锦灯笼根茎均一多糖P_Ⅰ、P_Ⅱ的制备及其结构研究

采用水提醇沉法提取锦灯笼根茎中的粗多糖,不同乙醇浓度分级醇沉制得精制多糖,再通过葡聚糖凝胶(Sephadex G-200)色谱法获得2个均一多糖(PⅠ、PⅡ)。采用高效液相色谱法测定均一多糖的纯度及分子量,PMP柱前衍生HPLC法测定单糖组成,红外光谱和13C核磁共振分析均一多糖结构。试验结果表明:PⅠ、PⅡ均为均一性很好的多糖,峰位分子量分别为211 257 D、109 441 D,重均分子量(Mw)分别为330 156 D、172 900 D,数均分子量(Mn)分别为223 934 D、79 693 D,分布宽度(Mw/Mn)分别为1.47 435、2.16 959;PⅠ主要由甘露糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖组成,质量比为1.00∶14.94∶7.22∶48.45∶12.62∶6.96∶3.23,它们的残基都是由β-苷键连接;PⅡ主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖组成,质量比为1.00∶2.58∶2.22∶7.04∶3.11∶1.35,残基是由β-苷键连接。均一多糖PⅠ、PⅡ为首次从锦灯笼根茎中分离得到的一种新的酸性杂多糖。

高效凝胶色谱法测定太子参均一多糖分子量

目的:建立太子参均一多糖的分子量分析方法。方法:应用高效凝胶渗透色谱法,色谱柱为Waters UltrahydrogelTM1000(7.8×300mm)GPC柱,流动相为0.1mol/L硝酸钠溶液,柱温35℃,示差折光检测器(检测器温度35℃),流速0.6ml/min。结果:根据建立的方法测定,得到多糖的高效凝胶色谱图,计算出太子参均一多糖分子量为22374Da。结论:方法准确可行,为太子参均一多糖分子量的测定提供了科学依据。

商陆均一多糖对小鼠脾细胞增殖及细胞因子分泌的影响

目的:观察7种商陆均一多糖对小鼠脾细胞增殖及细胞因子分泌的影响,探讨其对免疫调节的作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)法检测7种商陆均一多糖对刀豆蛋白A(ConA)诱导的T淋巴细胞和脂多糖(LPS)诱导的B淋巴细胞增殖的影响;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞上清液中IL-2、 IL-4、 IL-6、IFN-γ的含量。结果:商陆总多糖(PAP)在25 μg/mL、125 μg/mL的浓度下显著促进脾淋巴细胞增殖( P <0.05)。七种商陆均一多糖中,PAP-2、PAP-4、PAP-5、PAP-6及PAP-7对小鼠脾淋巴细胞增殖产生显著的促进作用;PAP在25 μg/mL、125 μg/mL的浓度下显著促进细胞因子IL-2、IL-4、IL-6和IFN-γ的分泌。七种商陆均一多糖中,PAP-2、PAP-4、PAP-5、PAP-6及PAP-7对小鼠脾细胞分泌细胞因子产生显著的增强作用。结论:商陆均一多糖PAP-2、PAP-4、PAP-5、 PAP- 6及PAP-7具有显著的免疫增强的作用。

南瓜均一多糖的分离纯化及其抗氧化活性的研究

探究南瓜均一多糖抗氧化活性与其分子量及单糖组成之间的关系,为南瓜多糖构效关系的研究提供新参考。以葫芦科南瓜为原料,采用超声波辅助提取法提取南瓜多糖,通过Sevag法脱蛋白及AB-8大孔吸附树脂脱色得到除杂后的南瓜多糖(Cucurbita moschata Duch polysaccharide,CMP),经纤维素DEAE Cellulose-52及葡聚糖凝胶Sephadex G-100色谱柱分离纯化后得到CMP-A1、CMP-A2、CMP-B、CMP-C1、CMP-D2 5种南瓜均一多糖,分别测定其分子量及单糖组成,并探究其与5种均一多糖抗氧化活性之间的关系。结果表明:CMP-C1与CMP-B相比,两者的分子量大小相近,CMP-C1的糖醛酸含量明显高于CMP-B,CMP-C1对DPPH自由基及羟基自由基的清除率比CMP-B分别高出10.21%、11.03%;CMP-D2与CMP-B相比,两者的糖醛酸含量基本相等,CMP-D2的分子量明显小于CMP-B,但CMP-D2对DPPH及羟基自由基的清除率仅比CMP-B分别高出1.05%、1.96%。南瓜均一多糖的糖醛酸含量对其抗氧化活性的影响较大,糖醛酸含量越高,其抗氧化活性越强,而分子量大小对其抗氧化活性影响较小。

