地龙蛋白对糖尿病性勃起功能障碍大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化及其勃起功能的影响

目的探讨地龙蛋白对糖尿病性勃起功能障碍(DMED)大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)表型转化及其勃起功能的影响。方法将60只勃起功能正常的雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、西地拉非组(5 mg·kg^(-1))及地龙蛋白低、中、高剂量组(45、90、180 mg·kg^(-1)),每组10只。采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ,50 mg·kg^(-1))结合高脂饲料喂养建立糖尿病大鼠模型;8周后,颈部注射阿朴吗啡(APO,100μg·kg^(-1)),制备DMED大鼠模型。造模成功后,按剂量灌胃给药,每日1次,连续4周。测定各组大鼠造模前、造模第3天、给药4周后的血糖水平及体质量。采用多导生理记录仪测定大鼠阴茎海绵体内压(ICP)、颈动脉内压(MAP),计算ICP/MAP比值;免疫组织化学法检测阴茎海绵体中收缩型标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、平滑肌肌球蛋白重链(SMMHC)和合成型标志物Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、骨桥蛋白(OPN)表达情况;RT-PCR法检测阴茎海绵体中α-SMA、SMMHC、CollagenⅠm RNA表达水平;Western Blot法检测阴茎海绵体中α-SMA、肌间线蛋白(Desmin)、CollagenⅠ、OPN蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠在造模第3天和给药4周后的血糖值均显著升高(P<0.01),给药4周后的体质量显著降低(P<0.01);ICP及ICP/MAP比值显著降低(P<0.01);阴茎海绵体中α-SMA、SMMHC、Desmin蛋白表达水平显著降低(P<0.01),CollagenⅠ、OPN蛋白表达水平显著升高(P<0.01);阴茎海绵体中α-SMA、SMMHC m RNA表达水平显著降低(P<0.01),CollagenⅠm RNA表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,给药组大鼠的血糖值及体质量均无明显变化(P>0.05);ICP及ICP/MAP比值均显著升高(P<0.01);阴茎海绵体中α-SMA、SMMHC、Desmin蛋白表达水平显著升高(P<0.01),CollagenⅠ、OPN蛋白表达水平显著降低(P<0.01);阴茎海绵体中α-SMA、SMMHC m RNA表达水平显著升高(P<0.01),CollagenⅠmRNA表达水平显著降低(P<0.01)。结论地龙蛋白能够改善DMED大鼠勃起功能,其机制可能与通过抑制CCSMC由“收缩型”向“合成型(增殖型)”转化有关。

地龙蛋白对糖尿病性勃起功能障碍大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化的影响

目的探讨地龙蛋白对糖尿病性勃起功能障碍(DMED)大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)表型转化的影响,以明确地龙蛋白改善DMED大鼠勃起功能的机制。方法于2021年7月选取60只SPF级雄性SD大鼠作为研究对象,随机选取50只腹腔注射链脲佐菌素(STZ),构建糖尿病(DM)大鼠模型,余下10只作为正常组。8周后大鼠颈部皮下注射阿朴吗啡(APO),并筛选出DMED大鼠。将DMED大鼠随机分为模型组、西地那非组及地龙蛋白低、中、高剂量组(45、90、180 mg/kg),各6只,并随机选取正常组6只作为空白组。给药4周后,检测大鼠血糖、体重、阴茎海绵体内压(ICP)和颈动脉内压(MAP)水平,计算ICP/MAP评估大鼠勃起功能。采用免疫组织化学法检测大鼠阴茎海绵体中收缩型标志物碱性调宁蛋白(Caiponin)、肌间线蛋白(Desmin)表达水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应检测阴茎海绵体中Desmin、骨桥蛋白(OPN)mRNA表达水平;采用Western blotting法检测阴茎海绵体中Caiponin、平滑肌肌球蛋白重链(SMMHC)蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠体重、ICP/MAP显著下降,血糖显著升高(P<0.01);各给药组大鼠阴茎海绵体中Caiponin、Desmin表达显著下降(P<0.01);Desmin mRNA表达下降,OPN mRNA表达显著上升(P<0.01);Caiponin、SMMHC蛋白表达显著下降(P<0.01)。与模型组比较,西地那非组及地龙蛋白低、中、高剂量组大鼠ICP/MAP水平显著升高(P<0.01),但西地那非组及地龙蛋白低、中、高剂量组大鼠的体重及血糖水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);各给药组大鼠阴茎海绵体中Caiponin、Desmin表达显著上升(P<0.01);Desmin mRNA表达显著上升,OPN mRNA表达显著下降(P<0.01);Caiponin、SMMHC蛋白表达显著上升(P<0.01)。结论地龙蛋白可通过上调阴茎海绵体组织中合成型(增殖型)标志蛋白或下调收缩型标志蛋白影响CCSMC转化,进而改善DMED大鼠的勃起功能。

