利用坏死基因Ne2鉴定抗叶锈基因Lr13

利用坏死基因Ｎｅ２鉴定抗叶锈基因Ｌｒ１３郭爱国张风国朱之（河北农业大学农学院，保定０７１００１）ＩＤＥＮＴＩＦＩＣＡＴＩＯＮＯＦＬＲ１３ＢＹＭＥＡＮＳＯＦＨＹＢＲＩＤＮＥＣＲＯＳＩＳＮＥ２ＧｕｏＡｉｇｕｏＺｈａｎｇＦｅｎｇｇｕｏＺｈｕＺｈｉｙｕ（...

瘢痕疙瘩中肿瘤坏死因子α刺激基因-6及相关上下游分子表达水平及相关性的初步探究

目的:研究瘢痕疙瘩中肿瘤坏死因子α刺激基因(TSG)-6及相关上下游分子的表达水平及相关性。方法:收集78例瘢痕疙瘩样本,另取50例正常皮肤组织样本作为对照。采用免疫组化检测TSG-6的阳性表达率,采用Western blot检测TSG-6、磷酸化磷酸肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、自杀相关因子(Fas)、Fas配体(FasL)、转化生长因子(TGF)-β1及磷酸化Smad3(p-Smad3)的蛋白表达水平,采用荧光定量PCR法检测组织样本中微小RNA(miR)-23b、miR-181a及miR-376b的表达水平。结果:瘢痕疙瘩组织中TSG-6的阳性表达率、TSG-6、Fas及FasL的蛋白表达水平均低于正常皮肤组织,p-PI3K、pAKT、TGF-β1、p-Smad3、miR-23b、miR-181a及miR-376b的表达水平高于正常皮肤组织(P<0.05);瘢痕疙瘩组织中TSG-6的表达水平与p-PI3K、p-AKT、TGF-β1、p-Smad3、miR-23b、miR-181a及miR-376b的表达水平呈负相关,与Fas及FasL的表达水平呈正相关(P<0.05)。结论:TSG-6表达降低与瘢痕疙瘩形成有关,其机制可能涉及上游miR-23b、miR-181a、miR-376b及下游PI3K/AKT、Fas/FasL、TGF-β1/Smad通路。

基于生物信息学筛选卵巢癌预后的坏死性凋亡相关基因

目的通过生物信息学筛选与卵巢癌患者预后的坏死性凋亡相关基因。方法从公共数据库下载坏死性凋亡相关基因、卵巢癌的基因表达和相关临床数据,利用RStudio 4.1软件筛选出在卵巢癌组织与卵巢正常组织间差异表达的坏死性凋亡相关基因(差异表达基因),对差异表达基因进行基因本体论(GO)功能富集分析与京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。采用多因素COX回归模型筛选出与卵巢癌患者预后有关的坏死性凋亡相关基因。根据多因素COX回归结果构建卵巢癌预后风险模型,根据该模型风险评分中位数将卵巢癌样本分为高风险组和低风险组,采用Kaplan-Meier法比较高风险组和低风险组患者的生存情况,采用受试者工作特征(ROC)曲线验证卵巢癌预后风险模型的评估效能。通过COX回归模型分析卵巢癌预后的独立影响因素,并通过列线图展示卵巢癌独立预后影响因素与卵巢癌患者总生存率的相关性。结果(1)确定卵巢癌中有25个差异表达基因,包括13个上调基因与12个下调基因。(2)GO分析结果显示,差异表达基因涉及的生物学过程包括调节凋亡信号通路等,涉及的细胞组分主要为晚期内体膜等,涉及的分子功能主要包括细胞因子活性等。KEGG通路富集分析结果提示,差异表达基因主要富集在坏死性凋亡等信号通路。(3)多因素COX回归模型分析结果显示,信号转导与转录激活因子4(STAT4)基因和钙/钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ型亚基α(CAMK2A)基因与卵巢癌患者预后相关(P<0.05),其中STAT4基因属于保护基因,CAMK2A基因为危险基因。(4)构建基于STAT4基因和CAMK2A基因的卵巢癌预后风险模型,生存分析结果显示高风险组患者总生存期低于低风险组(P<0.05),根据此模型评估卵巢癌患者1年、2年和3年生存情况的曲线下面积分别为0.575、0.616和0.593。(5)COX回归分析结果显示,该模型风险评分是卵巢癌患者预后的独立影响因素(P<0.05);基于卵巢癌独立预后影响因素构建的预测患者总生存期的列线图C指数折线图、列线图校准曲线分析结果提示列线图具有较好的准确性。结论坏死性凋亡相关基因中的STAT4基因和CAMK2A基因与卵巢癌患者预后相关,其中STAT4基因属于保护基因,CAMK2A基因为危险基因,基于STAT4基因和CAMK2A基因构建的卵巢癌预后风险模型对评估卵巢癌患者预后具有一定价值。

