地鳖肽对CCl4诱导的慢性肝损伤小鼠的抗氧化保护作用的研究

目的探讨地鳖肽对CCl4致诱导的慢性肝损伤小鼠的抗氧化保护作用。方法小鼠随机分为正常组、模型组、地鳖肽组(50、100、200 mg/kg)及阳性药组,正常组小鼠灌服生理盐水,地鳖肽组小鼠每天灌服不同剂量地鳖肽、阳性药组小鼠每天灌胃水飞蓟素(100 mg/kg),连续6周,同时除正常组小鼠腹腔注射花生油溶液外,其余组小鼠腹腔注射0.1%CCl4花生油溶液10 m L/kg,每周2次连续6周,末次给药24 h后小鼠称重处死取肝组织,HE染色观察肝组织学变化,分光光度法检测肝功能酶(AST、ALT)、抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)、过氧化物(MDA),荧光定量PCR法测定炎症因子、凋亡因子、纤维化因子基因表达,ELISA测定炎症因子蛋白水平。结果显微镜观察结果正常组小鼠肝细胞未见异常,模型组小鼠肝细胞出现充血、坏死、纤维化现象、肝小叶消失,地鳖肽组小鼠肝细胞形态结构损伤,随地鳖肽剂量增加肝细胞损伤程度明显减弱,小鼠肝脾指数明显低于模型组;与模型组比较,地鳖肽组小鼠血清中AST、ALT活力显著降低、肝中MDA含量明显降低、抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)活力显著提高,炎症因子(IL-6、TNF-α、i NOS)蛋白与基因表达水平均显著降低,促凋亡因子(Bax、Caspase-3)和纤维化因子(α-SMA、TGF-β)基因水平表达也明显降低。结论地鳖肽可有效改善CCl4致小鼠慢性肝损伤,其保护效应可能与地鳖肽抗氧化作用密切相关。

地鳖肽对氧化应激肉仔鸡生长性能、肉品质、脏器指数和抗氧化能力的影响

本试验旨在探究地鳖肽对氢化可的松诱导的氧化应激肉仔鸡生长性能、肉品质、脏器指数和抗氧化能力的影响。选用180只1日龄健康爱拔益加(AA)肉仔鸡,随机分为5组,分别为对照组、模型组(25 mg/L氢化可的松)和3个地鳖肽组[0.4、0.8和1.6 g/kg BW,每组6个重复,每个重复6只鸡。从第4天开始,3个地鳖肽组在饮水中加地鳖肽至第21天;从第8天开始,除对照组外,其余各组均在饮水中加氢化可的松,连续5 d。试验期21 d。结果表明:1)14日龄时,模型组肉仔鸡的血清皮质酮含量显著高于对照组和地鳖肽组(P<0.05)。2)1~14日龄时,与对照组相比,模型组肉仔鸡的平均日增重(ADG)显著降低(P<0.05),料重比(F/G)显著增加(P<0.05);与模型组相比,地鳖肽组的F/G显著降低(P<0.05)。15~21日龄时,模型组的ADG和平均日采食量(ADFI)显著低于对照组(P<0.05)。1~21日龄时,模型组的ADG和ADFI显著低于对照组(P<0.05),F/G显著高于对照组(P<0.05);与模型组相比,0.4和1.6 g/kg BW地鳖肽组的F/G显著降低(P<0.05)。3)14日龄时,与对照组相比,模型组肉仔鸡的胸肌p H45 m in和红度(a*)值显著降低(P<0.05),胸肌、腿肌滴水损失显著升高(P<0.05);与模型组相比,0.8 g/kg BW地鳖肽组的胸肌p H45 m in显著升高(P<0.05),胸肌滴水损失显著降低(P<0.05),0.4和1.6 g/kg BW地鳖肽组的腿肌滴水损失显著降低(P<0.05)。21日龄时,与模型组相比,0.4 g/kg BW地鳖肽组的胸肌a*值显著升高(P<0.05),胸肌滴水损失显著降低(P<0.05)。4)14日龄时,模型组肉仔鸡的脾脏、胸腺和法氏囊指数显著低于对照组(P<0.05);21日龄时,模型组的法氏囊指数显著低于对照组和1.6 g/kg BW地鳖肽组(P<0.05)。5)14日龄时,模型组肉仔鸡的肝脏和胸肌超氧化物歧化酶(SOD)活性显著低于对照组(P<0.05),肝脏和胸肌谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著低于对照组和0.4 g/kg BW地鳖肽组(P<0.05),肝脏和胸肌过氧化氢酶(CAT)活性显著低于对照组和0.8和1.6 g/kg BW地鳖肽组(P<0.05)。14和21日龄时,模型组的肝脏和胸肌丙二醛(M DA)含量显著高于对照组(P<0.05)。以上结果提示,地鳖肽可有效缓解氧化应激状态下肉仔鸡的应激反应,促进肉仔鸡生长,改善肉品质,提高机体抗氧化能力。