源于地龙蛋白的抗氧化肽鉴定与构效关系

为探究外源蛋白酶预酶解处理对地龙蛋白胃肠消化程度和胃肠消化后抗氧化活性的影响。该研究利用五种蛋白酶制备了不同的地龙蛋白酶解物,然后通过体外胃肠模拟消化探究这些酶解物的水解度、分子量分布和体外抗氧化活性的变化。五种蛋白酶酶解物中,碱性蛋白酶酶解物的水解度最高,为40.8%,其对DPPH、ABTS自由基的清除能力分别为27.36、175.46μmol TE/g,ORAC值为0.70μmol TE/mg。碱性蛋白酶酶解物经胃肠消化后的水解度、DPPH自由基清除率、ORAC值相比于地龙蛋白直接胃肠消化所得产物(EWP)分别提高了94.06%、72.21%及120.00%。GHEWP中鉴定出10823条分子量<3 ku的肽,通过bioware.ucd.ie进行活性阈值评分筛选出活性评分最高的11个肽进行合成,验证活性,其中ATSGFFVY、HCFVLY、HLASGWY、HRYSDF、HYANMY的综合抗氧化能力较好,量子化学计算结果表明:ATSGFFVY、HCFVLY、HRYSDF、HYANMY的活性位点可能分别位于Tyr-8、Tyr-6、Tyr-3、Tyr-2上;HLASGWY的活性位点可能位于Trp-6上。该研究表明碱性蛋白酶预酶解可提高地龙蛋白的消化程度,增强其胃肠消化产物的抗氧化活性。

基于NO-cGMP通路探讨地龙蛋白对糖尿病大鼠勃起功能障碍的干预作用及机制

目的探讨地龙蛋白对糖尿病性勃起功能障碍(DMED)大鼠的干预作用及其机制。方法60只大鼠随机选取10只作为空白组,其余50只通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建糖尿病大鼠模型,8周后使用阿朴吗啡(APO)诱导筛选符合DMED症状的大鼠模型,将DMED大鼠随机分为模型组、西地拉非组及地龙蛋白低、中、高剂量组,相应药物干预4周后,检测大鼠平均颈动脉压(MAP)和阴茎海绵体最大内压(ICPmax)以评估大鼠勃起功能,试剂盒检测阴茎海绵体组织SOD活性及NO、cGMP、MDA水平,RT-qPCR法检测阴茎海绵体组织eNOS、cGMP mRNA表达,免疫组化和Western blot法检测eNOS蛋白表达,HE染色观察阴茎海绵体病理结构的改变。结果与空白组比较,模型组大鼠血糖、阴茎海绵体组织MDA水平升高(P<0.01),体质量、ICPmax/MAP、阴茎海绵体组织SOD活性及NO、cGMP水平、阴茎海绵体组织eNOS mRNA和蛋白表达均降低(P<0.01);与模型组比较,各给药组以上指标均有改善(P<0.01)。空白组阴茎海绵体组织结构正常;模型组阴茎海绵体组织肌纤维、胶原纤维断裂,拧结明显;各给药组阴茎海绵体组织病理损伤较模型组均有不同程度的改善。结论地龙蛋白具有改善糖尿病大鼠勃起功能障碍的作用,其机制可能与抑制氧化应激、上调大鼠阴茎海绵体NO-cGMP通路表达有关。

