下的杂交结果。尼龙膜较之硝酸纤维素膜可更好的结合DNA片段,经紫外线照射交联5 分钟,与含甲酰胺的杂交液在45℃杂交30 min结果较为理想。

用地高辛标记的染色体特异性DNA探针检测石蜡切片组织细胞中期核染色体异常的敏感方法

为了增强福尔马林固定，石蜡包埋组织切片中细胞中期核染色体原位杂交效果，我们对组织的预处理条件进行了改良，结果发现，应用微波加热，硫氰酸钠处理后蛋白酶消化时间明显缩短，减轻了对组织形态结构的破坏，在大多数切片中获得均匀一致的杂交信号。提示本改良方法可能成为肿瘤发生学研究的重要工具。

地高辛标记DNA分子中W316bp特异片段成探针的研究

以W (5’ CGGCCCCGGT 3’)为随机引物通过RAPD(RandomAmplifiedPolymorphicDNA) PCR扩增技术从高产王浆西蜂的不同三品系 (浙农大、平湖和萧山等意蜂 )的DNA分子中获得的共同特异W 3 1 6bp(bp ,basepair)片段 ,用非放射性标记物地高辛 (digoxigenin ,DIG)使用随机引物标记法制备成DIG W 3 1 6bp探针。结果 :此探针可与高产王浆西蜂的DNA基因组及扩增产物分别进行斑点杂交。

地高辛标记DNA探针对茶园NPV的检测

研究合成了茶尺蠖核型多角体病毒(Ectropis oblique nuclear polyhedrosis virus,EcobNPV)的地高辛标记DNA探针,采用斑点杂交检测茶园几种核型多角体病毒。结果表明,以含EcobNPV克隆片段的大肠杆菌菌液为样品时,斑点杂交检测灵敏度为80 CFU/μL。以感染病毒致死的茶尺蠖幼虫为试材,提取病毒基因组DNA,采用斑点杂交法检测均得到强的杂交信号。斑点杂交检测可有效区分茶园中几种核型多角体病毒,表明地高辛标记DNA探针的特异性好。

地高辛标记的DNA探针检测核酸疫苗中宿主菌基因组DNA的含量

将合成的引物与宿主菌的染色体模板 DNA进行 PCR扩增的核糖体 DNA片段 ,以地高辛进行标记 ,与待测 DNA样品进行点杂交 ,确定制备的乙肝 DNA疫苗中其宿主菌基因组含量 <15 ng/μg质粒 DNA。这提示地高辛标记的探针用于检测基因组 DNA的方法灵敏。

用地高辛配基标记DNA探针及其应用

核酸杂交技术中,同位素标记DNA探针是最常用的技术,其优越性是检测灵敏度高,但同时有很多缺点。80年代初,Langer等开始用生物素标记多核苷酸探针。随着方法的不断完善,近年来已用于基因诊断、定位及表达等研究。本文报道一种新的非同位素标记技术,即用地高辛配基(digoxigenin-dUTP)标记DNA探针,其原理是具有类固醇半抗原性质的地高辛配基,通过随机引物(random pr-imer法)掺入到DNA上,与靶DNA进行碱基互补同源序列结合形成杂交产物。

地高辛标记探针检测生物制品中残余DNA含量

用地高辛标记探针检测由传代细胞系生产的人用精制狂犬病疫苗、重组 (CHO细胞 )乙肝疫苗、出血热疫苗及痢疾多糖结合疫苗原液中残余DNA含量。结果表明 ,该方法特异性强 ,灵敏度高 。

地高辛素标记的探针快速检测HBV-DNA实验研究

应用核酸分子杂交技术,检测血清中HBV-DNA已成为诊断乙型肝炎病毒感染和判断其复制状态的重要手段。用同位素(32P)标记核酸探针,进行分子杂交,虽然灵敏度高,但是由于具有半衰期短、探针不稳定、价格昂贵、对人体有害等因素,使之推广应用受到限制。目前国内外已有地高辛素（Dig）标记HBV-DNA探针进行斑点杂交实验,敏感性接近同位素探针水平。我们参照BM公司试剂盒方法及有关文献,建立Dig标记HBV基因探针方法。

