斑马鱼肌肉坏死模型的伊文思蓝活体成像:一种新的研究坏死亲和性对比剂的平台

目的探讨制作斑马鱼肌肉坏死模型的可行性,并应用此模型进行伊文思蓝(EBD)活体成像以研究其坏死亲和特性。方法采用显微注射泵注射10 nL无水酒精于3~7 d斑马鱼幼鱼卵黄囊背部肌肉处以制作斑马鱼肌肉坏死模型。肌肉坏死模型组和对照组于心脏大静脉处注射0.1%EBD 5 nL后0、4、24、48 h行荧光及激光共聚焦显微镜拍摄,动态观察两组斑马鱼体内EBD的分布情况,定量分析肌肉坏死区域和正常肌纤维区域EBD的荧光强度、范围及比值。结果斑马鱼肌肉坏死模型的制作成功率高。荧光及激光共聚焦显微镜显示,肌肉受损区域有大量EBD的红色荧光积聚,同明场下肌肉受损区域相一致;动态观察发现,随时间推移,红色荧光强度逐渐增强,于24 h达到峰值后逐渐减退;肌肉坏死区域同正常肌纤维区域之间荧光强度的差异具有统计学意义(P<0.05),4 h和24 h时荧光强度差异最明显,分别为58.30±5.14、17.36±1.16和54.20±4.25、15.96±0.79。不同时间点的坏死亲和性比率的差异无统计学意义(P>0.05)。结论无水酒精诱导的斑马鱼肌肉坏死模型制作简捷经济,可作为一种新的研究坏死亲和性物质的实验平台。本研究初步证实EBD可选择性积聚于肌肉坏死区域,是一种潜在的坏死亲和性对比剂。

MRI对比剂Gd-DO3A-Ether-Rhein的合成及其坏死亲和性研究

以大黄酸为底物、醚链为连接臂合成磁共振成像(MRI)对比剂并评价其坏死亲和性。合成新的配体10-{[6-(1,8-二羟基蒽醌-3-甲酰氨基)乙氧基乙基]氨基}羰酰甲基-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三乙酸(DO3A-Ether-Rhein,即E1),再与Gd 3+配位得到顺磁性对比剂10-{[6-(1,8-二羟基蒽醌-3-甲酰氨基)乙氧基乙基]氨基}羰酰甲基-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三乙酸合钆(Gd-DO3A-Ether-Rhein,即GdE1)。分别在高热诱导的人肝癌HepG2细胞坏死模型和微波消融诱导的大鼠肌肉坏死模型上评价探针的坏死亲和性。动物试验中,分别在给予GdE1(0.1 mmol/kg)前和给药后0~9 h进行MRI成像,Gd-DOTA(1,4,7,10-四乙酸-1,4,7,10-四氮杂环十二烷合钆)作为对照。MRI成像结果表明,坏死细胞的信号强度(4 369±70)显著高于正常细胞(2 555±84)(P<0.05);在GdE1给药后3 h,坏死肌肉与正常肌肉的对比度为2.00±0.12,显著高于给药后0 h(1.27±0.03)(P<0.05)。上述结果表明,GdE1具有良好的坏死亲和性,在坏死相关疾病的诊断上显示出良好的应用潜力。

心肌梗死模型家猪存活心肌的磁共振延迟成像评价

背景:心脏磁共振延迟成像被认为是极有前景的无创性判断心肌存活状态的影像检查手段。目前常用的对比剂Gd-DTPA存在过高或过低评价存活心肌和不可逆性梗死心肌,而坏死亲和性对比剂ECIII-600可以准确地反映坏死心肌的面积。目的:对比冠脉内注射坏死亲和性对比剂在猪再灌注急性心肌梗死存活心肌诊断中的应用价值。方法:三四个月龄普通家猪12头,建立急性再灌注心肌梗死动物模型,分别冠脉内注射0.1mmol/kgGd-DTPA或0.005mmol/kgECIII-600。胸导R波触发心电门控,T1加权FAST序列,短轴面延迟强化扫描成像。扫描结束后沿短轴面将心脏切成6mm断面行氯化三苯基四氮唑染色和光镜检查。比较相应层面的MRI延迟强化区和氯化三苯基四氮唑染色所示梗死区的关系。结果与结论:注射Gd-DTPA的延迟成像10min时强化区面积与氯化三苯基四氮唑染色相比过高估计梗死心肌面积约21%,30min时强化区面积与氯化三苯基四氮唑染色结果一致,之后则过低估计坏死心肌的面积;注射ECIII-600的延迟磁共振成像在坏死区显示强烈而持续的对比增强,强化区面积与氯化三苯基四氮唑染色所示心肌梗死面积一致。说明ECIII-600增强磁共振延迟成像可以准确反映急性心肌梗死面积。Gd-DTPA评价心肌梗死面积不稳定,观察时间窗短,心脏磁共振成像应在对比剂注射后1h以内完成。