红曲地龙蛋白片对高脂血症大鼠的降脂作用

文章为探究红曲地龙蛋白片对高脂血症大鼠的降脂作用,采用高脂饲料喂养法建立了高脂血症大鼠模型,并将其分为空白对照组、模型对照组、辛伐他汀组(0.01 g/kg/d)和红曲地龙蛋白片低(0.167 g/kg)、中(0.333 g/kg)、高剂量组(0.666 g/kg),考察各组大鼠的血脂代谢、脂酶活性及胆汁酸排泄情况,以分析红曲地龙蛋白片对高脂血症大鼠血脂的影响。红曲地龙蛋白片各剂量组与模型对照组相比,血清TC、TG、LDL-C水平降低,HDL-C水平和LPL、HL的活性提高,粪便中游离FBA排泄量增加(P<0.05或P<0.01)。由此可见,红曲地龙蛋白片能降低血脂水平,提高胆固醇水解酶的活性,促进FBA排泄,具有调节血脂和改善脂质代谢的作用。

红曲地龙蛋白压片糖果降脂保肝作用探析

目的:探究新型食品红曲米地龙蛋白压片糖果的降脂保肝作用。方法:将高脂血症小鼠模型随机分为模型对照组、辛伐他汀组(10 mg·kg^(-1))、压片糖果低剂量组(0.15 g·kg^(-1))、压片糖果高剂量组(0.30 g·kg^(-1)),每组10只。正常对照组、模型对照组给予0.9%生理盐水,辛伐他汀组给予辛伐他汀溶液,压片糖果组给予不同剂量的受试物溶液,灌胃体积均为10 mL·kg^(-1),每天1次,连续6周。考察各组小鼠血清生化指标、肝指数、肝脏生化指标及氧化指标。结果:与模型对照组相比,辛伐他汀组和压片糖果低、高剂量组的总胆固醇(Total Cholesterol,TC)、三酰甘油(Triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(Low Density Lipoprotein Cholesterol,LDL-C)含量明显下降、高密度脂蛋白胆固醇(High Density Lipoprotein Cholesterol,HDL-C)含量明显上升(P<0.05或P<0.01);辛伐他汀组和压片糖果高、低剂量组的肝脏指数及谷草转氨酶(Aspartate Aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(Alanine Transaminase,ALT)活性较之模型组显著下降(P<0.05或P<0.01),各剂量组肝组织中TC、TG、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量明显减少,超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)含量明显增加(P<0.05或P<0.01)。结论:红曲地龙蛋白压片糖果可调节血脂水平和脂质代谢紊乱,减少肝脏氧化应激损伤,具有降脂保肝作用。

地龙蛋白对血脂偏高大鼠的作用探究

探讨地龙蛋白对高脂血症模型大鼠降血脂疗效。方法 健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组(10只)和造模组 (50只),正常对照组喂食基础饲料,造模组喂食高脂饲料。造模成功的大鼠取40只随机分为模型对照组、地龙蛋白低、中、高剂量组(0.035g/kg、0.07g/kg、0.14g/kg),每组10只。正常对照组、模型对照组给予生理盐水,地龙蛋白各剂量组给予不同浓度的受试物溶液,连续4周,饲喂饲料同前。测定各组大鼠实验前后的血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白AI(ApoAI)、载脂蛋白B(ApoB)含量,并检测肝脏胆固醇含量,肝脏及粪便胆汁酸(TBA)排泄量。结果 实验结束后,地龙蛋白中、高剂量组的血清TG、TC、LDL-C、ApoB含量明显下降,HDL-C、ApoAI含量明显上升;肝脏指标中,TC含量降低, TBA减少;粪便中TBA增加,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论 地龙蛋白可调节血脂水平,促进胆固醇转化分解,加快胆汁酸排泄,具有一定的降脂作用。

地龙蛋白组分Ⅲ对鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤血管密度和MMP-9表达的影响

目的观察地龙蛋白组分Ⅲ对鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤血管密度和MMP-9表达的影响。方法裸鼠接种HNE1细胞形成移植瘤,至肿瘤体积达1cm×1cm×1cm后,随机分为地龙组和对照组,分别于腹腔注射地龙蛋白组分Ⅲ和生理盐水,连续用药20天,然后处死动物,测量鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤的体积重量,并制备组织切片,显微镜下计数瘤旁血管密度,免疫组化S-P法检测组织中金属基质蛋白酶9的表达活性。结果地龙组用药处理后,与对照组进行比较,地龙组裸鼠移植瘤的体积和重量均明显降低(P<0.05),瘤旁血管密度明显减少(P<0.05),金属基质蛋白酶9表达明显减弱(P<0.05)。结论地龙蛋白组分Ⅲ可能通过抑制金属基质蛋白酶9的表达活性和抑制瘤旁微血管的生长而抑制鼻咽癌细胞的转移潜能。

