流行性出血热(EHF)地鼠肾细胞(GHKC)灭活疫苗的初步人体观察

用流行性出血热(EHF)病毒L99株(家鼠型)感染金黄地鼠肾细胞(GHKC),经福尔马林(0.025％)灭活制备EHF灭活疫苗(88-17批),经检定批准,肌肉(1ml)接种志愿者12人(IO人于0、7、28天,2人分别于0、7天及0、28天各一针),进行了安全性及抗体反应的初步人体观察。结果显示,此种疫苗对人体接种无明显不良反应。接种后,12名接种者IFA、ELI-SA及中和抗体(EFRNT)全部阳转,180天和360天后仍分别有10人血清中和抗体阳性。初步表明,此疫苗是安全的,可以有效诱导抗体产生,其中和抗体多数可持续一年以上。

狂犬病毒地鼠肾细胞适应株的选育

将aG株豚鼠脑组织毒种于原代地鼠肾细胞传代适应后，优选出一株感染地鼠肾细胞增殖滴度高，稳定性好并保持原株抗原性的新的适应株，其生物学性状和免疫原性研究结果表明，将有可能取代豚鼠脑毒种，生产出更为安全、有效的狂犬病疫苗。

应用区带离心法纯化地鼠肾细胞乙型脑炎灭活疫苗

目的应用区带离心法纯化原代地鼠肾细胞乙型脑炎灭活疫苗。方法浓缩的原代地鼠肾细胞乙脑灭活疫苗,经36％和60％不连续蔗糖密度、23 000r/min离心4h后,收取纯化的乙脑抗原组分,制成纯化乙脑疫苗。结果浓缩疫苗经一步区带离心纯化后,抗原效价提高3倍以上,蛋白去除99.5%以上。经稀释制成的半成品疫苗与未经浓缩的原疫苗相比,抗原效价提高4倍以上,蛋白去除99％以上。结论区带离心法可用于纯化地鼠肾细胞乙脑疫苗。

地鼠肾细胞狂犬病纯化疫苗临床研究观察

了解地鼠肾细胞狂犬病纯化疫苗接种安全性及有效性。分别以 1.0ml及 0 .5ml的剂量 ,按暴露后及暴露前免疫程序给 313人接种 ,用小鼠中和试验法检测血清中和抗体效价。结果显示 :临床副反应轻微 ,副反应率为0 .89%～ 15 % ;免疫全量疫苗和半量疫苗的人群均获保护力 ,抗体阳转率为 10 0 % ,免后抗体GMT滴度分别为35 .2IU/ml(n =32 )和 31.4IU/ml(n =37) ,经检验两组无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ;免疫全量疫苗和半量疫苗两组的免疫前、后相比 ,经检验有显著性差异 (P <0 .0 5 ) 。

流行性出血热病毒于原代地鼠肾细胞传代适应和适应株病毒的生物学性状研究

为提高流行性出血热病毒（简称EHFV）在金黄地鼠肾细胞（简称GHKC）的增殖力和原液的毒力满度，将6株乳鼠脑腔适应系毒株，在GHKC进行传代适应，各系毒株均传12代以上。适应后的毒株毒力满度明显升高而且稳定．适应株病毒ELISA、HA和RPHA抗原县均明显高于用乳鼠脑系毒株感染细胞。

原代地鼠肾细胞及狂犬病毒不同培养方式的研究

目的通过比较原代地鼠肾细胞在转瓶、微载体、细胞工厂的3种培养方式的培养效果,为原代地鼠肾细胞选择一种易扩大规模、培养高质量细胞的培养方式,进而提高狂犬病毒的产量。方法消化取得的细胞悬液分别在转瓶、微载体、细胞工厂中培养,通过显微镜观察细胞形态、计数等结果比对培养的差别。结果细胞工厂可以很好地培养原代地鼠肾细胞和狂犬病毒;而细胞在微载体上贴附性差,生长不好。结论实验结果表明细胞工厂可以取代转瓶,用于大规模培养原代地鼠肾细胞扩大狂犬病毒的产量。

