人参皂苷和三七皂苷五种成分神经保护作用的均匀设计-高通量筛选研究

目的:通过对人参皂苷和三七皂苷多成分多水平均匀设计配伍的神经保护作用筛选研究,评价中药有效成分的均匀设计- 高通量筛选技术.方法:选取人参皂苷Re,Rb1,Rg1,Rg3 和三七皂苷R1 等五种皂苷单体6 个水平(1×10-4~1×10-9 mol·L-1)进行均匀设计配伍组合,通过神经细胞血清剥夺损伤模型进行药效高通量筛选;得到的最佳组合样品,再通过小鼠脑缺血再灌注损伤模型(避暗法、断头耐缺氧实验)及血清和脑、心肌组织老化相关酶测定,进行药效学评价.结果:在细胞实验中筛选得到的最佳3 个组合样品(A11,A12,P5),药效(细胞存活率＞90%)高于1×10-4 mol·L-1 浓度的五种皂苷单体及维生素E(细胞存活率最高78%);可明显改善小鼠脑缺血再灌注损伤所致的记忆障碍,增强耐缺氧能力,提高组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,降低一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,维持谷丙转氨酶(glutamic-pyruvic transaminase,ALT)及乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)含量稳定(P<0.01~0.05).结论:均匀设计配伍与中药复方配伍有相似之处,高通量筛选出的五种皂苷3 个最佳配伍组合样品对脑缺血再灌注损伤具有保护作用,均匀设计- 高通量筛选适用于中药及其复方有效成分大规模药效筛选.

丹参水溶性有效成分对血管内皮细胞损伤保护作用的均匀设计-高通量筛选研究

目的：通过丹参七种水溶性有效成分多水平均匀设计配伍的血管内皮细胞保护作用筛选研究,评价中药有效成分的均匀设计-高通量筛选技术（uniform design-high throughput screening,UD-HTS）的应用.方法：选取原儿茶醛、原儿茶酸、咖啡酸、丹参素钠、迷迭香酸、丹酚酸A、丹酚酸B七种丹参水溶性单体有效成分七个水平（1×10-4～1×10-10 mol·L-1）进行均匀设计配伍组合,通过H2O2诱导的氧化应激损伤血管内皮细胞模型、血管内皮细胞营养剥夺模型评价各种有效成分配伍组合对药效的影响.结果：经过初筛和复筛,初步得到了2个最佳配伍组合样品（A2、B4）,其细胞存活率分别为（70±4）％,（76±3）％.不同的细胞损伤模型筛选出不同的最优配比.结论：均匀设计配伍与中药复方配伍有相似之处,均匀设计-高通量筛选技术是适用于传统多因素多水平组合特点的大规模药效筛选研究新方法.

应用均匀设计-高通量筛选技术评价丹参有效单体成分抗氧化及海马神经细胞保护作用的最佳配伍

目的:通过均匀设计-高通量筛选(uniform design-high throughput screening,UD-HTS)技术,对丹参多种有效单体成分进行多因素多水平配伍组合样品抗氧化及海马神经细胞保护作用的筛选。方法:具有生物活性的丹参多种有效单体(脂溶性7种和水溶性7种)。按照均匀设计方案,得到各单体之间不同浓度配比的组合样品,通过抗2,2-二苯基-1-苦肼基自由基(2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl,DPPH)氧化法和细胞学实验检测各组合样品药物活性。结果:通过初筛和复筛,得到A13、PA两个抗氧化及海马神经细胞保护作用最佳配伍组合样品。结论:均匀设计-高通量筛选技术可快速筛选出药效较好的组合样品,适合多因素多水平配比的大规模药物筛选。

中药丹参及复方丹参片17种有效成分抗氧化作用的均匀设计-高通量筛选研究

目的:在前期研究的基础上,以丹参及复方制剂复方丹参片有效成分组合活性评价为切人点,通过已经建立的多种抗氧化微孔板实验方法,探讨多因素、多水平均匀设计-高通量筛选(uniform design-high throughput screening,UD-HTS)中药研究的新模式。方法:通过SpcctraMax M5连续光谱酶标测试仪选择具有药理活性的丹参有效成分11种(其中脂溶性成分4种,水溶性成分7种)及复方丹参片有效成分6种,通过均匀设计,进行各种成分及不同浓度之间相互配伍组合,以抗2,2-二苯基-1-苦肼基自由基(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl,DPPH)氧化活性、邻二氮菲-Fe^(2+)氧化法、还原能力测定及抗脂质过氧化法,评价各种有效成分组合对药效的影响。结果:经过初筛和复筛,初步得到了丹参最佳水溶性配伍、水溶性+脂溶性配伍及优化组合配伍的组合样品。结论:丹参各有效成分不同浓度均匀设计配伍,结合抗氧化高通量筛选技术可适用于传统多因素、多水平组合特点的大规模药效筛选研究的新方法。

