坍塌反应调节蛋白5促进海马神经元突起生长

目的探讨坍塌反应调节蛋白5(CRMP5)对神经元突起生长的作用。方法构建CRMP5真核表达载体,采用基因转染、实时定量PCR和免疫印迹技术评估CRMP5基因表达;以空载体为对照组,设3个复孔,用时差成像技术和突起提取技术观察和检测原代培养海马神经元突起的生长。结果成功构建携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标签蛋白的CRMP5的真核表达载体。脂质体转染技术可成功把CRMP5基因导入细胞,转染的细胞CRMP5表达高于空载体对照组;CRMP5蛋白表达于神经元的胞体和突起,尤其是胞体、突起起始处和突起末端高表达。过表达CRMP5可明显促进突起生长,主要表现为突起的生长,并形成丰富的侧枝;定量结果显示,CRMP5过表达的细胞突起的长度逐渐延长,而且较空载体转染细胞增多,差异显著(P<0.01)。导入CRMP5的细胞突起提取液的吸光度较对照细胞明显升高(P<0.01)。结论 CRMP5能促进神经元突起及其分支的生长。

CRMP5在胃癌细胞的表达及其对细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:研究胃癌细胞中坍塌反应调节蛋白5(CRMP5)的表达,并探讨CRMP5对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法:采用qRT-PCR与Western blot法分别检测人胃黏膜上皮正常细胞(GES-1细胞)和胃癌细胞(AGS、MGC-803细胞)中CRMP5的表达水平。将si-con和si-CRMP5转染MGC-803细胞后,用MTT法检测细胞活力,双染法检测细胞凋亡率,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot法检测细胞中CRMP5的表达及相关蛋白Ki-67、Cleaved Caspase-3、MMP-2和MMP-9的表达情况;均以未处理细胞作对照。结果:与胃黏膜上皮正常细胞相比,胃癌细胞中CRMP5的表达水平升高(P<0.05)。沉默CRMP5后,MGC-803细胞增殖能力减弱(P<0.05),凋亡率增加(P<0.05),细胞的迁移和侵袭能力减弱(P<0.05),且MGC-803细胞中Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05),Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:CRMP5在胃癌细胞中高表达,干扰其表达可以明显抑制细胞增殖、迁移和侵袭。