水稻类病变坏死突变基因的RAPD标记

中籼3037诱变得到新的类病变坏死突变体Sp1801,以粳稻品种02428为父本与其杂交构建分离群体,并利用RAPD技术对此突变相关基因进行了遗传连锁分析,引物OPI11和OPL03扩增的稳定的差异片段与突变性状紧密连锁,两标记与目的基因的遗传距离分别为0 6cM和5 6cM,并且两差异片段分别为556bp和944bp,因此OPI11 556和OPL03 944可以作为此突变基因的RAPD标记。序列同源性分析表明,OPI11 556与一个抗稻瘟病基因pib有高度同源性。

诱导型一氧化氮合酶及肿瘤坏死因子-α基因多态与矽肺易感性

目的探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因多态性与矿工矽肺易感性的关系.方法采用病例对照设计,以男性矽肺病人184例为病例组,111例无矽肺的男性接尘矿工为对照组.应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)技术检测iNOS Ser608Leu和TNF-α-308位点的多态性.结果 iNOS Ser608Leu位点携带T等位基因(C/T或T/T)的个体患矽肺的危险性降低(OR=0.48,95%CI=0.29～0.80),且与矽肺期别相关(P＜0.01).在矽尘高暴露组中,T等位基因的保护作用明显(OR=0.43,95%CI=0.24～0.78).TNF-α-308基因多态与矽肺危险性之间无相关性(P＞0.05),但携带A等位基因(G/A或A/A基因型)的吸烟工人更易发生矽肺(OR=2.48,95%CI=1.16～5.32).结论iNOS基因16外显子C＞T突变可能是抵抗矽肺发生和发展的保护因素,TNF-α-308位点基因多态在矽肺发病的遗传易感因素中不起主要作用,但该多态性与吸烟有交互作用.

肿瘤坏死因子-α基因与精神分裂症传递不平衡的研究

目的 探讨肿瘤坏死因子-α基因（TNF-α）-C863A和-G308A多态性位点在精神分裂症发病机理中的作用。方法 收集172个来自广东潮汕地区的精神分裂症核心家系，采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法，检测所有研究对象的肿瘤坏死因子-α基因-C863A和-G308A多态性位点的基因型，并进行单体型相对风险和传递不平衡检验。结果 单体型相对风险分析：-C863A位点x^2=0．05，P〉0．05，-G308A位点x^2=0．87，P〉0．05。单位点传递不平衡检验：-C863A位点x^2=0．19，P〉0．05，-G308A位点x^2=0．80，P〉0．05；多位点单体型分析结果表明，由这两个位点组成的单体型不存在过度传递。在106家以阳性症状为主的精神分裂症家系中，有一条单体型，C863-A308，其x^2=4．00，P〈0．05，表明该单体型在以阳性症状为主的精神分裂症家系中过度传递。结论 在广东潮汕人群中，肿瘤坏死因子α基因可能在阳性症状为主的精神分裂症患者发病机制中起一定作用。