地鳖肽提取物对小鼠体内抗氧化酶活性和mRNA表达的影响

【目的】探明地鳖肽对小鼠体内抗氧化能力及其作用机制的影响。【方法】小鼠灌服地鳖肽提取物(0、40、80、160 mg/kg)连续20 d,采用分光光度法检测小鼠肝肾组织及血清中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,硫代巴比妥酸(TBA)法检测丙二醛(MDA)含量,荧光实时定量PCR分析抗氧化酶m RNA表达。【结果】与对照组相比,地鳖肽组小鼠肝脏、肾脏及血清中抗氧化酶活力明显升高;地鳖肽组小鼠组织中MDA含量显著降低;肝脏中SOD1、SOD2及CAT的m RNA表达量均显著高于对照组,肾脏中SOD1、SOD2、CAT及GSH-Px的m RNA表达量与对照组相比显著提高。【结论】地鳖肽提取物抑制小鼠体内组织中脂质过氧化物生成,提高抗氧化酶活力和上调抗氧化酶基因表达,可能是通过调节抗氧化酶基因的表达从而发挥抗氧化作用。

地鳖肽对C2C12细胞氧化损伤的保护作用

【目的】探讨地鳖肽对过氧化氢诱导的C2C12细胞氧化损伤的保护作用。【方法】体外培养C2C12细胞,H2O2处理细胞造成氧化损伤,叔丁基对苯二酚及地鳖肽处理细胞24h;采用MTT、分光光度计、免疫荧光、Western Blot、RT-PCR法分别检测细胞活力、抗氧化酶活力及过氧化物、Nrf2核移位及相关因子基因表达。【结果】与对照组相比,H2O2组对C2C12细胞的损伤明显;与H2O2组相比,地鳖肽能够显著缓解C2C12细胞活力的降低,提高超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶活力及其基因表达,抑制脂质过氧化物MDA的产生,地鳖肽促进Nrf2核移位以及Nrf2和HO-1蛋白表达,地鳖肽促进抗氧化通路关键因子Nrf2及其下游抗氧化酶基因表达上调;地鳖肽作用效果与叔丁基对苯二酚一致。【结论】在细胞氧化损伤状态下,地鳖肽可能通过激活Nrf2-ARE信号通路,提高抗氧化酶活力及上调其基因表达实现其抗氧化保护作用。

地鳖肽对四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

【目的】探明地鳖肽对四氯化碳(CCl_4)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。【方法】取60只小鼠分溶剂组、模型组(CCl_4)、地鳖肽组、阳性药物组,灌服不同剂量地鳖肽提取液和生理盐水及保肝药,每天1次连续7d,末次给药2h后除溶剂组小鼠外都腹腔注射0.1%CCl_4,制备血清和肝组织匀浆,ELISA和PCR等方法检测血清中ALT和AST活力,肝组织中SOD、GSH-Px、CAT活力和MDA含量,组织中TNF-α、IL-6和iNOS含量及mRNA表达;显微镜观察肝组织结构。【结果】与模型组比较,地鳖肽组小鼠血清中ALT和AST活力极明显降低,肝组织中抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px活力显著提高,但其MDA含量明显降低;肝组织中TNF-α、IL-6和iNOS含量极显著降低及mRNA表达量明显下调;模型组小鼠肝组织结构损伤明显,而地鳖肽组小鼠肝组织结构损伤明显缓解。【结论】地鳖肽对CCl_4诱导的小鼠急性肝损伤有保护作用。

地鳖肽对H_2O_2刺激鸡骨骼肌卫星细胞增殖的影响

【目的】探讨地鳖肽对H_2O_2刺激的肌卫星细胞增殖的影响。【方法】采用两步酶消化法体外分离培养鸡骨骼肌卫星细胞(SCs),培养基中加入不同浓度地鳖肽培养细胞24h后H_2O_2刺激8h,免疫荧光鉴定SCs细胞,MTT法检测细胞存活情况,荧光实时定量PCR分析增殖调控基因表达水平。【结果】分离培养SCs表达Pax7的阳性细胞率达95%以上,两步酶消化法获得骨骼肌卫星细胞;中浓度H_2O_2单独处理SCs细胞8h后细胞活力下降为65.16%,而当不同浓度地鳖肽预处理SCs细胞后H_2O_2致细胞活力下降得到缓解;与正常组相比,H_2O_2降低了肌卫星细胞中Pax7、MyoD和Myf5基因的相对表达量,不同浓度地鳖肽预处理均能显著缓解H_2O_2导致的增殖调控基因表达降低。【结论】地鳖肽能显著提高SCs增殖调控因子的转录水平,改善H_2O_2刺激对SCs增殖的抑制作用。