柱层析法纯化人用地鼠肾细胞狂犬病疫苗

用Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－６Ｂ凝胶层析法纯化原代地鼠肾细胞狂犬病苗，可去除绝大部分杂蛋白，总蛋白含量减少９９．４％以上，纯化后抗原比活性提高２１０倍，单位疫苗剂量中牛血清含量降低１８．７倍以上。方法简单，价廉。

精制地鼠肾细胞狂犬病疫苗纯化工艺的建立

分别用Sepharose 4B、Sephacryl 2 0 0HR和Sepharose 6 Fastflow柱色谱进行地鼠肾细胞狂犬病疫苗浓缩原液纯化试验 ,试制精制地鼠肾细胞狂犬病疫苗。对疫苗的残余牛血清含量、效力、收获率和安全性进行检测 。

人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)基质残余蛋白标准品的建立

目的:研制用于人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)中地鼠肾细胞蛋白质残留量检测(ELISA法)的国家标准品。方法:分两步进行协作标定和量值溯源,第一步采用Lowry法对原代地鼠肾细胞蛋白质标准品原液进行赋值,第二步采用ELISA法对原代地鼠肾细胞蛋白质标准品进行赋值。结果:数据经统计学处理结果,最终原代地鼠肾细胞蛋白质标准品量值为4.0μg·mL^(-1),95%可信限为:(4.0±0.5)μg·mL^(-1)。结论:建立了国家原代地鼠肾细胞蛋白质标准品,赋值准确可靠、科学严谨,可用于人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)基质残余蛋白的质量控制。

浓缩地鼠肾细胞狂犬病疫苗与纯化Vero细胞狂犬病疫苗接种人体的血清学效果观察

为了解国产浓缩地鼠肾细胞狂犬病疫苗与法国纯化Vero细胞狂犬病疫苗接种人体后中和抗体产生情况。分别用两种疫苗接种 1 0人 ,用小鼠中和试验方法检测中和抗体滴度。国产疫苗五针全程免疫后 30天 (第一针接种后 6 0天 )可 1 0 0 %达到保护水平 ,法国疫苗在第一针接种后 30天 1 0 0 %达到保护水平。第一针接种后 1 4、30、6 0天时 ,前者抗体平均滴度分别是 0 0 6IU /ml、1 .0 2IU/ml、2 .0 7IU/ml;后者抗体平均滴度分别是 0 2 5IU /ml、3.2 4IU/ml、1 1 .86IU/ml,后者比前者产生抗体的滴度高 ,具有显著性差异 (P <0 0 2 )。

原代地鼠肾细胞乙脑灭活疫苗中残余细胞基质的检测

目的找出多批原代地鼠肾细胞乙型脑炎灭活疫苗高过敏反应发生率的原因，提出解决方案。方 法利用ＨＰＬＣ排阻层析结合ＥＬＩＳＡ方法相对定量地分析高反应性和无反应性疫苗的残余细胞基质成分，并利用 凝胶过滤柱层析去除疫苗中细胞源性杂质。结果高反应性疫苗中地鼠肾细胞基质成分的残留量偏高；利用常压 凝胶过滤柱层析法可将残留的细胞基质成分几乎完全去除。结论本次过敏反应事件是由部分疫苗中地鼠肾细 胞基质成分残留量偏高所致，用一步分子筛柱层析处理疫苗是一种简单有效的解决办法。

精制地鼠肾细胞狂犬病疫苗吸附条件的筛选试验

精制地鼠肾细胞狂犬病疫苗（PPHKRV）中含有一定剂量的佐剂，它可以提高疫苗的免疫原性，现已将AlPO4和Al(OH)3两种佐剂用于PHKRV中，比较不同浓度，不同吸附，pH和不同吸附时间疫苗效价，从中筛选最适宜作为PPHKRV的吸附剂。

