养殖牡蛎体内检出坎氏弧菌的鉴定

2 0 0 3年 9月从福建近海养殖太平洋牡蛎 (Crassostreagigas)体内分离出 4株细菌 ,对它们形态、生理生化特征、盐度、温度和pH生长条件以及 16SrRNA基因序列进行了研究。结果表明 ,4株细菌均为革兰氏阴性杆菌 ,具极生单鞭毛 ,发酵葡萄糖产酸不产气 ,氧化酶阳性 ,生长需NaCl,无色素 ,不发光 ,在TCBS平板上形成中等大小圆形绿色菌落 ,对弧菌抑制剂O 12 9敏感 ,具有弧菌属的典型特征。结合 16SrRNA基因序列分析结果 ,该菌 (编号SXS1)与坎氏弧菌的亲缘关系最为接近 ,其同源性达 99 .0 % ,因此将该菌鉴定为坎氏弧菌。对该菌在环境中的分布与水产养殖动物疾病的关系进行了讨论。

坎氏弧菌热不稳定溶血素基因的克隆表达、蛋白纯化及其活性

坎氏弧菌(Vibrio campbellii)是水产养殖动物的重要致病菌。本研究构建了坎氏弧菌热不稳定溶血素(TLH)基因的重组表达质粒pET26b(+)/tlh,并转入大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达带有6个组氨酸的TLH融合蛋白,然后利用Ni琼脂糖亲和层析柱进行纯化。SDS-PAGE分析显示,该溶血素能够大量表达,分子量约为42kD。纯化的TLH(0.41mg/mL)具有较强的溶血活性(溶血圈直径为16mm)及磷脂酶活性(晕圈直径为15mm)。其溶血活力的最适温度为37℃,在75℃下培养30min即丧失活力;最适pH为6,pH大于或小于6时都会导致其稳定性下降;一价金属离子如Na+、K+对溶血活性几乎没有影响,而部分二价金属离子如Ca2+、Co2+会导致溶血活性降低。本研究结果对阐明坎氏弧菌的致病机理及基因工程疫苗开发有重要意义。

文蛤坎氏弧菌的分离鉴定

本文从江苏文蛤养殖区发病文蛤中分离到1株优势菌,人工感染显示菌株能引起供试文蛤发病,死亡率为68.75%,且发病症状与原发病症状相同,提示该菌是引起文蛤大面积死亡的主要致病菌。对其形态、生理生化特征致病性进行了初步研究。结果显示分离菌株为革兰氏阴性菌,直杆状,主要生理生化指标赖氨酸脱羧酶、硝酸盐还原、甘露糖、氧化酶为阳性,精氨酸脱羧酶、鸟氨酸酸脱羧酶、V.P为阴性。结合革兰氏染色、形态、生理生化特点,最后鉴定该分离菌株为坎氏弧菌。

皱纹盘鲍脓毒败血症病原菌的发现及初步研究

１９９２年９月至１９９４年１１月间，在大连沿海发现的致皱纹盘鲍（Ｈａｌｉｏｔｉｓｄｉｓｃｕｓｈａｎｎａｉ）脓毒败血症的一株病原菌，对皱纹盘鲍人工感染有很高的死亡率，并且与自然发病有相同的症状。其特征为：革兰氏染色阴性，短杆状，极生单鞭毛，无芽孢，氧化酶和过氧化氢酶均为阳性，发酵葡萄糖产酸不产气，０／１２９１０μｇ敏感，０％和８％ＮａＣｌ胨水中不能生长，不利用葡萄糖酸盐和蔗糖等，定名为坎氏弧菌（Ｖｉｂｒｉｏｃａｍｐｂｅｌｌｉｉ）。