均匀设计-高通量筛选技术在中药丹参多成分配比研究中的应用

目的以丹参有效成分组合活性评价为切入点,建立一种多因素多水平的均匀设计-高通量筛选(UD-HTS)中药研究新的模式。方法选择具有药理活性的丹参有效成分11种(其中脂溶性成分4种,水溶性成分7种),通过均匀设计,进行各种成分及不同浓度之间相互作用的组合,以DPPH氧化法评价各种有效成分组合对药效的影响。结果经过初筛和复筛,初步得到了丹参最佳水溶性配伍、水溶性+脂溶性配伍及优化组合配伍的组合样品。结论均匀设计-高通量筛选技术是适用于传统多因素多水平组合特点的大规模药效筛选研究新方法。

星点设计-效应面法优化硝苯地平分散片处方

目的:以硝苯地平为模型药物,应用星点设计-效应面法优化其分散片处方。方法:采用固体分散技术,以提高硝苯地平的溶解度。以处方中聚乙二醇4000(PEG4000)、交联聚维酮(PVPP)以及交联羧甲基纤维素钠(CCNa)的含量为考察因素,以分散均匀性和10 min累积溶出百分率为评价指标,根据星点设计原理进行试验,并用多元线性回归和二次多项式方程拟合指标与影响因素之间的数学模型,经效应面法预测最佳处方。结果:采用二次多项式拟合的相关系数优于线性方程,具有较高的可信度。综合效应面优化和评估结果,最佳处方为固体分散体中硝苯地平∶PEG4000=1∶4,PVPP占处方的15%,CCNa占处方的8%。结论:通过星点设计-效应面优化法所建立的模型可以用于硝苯地平分散片处方的优化。

星点设计-效应面法优化枸橼酸西地那非分散片处方

目的:以枸橼酸西地那非为模型药物,采用星点设计-效应面法优化分散片的处方。方法:在筛选优化分散片处方时采用星点设计-效应面优化法结合单因素考察的方法。在预试验的基础上,以处方中内加交联羧甲基纤维素钠(CCNa)、外加CCNa以及羟丙甲基纤维素(HPMC)的含量为考察因素,以分散均匀性和15 min累积溶出百分率为评价指标,根据星点设计的原理进行试验,并采用多元线性回归和多元非线性回归拟合两个评价指标与影响因素之间的数学模型,经效应面法预测得到最佳处方。鉴于本分散片在15 min的累积溶出百分率大于85%,可不与原研制剂进行f(2)因子的比较。结果:数据表明,多元非线性拟合的相关系数高于线性拟合,具有较高的可信度。综合效应面优化和评估结果,最佳处方确定为内加CCNa为30 mg,外加CCNa为40 mg,HPMC为0 mg。结论:通过星点设计-效应面优化法所建立的模型可以用于枸橼酸西地那非分散片处方的优化。

3-甾酮-Δ^(1)-脱氢酶突变体文库高通量筛选方法的建立

[目的]建立一种快速、高通量筛选3-甾酮-Δ^(1)-脱氢酶(KstD)突变体库的方法。[方法]基于已发表KstD蛋白晶体结构,设计饱和突变引物,构建突变体文库,优化蛋白表达条件,利用冻融法结合溶菌酶法获得粗酶液;基于分光光度法原理,优化检测反应体系,利用酶标仪检测吸光度的变化来反映酶活力。[结果]利用饱和突变引物成功构建突变体文库,表达KstD最佳条件为:IPTG终浓度0.3 mmol/L,20℃诱导20 h;缓冲液中溶菌酶浓度为0.5 mg/mL时上清目的蛋白含量最高。优化后的酶活检测条件为:Tris-HCl缓冲液50 mmol/L、pH 8.0、0.4 mmol/L DCPIP、1.5 mmol/L PMS、0.7 mmol/L雄烯二酮(4AD)和适量的酶液组成,温度30℃、酶反应时间5 min,于600 nm波长下测定。[结论]成功建立了一种5 min检测96个3-甾酮-Δ^(1)-脱氢酶(KstD)突变体的高通量筛选方法,重复性变异系数在3%以下。

材料基因组学的发展现状、研究思路与建议

回顾了材料基因组学的发展历程,分析了材料基因组学在能源、气体分离、合金、催化和高分子等新材料开发中的成功应用案例、典型流程和理论基础等共性特征,整理出了材料基因组学研究思路的要点和主要方法,并对当前机遇下大力发展材料基因组学提出了建议.