新疆芜菁中均一多糖的分离纯化及结构分析

目的测定分离纯化后的芜菁多糖均一组分BP1和BP2含量及纯度,并对其进行结构分析。方法经DEAE-纤维素52和sephadex-G150柱层析分离纯化BP1和BP2,采用蒽酮-硫酸法在紫外-可见分光光度计进行纯度测定;采用比旋光度法、气相色谱法、傅里叶红外光谱法、核磁共振法等方法进行结构分析。结果BP1和BP2在分离得到的7种多糖组分中含量较高,纯度测定结果中在260 nm和280 nm处未见到蛋白质和核酸的吸收峰。BP1组分相对分子质量为110662,[α]为+18.83;BP2组分相对分子量为37844,[α]为+12.00。BP1、BP2均由阿拉伯糖(Ara)、甘露糖(Man)、葡萄糖(Glc)和半乳糖(Gal)组成,其摩尔比分别为为1∶2.90∶16.48∶1.52和1.24∶2.03∶15.24∶1。BP1主链由α-D-Man-(1→,→6)α-D-Glc-(1→跟→2,6和1→连接的β-D-Gal组成,α-D-Man-(1→,→6)α-D-Glc-(1→组成支链;BP2主链由→6)α-D-Ara-(1→,→6)α-D-Man-(1→和→6,1→)连接的β-D-Glc组成,→6和1→)连接的β-D-Glc组成支链。结论本研究初步成功推测出多糖均一组分BP1、BP2的结构特征并给后期芜菁多糖的结构鉴定提供了可靠的理论基础。

太子参均一多糖对大鼠小肠α-糖苷酶活性影响

目的:考察太子参均一多糖对大鼠小肠α-糖苷酶活性影响,探讨其降血糖途径。方法:由大鼠分离小肠α-糖苷酶,以对硝基酚-α-葡萄糖苷(pNPG)为底物,利用α-葡萄糖苷酶将其分解成pNP及葡萄糖,而pNP在碱性条件下显色的原理测定酶活力,以考察太子参均一多糖对酶活性的影响。结果:太子参均一多糖HP_(0.5MSC-F)和HP_(H-1-2),浓度为400μmol/L时对大鼠小肠α-糖苷酶活性抑制率分别为19.00%和28.07%。结论:两种太子参均一多糖对α-葡萄糖苷酶活性具有一定的抑制作用。

太子参均一多糖的分离与表征

目的:对太子参抗二型糖尿病多糖活性部位(PF40),进行分离纯化得到均一多糖并对其进行结构表征。方法:太子参粉碎后,通过水提醇沉法(40%乙醇)得到太子参粗多糖,采用DEAE-纤维素、葡聚糖凝胶柱对其分离纯化,得到一种均一多糖,采用高效凝胶渗透色谱法测定分子量,1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)-柱前衍生高效液相色谱法分析单糖组成。结果:分离得到一种均一多糖,由葡萄糖组成,分子量为18400Da,命名为HPh-1-1。结论:太子参均一多糖HPh-1-1是一种葡聚糖。

太子参均一多糖HPLC-FLD检测方法的建立

目的:建立一种太子参均一多糖的高效液相色谱-荧光检测方法 (HPLC-FLD)。方法:用异硫氰酸荧光素(FITC)标记太子参均一多糖,采用HPLC-FLD,考察不同溶剂、流动相、色谱柱对检测结果的影响,确定最佳检测条件,建立太子参荧光均一多糖的HPLC-FLD检测方法。结果:荧光检测激发波长为490nm,发射波长为518nm;大连依利特Hypersil BDS C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱;样品溶于30%乙腈,乙腈-0.01mol/L磷酸二氢钾(30∶70)为流动相;确定HPLC-FLD检测荧光多糖最佳条件。结论:该方法准确、有效,可用于检测太子参荧光均一多糖,为太子参多糖在体内外吸收特征和活性研究奠定基础。