广西应用原代地鼠肾细胞人用狂犬病疫苗接种效果的研究

目的评价原代地鼠肾细胞人用狂犬病疫苗的预防接种效果。方法观察性研究。结果广西16年应用原代地鼠肾细胞人用狂犬病疫苗接种狂犬病暴露人群保护率为86．0％，疫苗用量由1982年10万人份增加到1995年的50万人份，使广西狂犬病疫情下降呈剪刀叉的趋势。全国情况也是一样。1987年广西全面建立犬伤门诊后，按照局部伤口清洗，抗血清应用与疫苗免疫“三者并重”原则的处理方法，对狂犬病的预防效果与所产生的社会效果是巨大的。结论原代地鼠肾细胞人用疫苗预防效果良好，价格低廉，比精制鸡胚细胞疫苗与精制录猴肾细胞疫苗等容易在发展中国家中推广使用。

流行性出血热病毒在地鼠肾细胞中增殖动态的形态学及形态发生学研究

用普通电镜及免疫电镜对流行性出血热病毒(EHFV)不同毒株感染地鼠肾细胞(GHKC)的形态及形态发生学特点、其特征性包含体的形态及感染细胞超微结构的改变,以及感染后不同天数的病毒增殖动态进行了观察。

森林脑炎病毒地鼠肾细胞培养增殖动态及疫苗生产工艺改进的研究

为了解森林脑炎病毒的增殖动态 ,改进现有疫苗的生产工艺 ,将森林脑炎病毒感染地鼠肾细胞 ,控制不同的培养条件 ,以利病毒增殖 ,并于不同时间收获病毒液 ,测定病毒滴度。疫苗液用不同浓度的福尔马林灭活后 ,测定疫苗的保护指数。结果表明森张株病毒增殖高峰在 6 8～ 72h ,多次收获的病毒液及其病毒滴度、疫苗效力均优于现有疫苗 ,新工艺可提高病毒产量 。

地鼠肾细胞灭活乙型脑炎疫苗的儿童免疫效果调查

地鼠肾细胞灭活乙型脑炎疫苗的儿童免疫效果调查江苏省卫生防疫站（南京２１０００９）戴红张银凤刁连东江苏省金坛市卫生防疫站冯八小徐爱玲郭剑涛地鼠肾细胞灭活乙脑疫苗（简称乙脑疫苗）应用于乙脑预防２０余年，近年来临床病例经人工免疫的婴幼儿占有一定比例，提示乙...

乙型脑炎减毒活疫苗工艺中金黄地鼠肾细胞培养液里谷氨酰胺添加的研究

目的比较谷氨酰胺在不同浓度和不同添加阶段的条件下,作为细胞生长液的成分,对乙型脑炎减毒活疫苗生产中金黄地鼠肾细胞的培养效果以及后续生产工艺的影响。方法 (1)以两种添加阶段:将谷氨酰胺作为细胞生长液体培养基的成分加入细胞培养和培养细胞时临时配制后加入细胞培养;(2)以不同的浓度:按0.05、0.1、0.2 g/L的浓度加入细胞培养。结合两种条件后,每种组合条件生产3批地鼠肾细胞,对所有批次细胞的生长情况及后续接种病毒后,对应的病毒生长情况进行比较研究。结果谷氨酰胺在培养细胞时临时配制后加入细胞培养所生产的地鼠肾细胞质量优于其作为细胞生长液体培养基的成分加入细胞培养,采用秩和检验,差异有统计学意义(P=0.002<0.05);谷氨酰胺按0.1 g/L和0.2 g/L的浓度加入细胞培养所生产的地鼠肾细胞质量优于按0.05g/L浓度,在2种添加阶段其,差异有统计学意义(P=0.02<0.05),但0.1g/L和0.2 g/L的浓度之间,无论谷氨酰胺的添加阶段在培养基中添加P=0.513,在培养时临时添加P=0.827),两者差异无统计学意义(P>0.05)。结论在乙型脑炎减毒活疫苗生产所需的地鼠肾细胞培养中,谷氨酰胺适合在培养细胞时临时配制后加入细胞培养容器,浓度不宜低于0.1g/L。