生物制剂地龙蛋白的研究进展

地龙作为一种传统的中药材,有着广泛的用途。本文从地龙蛋白的生物学特点、活性控制、药理作用、应用几方面对地龙蛋白进行系统的论述,为其合理利用提供参考。

地龙蛋白胶囊对大鼠动静脉血栓生成的抑制作用

通过对小鼠的凝、出血时间,动、静脉血栓造模实验以及对大鼠凝血三项的检测实验,验证活性地龙蛋白胶囊在动物体内抗凝及抑制血栓生成的活性。ICR小鼠随机分为空白对照组,阳性药组,地龙低(22.50 mg/kg)、中(45.00 mg/kg)、高剂量组(90.00mg/kg),每天给予灌胃给药(1 mL/100 g),连续7 d。末次给药后1 h,于小鼠尾尖剪断和内眦球后静脉丛取血分别观察小鼠出、凝血时间。另有SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性药组(13.00 mg/kg)、地龙低(15.63 mg/kg)、中(31.26 mg/kg)、高剂量组(62.52 mg/kg)。每天给予灌胃给药(1 mL/100 g),连续7 d。末次给药1 h后计算两侧颈总动脉及下腔静脉血栓形成抑制率以及眼底静脉丛取血观察凝血酶原时间(PT)、鞣花酸活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)。与正常组比较,地龙胶囊可以延长小鼠尾出血及凝血时间(p<0.01),且具有剂量依赖性,高剂量组(90.00 mg/kg)延长尾出血活性(18.88 min)及凝血效果(82.63s)最好。另外,与模型组相比,地龙胶囊随剂量升高抑栓效果逐渐增强,高剂量组(62.52 mg/kg)活性最好(湿重抑制率76.53%;干重抑制率72.49%)。实验表明地龙胶囊具有抑制血栓生成的作用。

地龙蛋白和姬松茸多糖的药理研究

现代研究表明中药地龙除具有定惊、清热、通络、平喘、利尿的传统功效外,其主要有效成分地龙蛋白还具有抗血栓、溶栓和改善血液循环、抗肿瘤、调节免疫、抗辐射、降压、抗心律失常及镇痛消炎等多种现代药理作用;姬松茸多糖具有降血糖、抗肿瘤、抗突变、抗辐射,提高免疫力等主要药理活性。二者都能增强机体免疫功能,对辐射引起的细胞损伤,免疫力低下等不良反应,具有改善作用。

基于PI3K/Akt/Nrf2信号通路探讨地龙蛋白对自发性高血压大鼠的血管内皮功能保护机制

目的:观察地龙蛋白对自发性高血压大鼠(SHR)主动脉磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/核因子E2相关因子2(PI3K/Akt/Nrf2)通路相关因子表达的影响,探讨其治疗高血压血管内皮功能障碍(VED)的作用机制。方法:选取10只10周龄Wistar Kyoto(WKY)大鼠及50只SHR适应性喂养1周,WKY大鼠作为正常组,50只SHR按体质量随机分为模型组、缬沙坦组(8×10^(-3) g·kg^(-1)·d^(-1))、地龙蛋白高剂量组(0.2g·kg^(-1)·d^(-1))、地龙蛋白中剂量组(0.1g·kg^(-1)·d^(-1))、地龙蛋白低剂量组(0.05 g·kg^(-1)·d^(-1)),正常组和模型组大鼠用等体积双蒸水灌胃。药物干预期间观察各组大鼠一般情况并分别于给药前及给药后每隔1周特定时间监测大鼠血压。药物干预8周后酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组大鼠血清中血管紧张素-Ⅱ(Ang-Ⅱ)、内皮素-1(ET-1)活性水平;生化试剂盒法检测一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)水平,超氧化物歧化酶(SOD)活性、亚铁离子(Fe2+)浓度;苏木素-伊红(HE)染色观察主动脉内膜变化情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测主动脉组织PI3K、Akt、Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)mRNA表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胸主动脉中p-PI3K(Tyr467/199)、PI3K、p-Akt(Ser473)、Akt、Nrf2、HO-1、GPX4蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠体质量偏低,大鼠较烦躁易激惹,内皮损伤程度较重;模型组大鼠血压、血清Ang-Ⅱ、ET1、MDA、Fe2+均显著升高(P<0.01),NO显著下降(P<0.01),主动脉组织中p-PI3K(Tyr467/199)、PI3K、p-Akt(Ser473)、Akt、Nrf2、HO-1、GPX4蛋白及mRNA表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠体质量变化不明显,大鼠相对安静,内皮损伤程度改善;各治疗组大鼠血压、血清Ang-Ⅱ、ET1、MDA、Fe2+均显著下降(P<0.01),NO明显升高(P<0.05),p-PI3K(Tyr467/199)、PI3K、p-Akt(Ser473)、Akt、Nrf2、HO-1、GPX4蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.05)。结论:地龙蛋白可通过改善SHR内皮功能障碍起到降压作用,其机制可能与调控PI3K/Akt/Nrf2相关信号通路、抑制氧化应激及铁死亡相关。