阿里红均一多糖对慢性支气管炎小鼠的治疗作用研究

目的研究阿里红均一多糖(homogenouspolysaccharide of Fomes officinalis Ames,FOP)FOPS 1-a和FOPS2-a对慢性支气管炎小鼠的治疗作用。方法采用气管内注射脂多糖的方法建立慢性支气管炎小鼠模型,分别给予地塞米松、阿里红总多糖、阿里红均一多糖(FOPS1-a和FOPS2-a)进行干预后,采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察肺组织的形态变化,ELISA法检测血清中白介素4(interleukin-4,IL-4)、干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平。结果阿里红各给药组能使小鼠支气管黏膜炎症细胞浸润程度减轻、支气管黏膜上皮细胞脱落明显减轻,可抑制支气管黏膜上皮细胞增生,且阿里红各给药组可剂量依赖性的降低小鼠血清中IFN-γ、TNF-α的水平(P<0.05),IL-4水平明显升高(P<0.05),与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论阿里红均一多糖对慢性支气管炎小鼠有一定的治疗改善作用。

双参均一多糖TGP-1的分离纯化及其抗肿瘤活性

目的从双参中分离纯化得到均一多糖,并研究其结构和抗肿瘤活性。方法双参粗多糖经DEAE-FF和Sephadex G-100串联柱色谱分离,得到组分TGP-1。采用HPGPC、IR、UV、PMP-HPLC对TGP-1的结构进行表征,并考察TGP-1对3种不同肿瘤细胞增殖的抑制作用。结果TGP-1为酸性均一多糖、其相对分子量为501.19 k Da,由甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、阿拉伯糖和岩藻糖组成,其摩尔比为0.6∶50∶0.6∶10.8∶10.4。Smith降解显示TGP-1可能存在1→3、1→3,4、1→3,6、1→2,4等键型。体外TGP-1可抑制肝癌Hep G2细胞的增殖。结论TGP-1是一种高度支化的均一相对分子质量的酸性多糖,其化学结构及抑制肝癌HepG2细胞的增殖作用机制有待研究。

均一猪苓多糖对肿瘤微环境中RAW264.7细胞表达IL-10及相关机制的影响

目的:探讨在肿瘤微环境中均一猪苓多糖对RAW264.7细胞表达抗炎因子IL-10及其相关机制的影响。方法:建立小鼠膀胱癌细胞MB49与小鼠巨噬细胞RAW264.7共培养的细胞模型,体外模拟肿瘤微环境。实验分为对照组、IL-4(20 ng/mL)组及均一猪苓多糖低(50μg/mL)、中(100μg/mL)、高(200μg/mL)浓度组。采用CCK-8实验检测均一猪苓多糖及IL-4对RAW264.7细胞增殖的影响;ELISA法和RT-qPCR法分别检测共培养体系细胞上清中IL-10水平及RAW264.7细胞中IL-10的mRNA表达;Western Blot检测RAW264.7细胞中IL-10蛋白及激活IL-10的上游信号通路PI3K/AKT/mTOR和下游信号通路JAK1、STAT3、SOCS3、IL-1Ra蛋白表达。结果:与对照组比较,均一猪苓多糖及IL-4对RAW264.7细胞增殖均无明显影响;均一猪苓多糖中、高浓度组及IL-4组促进了肿瘤微环境中RAW264.7细胞IL-10的分泌及细胞中IL-10 mRNA及蛋白表达;不同浓度均一猪苓多糖干预后,均上调了肿瘤微环境中RAW264.7细胞SOCS3、IL-1Ra蛋白表达及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR、p-STAT3/STAT3、p-JAK1/JAK1水平。结论:在膀胱癌肿瘤微环境中均一猪苓多糖可能通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路促进RAW264.7细胞表达抗炎因子IL-10,同时通过IL-10/JAK1/STAT3通路,上调SOCS3及IL-1Ra协同IL-10发挥抗炎功能。