地鳖肽提取物对H_(2)O_(2)刺激C2C12细胞肌调节因子基因表达的影响

探究地鳖肽提取物(Eupofyphaga sinensis peptide extract,ESP)对过氧化氢(H_(2)O_(2))刺激的C2C12细胞肌调节因子基因表达的影响。体外培养C2C12细胞其中培养基分别添加ESP和叔丁基对苯二酚(TBHQ)处理细胞诱导其分化融合9 d,除对照组外所有组细胞在试验结束前8 h培养基添加H_(2)O_(2)处理细胞;采用RT-qPCR和免疫荧光法检测肌调节因子基因和蛋白表达,细胞染色和显微镜观察细胞形态。对照组可见诱导分化融合9 d的C2C12细胞出现成熟多核肌管,随着细胞培养时间延长肌调节因子MyoG基因表达增加;与对照组比较,H_(2)O_(2)组C2C12细胞增殖调节因子(Pax7、Myf5、MyoD)基因表达显著降低,在细胞分化不同时间C2C12细胞分化调节因子(MyoD、MyoG、Myf6)mRNA表达显著下调,表达MyoG细胞阳性率和肌管融合率比对照组明显降低;与H_(2)O_(2)组比较,ESP组C2C12细胞增殖调节因子(Pax7、Myf5、MyoD)和细胞分化调节因子(MyoD、MyoG、Myf6)基因表达水平显著增加,表达MyoG细胞阳性率明显增加,其中细胞染色与镜下观察结果趋势一致。ESP能影响氧化应激C2C12细胞肌调节因子(Pax7、Myf5、MyoD、MyoG、Myf6)的基因表达,提高细胞增殖和分化融合能力,其机制可能与PGC-1α的激活有关。

地鳖多肽提取物的抗氧化衰老机制

目的探讨地鳖多肽(ESW polypeptide)提取物抗氧化衰老机制的研究。方法小鼠连续腹腔注射D-半乳糖20 d,建立衰老模型,同时小鼠灌服不同剂量地鳖多肽提取物每日(0、40、80、160 mg/kg),观察小鼠的正常活动、运动和耐应激能力。分别采用黄嘌呤氧化酶法、分光光度法检测小鼠血液和不同组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力,以及丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量;免疫荧光法检测细胞核转录因子2(Nrf2)在Caco-2细胞的表达。结果与对照和多肽组比较,衰老组小鼠体重增重缓慢、组织脏器系数降低、运动时间缩短、抗应激能力降低、组织中抗氧化酶活力降低。随着地鳖多肽剂量增加,多肽组小鼠体重增加明显,肝脏、脾脏和肾脏指数增加显著,小鼠静力和动力运动时间明显延长,小鼠耐缺氧、耐高温和运动时间延长并接近对照组,血液和不同组织中的SOD、CAT、GSH-PX活力及GSH含量显著提高,但MDA含量降低。与对照组比较,地鳖多肽组Caco-2细胞核内Nrf2表达量明显增加,接近阳性对照组。结论地鳖多肽可能通过启动Nrf2-ARE抗氧化信号通路,提高D-半乳糖致衰老小鼠抗应激和抗氧化能力,从而延缓小鼠氧化衰老。

地鳖多肽对北虫草虫草菌素产量的影响

目的:提高北虫草液体发酵虫草菌素产量。方法:以泰山北虫草菌为材料,比较液体发酵过程中菌丝体和发酵液中虫草菌素产量的变化,在虫草菌素产量达到最高的第7天,发酵液中虫草菌素产量是菌丝体的4倍。通过在液体发酵过程中添加地鳖多肽,研究地鳖多肽添加时间和添加量对发酵液中虫草菌素产量的影响。结果:在北虫草菌液体发酵的第3天添加4 mg地鳖多肽,继续发酵至第7天,发酵液中虫草菌素产量达到最高,为55.43μg/mL(p<0.01),接近于空白组的2倍。添加多肽不影响虫草菌素的代谢周期。结论:添加地鳖多肽可提高北虫草虫草菌素含量。