地龙蛋白调节RhoA/Rho信号通路改善DMED大鼠勃起功能的机制研究

目的探讨地龙蛋白对糖尿病勃起功能障碍(DMED)大鼠阴茎海绵体RhoA/Rho信号通路的影响,明确地龙蛋白治疗DMED的作用机制。方法将60只SD大鼠随机选取10只为空白组,余下50只通过注射链脲佐菌素(STZ)构建糖尿病大鼠模型,然后用阿朴吗啡(APO)筛选符合DMED大鼠模型。将DMED大鼠随机分为模型组,西药组,地龙蛋白低、中、高剂量组。空白组、模型病组给予生理盐水灌胃,西药组予以西地那非灌胃,地龙蛋白低、中、高剂量组分别予以地龙蛋白灌胃。4周后测定各组大鼠阴茎海绵体最大内压(Max ICP)/平均颈动脉压(MAP)的比值。使用硝酸还原酶法检测大鼠血清中NO水平,ELISA法检测大鼠血清中ET水平,免疫组化、免疫荧光分别检测大鼠阴茎组织中RHOA、eNOS的表达,Masson染色观察阴茎组织结构的改变,并采用Real-time PCR检测阴茎海绵体组织中ROCK1、ROCK2的mRNA表达,采用Western blot的方法检测阴茎海绵体组织中ROCK1、ROCK2、P-MYPT1的蛋白表达。结果与空白组相比,模型组大鼠勃起功能明显下降(P<0.01);血清NO、阴茎组织eNOS表达明显下降(P<0.01);血清ET水平,阴茎组织RhoA、ROCK1、ROCK2、P-MYPT1表达显著升高(P<0.01);与模型组相比,各治疗组大鼠阴茎勃起功能显著改善(P<0.01);血清NO、阴茎组织eNOS表达明显增加(P<0.05、P<0.01);血清ET水平,阴茎组织RhoA、ROCK1、ROCK2、P-MYPT1表达明显下降(P<0.05、P<0.01)。结论地龙蛋白可能通过抑制RhoA/Rho信号通路,改善eNOS、NO水平,从而来改善DMED大鼠的勃起功能。

基于PI3K/Akt信号通路探讨地龙蛋白改善糖尿病大鼠勃起功能障碍的作用机制

目的通过检测磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路相关因子,探讨地龙蛋白对糖尿病性勃起功能障碍(DMED)大鼠的作用机制。方法50只6~8周龄SPF级SD雄鼠通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建DMED大鼠模型,同时另取10只6~8周龄SPF级SD雄鼠作为空白组;造模成功后随机分组,西地拉非组给予西地拉非0.005 g/kg灌胃,地龙蛋白低、中、高剂量组分别给予0.045、0.090、0.180 g/kg地龙蛋白灌胃,正常组和模型组均给予生理盐水灌胃,各组10 mL/kg,每日一次。给药4周后,测定大鼠阴茎海绵窦最大内压(ICPmax)和颈动脉压(MAP)以评估大鼠的勃起功能,原位末端标记法(Tunel)检测阴茎海绵体细胞凋亡率,马松(Masson)三色染色观察阴茎海绵体纤维化程度,蛋白免疫印迹法(Western blot)法测定阴茎海绵体中PI3K、Akt、磷酸化蛋白激酶B(pAkt)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达,实时荧光定量聚合酶链反应法(Real-time PCR)测定上述蛋白mRNA表达。结果与空白组比较,模型组大鼠体质量、阴茎质量、阴茎指数、ICPmax、ICPmax/MAP、阴茎海绵体中PI3K、Akt、pAkt、Bcl-2蛋白及mRNA表达均明显降低(P<0.01),细胞凋亡率、纤维化程度、Caspase-3蛋白及mRNA表达均明显升高(P<0.01)。与模型组比较,各治疗组大鼠体质量、阴茎质量、ICPmax、ICPmax/MAP、阴茎海绵体中PI3K、Akt、pAkt、Bcl-2蛋白及mRNA表达均明显升高(P<0.01),细胞凋亡率、纤维化程度、Caspase-3蛋白及mRNA表达均明显降低(P<0.01)。结论地龙蛋白对DMED大鼠阴茎海绵体有保护作用,在一定程度上改善了阴茎勃起功能,抑制了阴茎海绵体细胞凋亡和纤维化,其机制可能是通过激活PI3K/Akt相关信号通路实现的。