黄瓜子多糖的分离、纯化和体外抗氧化活性研究

目的:对黄瓜子多糖进行分离、纯化,并考察其体外抗氧化活性。方法:采用水提醇沉法提取黄瓜子粗多糖(CCL),然后以Amberlite FPA90Cl阴离子和Amberlite FPC3500H阳离子串联交换树脂柱和离子交换纤维素DEAE Cellulose 52柱对CCL进行分离、纯化得到CCL-M2、CCL-M3、CCL-M6等3种多糖。结合高效液相色谱-蒸发光散射法、超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法和紫外、红外光谱等多种技术对3种均一多糖的纯度、分子量、结构和单糖组成等进行分析。以维生素C(VC)为阳性对照,考察CCL-M2、CCL-M3、CCL-M6(质量浓度均为0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mg/mL)对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)、羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O^(2-)·)的清除能力,并计算其半数清除浓度(IC_(50))。结果:CCL-M2、CCL-M3、CCL-M6均为吡喃糖形式的均一多糖,分子量分别为9.614×10^(6)、2.024×10^(7)、3.343×10^(7 )Da。CCL-M2的单糖组成为鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖,其摩尔比为5.1∶2.6∶1.7∶1.4∶31.6;CCL-M3和CCL-M6的单糖组成均为甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖,其摩尔比分别为1.7∶3.8∶6.4∶3.3∶1.3和1.3∶3.0∶3.2∶4.4∶8.9。体外抗氧化活性结果显示,3种均一多糖对DPPH·、·OH、O^(2-)·均具有一定的清除活性,其对DPPH·的清除活性强弱顺序为VC>CCL-M2>CCL-M3>CCL-M6(IC_(50)依次为0.309、1.240、1.489、1.713 mg/mL),对·OH的清除活性强弱顺序为VC>CCL-M2>CCL-M6>CCL-M3(IC_(50)依次为0.968、1.032、1.233、1.356 mg/mL),对O^(2-)·的清除活性强弱顺序为VC>CCL-M2>CCL-M3>CCL-M6(IC_(50)依次为0.335、0.379、0.812、1.662 mg/mL)。结论:从黄瓜子中分离得到3种吡喃糖形式的均一多糖均具有一定的体外抗氧化活性,其中以CCL-M2的活性最强。

白簕多糖的分离纯化及抗氧化活性研究

目的提取、分离和纯化白簕多糖(ATP),测定单糖组成和相对分子质量(M)分布,并进行体外抗氧化活性检测。方法通过水提醇沉、Sevage法、DEAE-cellulose 52和Sephadex G-50柱色谱法分离、纯化ATP。采用HPLC和高校凝胶渗透色谱(HPGPC)法对多糖的单糖组成和相对分子质量分布进行测定。通过体外清除DPPH·、ABTS^+·、羟基自由基(·OH)和超氧阴离子(O_2^-·)自由基的方法,评价ATP的抗氧化活性。结果获得1个量较高的中性均一多糖(ATP1-1)以及2个酸性多糖组分ATP2、ATP3。ATP1-1主要由葡萄糖和少量半乳糖、甘露糖、鼠李糖组成。ATP2主要由葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和少量甘露糖、鼠李糖组成。ATP3主要由鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成。ATP1-1的重均相对分子质量(Mw)为2 310。抗氧化实验表明ATP1-1对DPPH·、ABTS^+·、·OH和O_2^-·自由基均有明显的清除作用,半数抑制浓度(IC_(50))分别为0.042 4、0.007 9、2.313 6、1.753 0 mg/m L。结论 ATP1-1有较好的抗氧化活性并呈现出良好的量效关系。

荧光凝胶色谱法测定大鼠单次口服麦冬多糖MDG-1排泄变化

目的:探讨单次口服麦冬多糖MDG-1后排泄量的变化。方法:采用异硫氰酸荧光素(FITC)对麦冬多糖MDG-1进行标记(F-MDG-1),测定取代度。采用高效凝胶色谱法(HPGPC)对粪便及尿液内MDG-1含量进行测定。SD-雄性大鼠,给药组按照300 mg.kg-1给予F-MDG-1,空白组给予纯水,分别在0,4,12,24,48,72 h收集尿液及粪便。测定含量。结果:在单次给予F-MDG-1量300 mg.kg-1后,尿液中含量测定在12 h时达到最大排泄量0.808 7 mg,而后逐渐减少,至72 h最低0.105 3 mg;在粪便测定中在12 h达到最大排泄量为21.332 4 mg,而后逐渐减少,至72 h最低0.506 5 mg。结论:采用FITC对MDG-1进行标记,并采用荧光色谱法对MDG-1在排泄物内的含量变化进行研究是可行的。MDG-1基本不被人体吸收,其主要经粪便排泄。