地高辛标记探针与生物素标记探针用于斑点杂交检测HBV DNA的初步研究

为研究地高辛标记和生物素标记核酸探针斑点杂交检测HBVDNA的敏感性、特异性和稳定性，用两种探针和(32)P标记探针进行平行检测对照．结果表明，地高辛探针检测灵敏度为0．1Pg，已达到(32)P中标记探针水平。生物素探针为1～10Pg。两种探针与32P标记探针相比。符合率分别96．65％和89．13％；敏感性分别为94．44％和83．33％；特异性分别为96．43％和92．86％。两种探针在－20℃存放6月后检测结果前后一致。研究结果表明，地高辛标记探针和生物素标记探针斑点杂交检测HBV．DNA都具有较高的敏感性、特异性和稳定性，其中以地高辛标记探针更优。

地高辛标记探针检测Vero细胞残余DNA试验条件的改进

目前，应用地高辛标记探针检测Veto细胞残余DNA含量仍是最常用的检测方法，该方法具有特异性强、无放射污染、操作简便等特点。在实际操作中，地高辛探针的灵敏度及杂交的条件对检测结果均有很大的影响。为此，我们就提高探针灵敏度及优化杂交条件进行了摸索。

地高辛标记DNA探针应用于凝胶转移电泳

半抗原DIG-ddUTP与DNA连接,以此作为探针可以与其相识别的蛋白质相结合,再用带有碱性磷酸的抗体处理,形成的复合物可作用于底物CSPD,使其产生萤光,而被x光片记录下来。

热启动PCR快速制备地高辛标记探针

介绍了一种在热启动ＰＣＲ中，以Ｄｉｇ－１１－ｄＵＴＰ部分代替ｄＴＴＰ，从少量基因组ＤＮＡ中快速制备大量的地高辛标记的探针的方法，此探针灵敏度达０．０３ｐｇ，并只和相关的ＤＮＡ特异杂交。

地高辛标记探针检测猪胸膜肺炎放线杆菌的研究与应用

利用PCR反应扩增出胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣ基因650 bp的DNA,回收并纯化PCR产物,用地高辛标记,制备出地高辛标记的核酸探针。该探针与不同血清型的胸膜肺炎放线杆菌均能发生特异性杂交,而与大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、猪肺炎支原体、支气管败血波氏杆菌等细菌的核酸杂交均为阴性。对胸膜肺炎放线杆菌的最低检出限量为10×102 个放线杆菌。对疑似胸膜肺炎放线杆菌感染病变组织检测结果表明,在扁桃体、鼻腔、气管、肺脏均可检测出胸膜肺炎放线杆菌,以扁桃体的检出率最高。为猪胸膜肺炎放线杆菌的诊断和流行病学调查提供了良好的方法。

PCR制备地高辛配基标记的探针检测登革病毒核酸

用聚合酶链反应(PCR)技术,以重组质粒PDEⅡ305 DNA为模板,在底物中补充标记的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸(DIG-dUTP),经扩增反应制备了地高辛配基标记的登革病毒2型(DEN_2)cDNA探针。DNA-RNA斑点杂交表明该探针有DEN_2型特异性,可检出0.1Pg DEN_2-RNA。PCR扩增标记只用10 ng模板DNA,数小时内可制备约Iug标记的cDNA探针,而用六聚核苷酸随机引物(RHP)标记,从质粒DNA酶切、片段回收到标记获得探针,至少需数10 h。可见PCR技术直接制备地高辛配基标记的cDNA探针较方便,快速、标记率高、特异性强,具有一定的应用前景。

聚合酶链反应联合地高辛标记探针诊断病毒性心肌炎分析

目的:评价基因检测手段在病毒性心肌炎(VM C)病原学诊断中的作用。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、地高辛标记CBV-cDNA探针检测了120例心肌炎患者血标本中的柯萨奇B组病毒(CBV)。结果:RT-PCR阳性检出率:心肌炎组为48.33%,对照组4.41%(P<0.01)。斑点杂交阳性检出率:心肌炎组为51.67%,对照组4.41%(P<0.01)。结论:PCR联合地高辛标记探针诊断病毒性心肌炎,不失为一种敏感、特异、简便、可靠的方法。