地龙蛋白调节Nrf2/ARE信号通路改善糖尿病大鼠阴茎勃起功能障碍作用及机制

目的观察地龙蛋白对糖尿病勃起功能障碍(diabetes mellitus erectile dysfunction,DMED)大鼠阴茎组织Nrf2/ARE通路相关因子表达的影响,探讨其治疗DMED的作用机制。方法60只SD大鼠,随机选取10只作为空白组,余下构建糖尿病大鼠模型,8周后筛选符合DMED大鼠,将DMED大鼠随机分为模型组、西地那非组、地龙蛋白低剂量组、地龙蛋白中剂量组、地龙蛋白高剂量组。药物干预4周后评价大鼠勃起功能;HE观察大鼠阴茎组织形态;羟胺法和TBA法分别检测大鼠阴茎组织超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量;免疫组化法(IHC)检测阴茎组织Nrf2表达;荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠阴茎组织NF-κB、IL-1β、TNF-αmRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Nrf2、核转录因子-κB(NF-κB)、白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白表达水平。结果与空白组相比,模型组大鼠勃起功能明显下降(P<0.01);阴茎组织SOD和Nrf2蛋白含量明显下降(P<0.01),MDA,NF-κB、IL-1β蛋白含量和NF-κB、IL-1β、TNF-αmRNA表达明显增多(P<0.01)。与模型组比较,各治疗组勃起功能明显改善(P<0.01);阴茎组织SOD和Nrf2蛋白含量明显上升(P<0.01),MDA,NF-κB、IL-1β蛋白含量和NF-κB、IL-1β、TNF-αmRNA表达明显下降(P<0.01)。结论地龙蛋白能够改善糖尿病大鼠勃起功能,其机制可能与调控Nrf2/ARE信号通路、抑制氧化应激、炎症反应相关。

地龙蛋白对AngⅡ诱导HUVEC焦亡的保护作用及机制研究

目的:阐明血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)能否诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)焦亡及地龙蛋白能否通过调控NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路抑制HUVEC焦亡。方法:采用薄层色谱法对地龙蛋白进行质量控制;采用CCK-8法筛选AngⅡ最佳浓度;将HUVEC随机分为正常组、阴性组、模型组、缬沙坦组和正常组、模型组、地龙蛋白组、地龙蛋白+缬沙坦组,药物干预后采用免疫荧光检测HUVEC的VEGF、PAP1表达情况;鬼笔环肽染色观察细胞骨架结构;Western blot法检测NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白的表达。结果:地龙蛋白富含蚓激酶、亮氨酸、赖氨酸等质量控制成分;与空白组比较,0.45 mg/mL AngⅡ对HUVEC增殖有显著的抑制作用(P<0.05);与阴性组比较,模型组HUVEC的VEGF和PAP1表达均下调,HUVEC微丝微管变短、排列紊乱、断裂、扭曲明显,NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达均显著上调(P<0.05);与模型组比较,缬沙坦组VEGF和PAP1的表达上调,HUVEC微丝微管排列整齐、骨架结构完整,NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达均显著下调(P<0.05)。与模型组比较,地龙蛋白组、地龙蛋白+缬沙坦组VEGF和PAP1的表达均上调,HUVEC微丝微管排列整齐、骨架结构完整,NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达均显著下调(P<0.05)。结论:地龙蛋白可通过调控NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路抑制AngⅡ诱导HUVEC焦亡。

地龙蛋白治疗血管内皮损伤所致阴茎勃起功能障碍作用机制研究进展

查阅相关文献,从抗炎、抗氧化、抗凝、降脂、降压等5个方面概述地龙蛋白保护血管内皮,从而治疗血管内皮损伤引起的阴茎勃起功能障碍的作用机制。目前对于地龙蛋白中具体成分的作用尚未明确,还需进一步研究。今后可通过提高地龙蛋白提纯工艺,建立血管内皮损伤性阴茎勃起功能障碍大鼠模型,探究地龙蛋白不同成分治疗血管内皮损伤性阴茎勃起功能障碍的具体作用机制,明确其作用靶点,从而为治疗阴茎勃起功能障碍提供理论依据,拓展新思路。

中药红曲和地龙蛋白对血脂偏高大鼠的作用研究

研究中药红曲和地龙蛋白对血脂偏高大鼠的降脂作用。方法 80只SD雄性大鼠随机选择10只作为空白对照组基础饲料喂食,其余制备血脂偏高大鼠模型,选取50只造模成功大鼠随机分为模型对照组、红曲组(0.02g/kg)、地龙蛋白组(0.08g/kg)、红曲地龙蛋白混合物低剂量组(0.01g/kg红曲+0.04g/kg地龙蛋白)和高剂量组(0.02g/kg红曲+0.08g/kg地龙蛋白),每组10只。各给药组按10ml/kg灌胃体积给与相应受试物溶液(空白对照组和模型对照组灌胃等量生理盐水),1次/d,连续30d。测定大鼠血清TG、TC、HDL-C、LDL-C、ApoAI、ApoB含量,肝脏TC、TG含量、LPL和HL活性及FBA。结果 与模型对照组相比,红曲组、地龙蛋白组、红曲地龙蛋白混合物低、高剂量组可显著降低血清TG、TC、LDL-C、ApoB含量,提高HDL-C、ApoAI含量;降低肝脏TG、TC含量,增强LPL、HL活性及FBA排泄(P<0.05或P<0.01)。其中红曲组能显著降低血清TC、LDL-C水平,减少ApoB含量,增加ApoAI含量,效果优于地龙蛋白组;地龙蛋白组在降低血清TG水平,提高HDL-C水平,增加LPL、HL活性及FBA排泄方面优于红曲组;红曲、地龙蛋白联合使用各项指标调节效果更显著。结论 红曲和地龙蛋白均具有调节血脂作用,且二者降脂机制不同,联合使用具有协同效果。

地龙蛋白和牛磺酸的抗疲劳作用和免疫调节功能的研究

目的探讨地龙蛋白和牛磺酸对小鼠抗疲劳的作用及其对免疫功能的影响。方法采用小鼠负重游泳试验法测定负重游泳时间、运动后尿素氮含量、血乳酸曲线下面积和肝糖原含量,观察其对小鼠的抗疲劳作用;采用迟发型变态反应试验、碳廓清试验测定免疫指标,观察其对小鼠的免疫调节作用。结果地龙蛋白和牛磺酸能够显著延长高剂量小鼠负重游泳时间(P<0.01),中剂量小鼠血清尿素氮水平显著降低(P<0.01)并增加肝糖原贮量(P<0.05);迟发变态反应试验中,中、高剂量组小鼠足跖增厚值显著增加(P<0.05),小鼠碳廓清试验,低、高剂量组碳廓清吞噬指数增加(P<0.05)。结论地龙蛋白和牛磺酸具有抗疲劳的作用,而且对细胞免疫和单核巨噬细胞吞噬能力具促进作用。

地龙蛋白肽30d经口染毒对Wistar大鼠的亚急性毒性作用

地龙,为蚯蚓干燥体,是一种传统的动物源性天然中药材,性寒味咸,具有活血化瘀,镇痛消炎等作用,其药用价值在《神农本草经》及《本草纲目》均有记载。地龙中提取的地龙蛋白含有多种蛋白质组分,包括胶原酶、纤溶酶、蚓激酶、纤溶激活蛋白和钙调素结合蛋白等。对于地龙蛋白的药理活性已经有不少研究,认为地龙可以通过调节体内凝血系统和纤溶系统,抑制并促溶血栓,改善微循环及防治心脑血管疾病[1-3];可通过抑制血管紧张素转化酶活力控制高血压[4]。