肿瘤坏死因子α刺激基因6因子对脑梗死大鼠血脑屏障的保护作用

目的探讨肿瘤坏死因子α刺激基因6因子(TSG-6)对脑梗死大鼠血脑屏障(BBB)通透性及紧密连接蛋白ZO-1和Claudin5表达的影响。方法将42只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组6只、溶剂治疗组18只和TSG-6治疗组18只,后2组按再灌注时间分为再灌注1d组、3d组、5d组,每个亚组6只。线栓法制备大鼠大脑中动脉脑栓塞模型。TTC染色评价脑梗死体积;荧光分光光度法测定缺血侧脑组织伊文蓝(EB)含量评价BBB的通透性;神经功能损害评分(mNSS)评价神经功能改善情况;Western blot法检测脑组织ZO-1和Claudin5蛋白的表达。结果与溶剂治疗组比较,TSG-6治疗组大鼠缺血再灌注3d组和5d组mNSS评分、脑梗死体积和伊文蓝含量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05),TSG-6治疗组3d组和5d组脑梗死侧的ZO-1和Claudin5蛋白含量明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TSG-6能够有效的抑制脑梗死大鼠BBB紧密连接蛋白ZO-1和Claudin5表达的丢失,促进BBB修复,减轻脑水肿,加快神经功能恢复。

肿瘤坏死因子β基因多态性与吉兰-巴雷综合征不同亚型的关联研究

目的：研究肿瘤坏死因子βTNFβ基因多态性与吉兰-巴雷综合征（ GBS ）的两种主要亚型-急性炎症性脱髓鞘性多发性神经病（AIDP）和急性运动性轴索型神经病（AMAN）的易感性和预后的关系。方法对我院在2008至2011年收治的吉兰-巴雷综合征患者进行电生理标准分型，在疾病高峰期和发病1年后随访时进行Hughes神经功能评分；采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（ PCR-RFLP ）技术对41例AIDP患者、52例AMAN患者和98名健康人进行TNFβ基因多态性分析。结果 AIDP组TNFβ基因型分布与对照组没有差别，TNFβG等位基因频率明显高于对照组（37．8％，25％）；AMAN组TNFβ基因型分布与对照组相比有差别，TNFβG等位基因频率明显高于对照组（40．4％，25％），P＜0．05；GBS重症型患者（Hughes评分4～6分）TNFβG等位基因频率明显高于对照组（40．6％，25％），P＜0．05。 GBS预后较差患者（Hughes评分＞2分）TNFβG等位基因频率明显高于对照组（47．5％，25％），P＜0．05。结论 TNFβG等位基因与GBS两种亚型的易患性有关，携带有TNFβG等位基因患者更倾向有较严重的疾病病程且预后较差。

肿瘤坏死因子受体2基因多态性与冠心病分型的相关性分析

目的研究肿瘤坏死因子受体2基因6号外显子rs1061622(+676)位点的基因型及血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2与冠心病临床分型及其危险因素的关系,分析两者与冠心病分型的相关性。方法选取经冠状动脉造影证实为冠心病的患者250例,其中稳定型心绞痛54例、不稳定型心绞痛110例、急性心肌梗死86例;同时选取我院正常体检者98例作为对照组。记录所有研究对象的病史、体格检查、辅助检查、冠状动脉造影结果等临床资料。采用聚合酶链反应-连接酶检测反应的方法检测各组肿瘤坏死因子受体2(+676)位点的等位基因及基因型频率;应用酶联免疫吸附法测定各组血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2水平。同时结合其基因型综合分析冠心病各临床分型与血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2水平、基因型的关系及肿瘤坏死因子受体2基因型与血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2间的关联度。结果 (1)肿瘤坏死因子受体2(+676)位点上有3种基因型,即TT、TG和GG型;(2)在冠心病组,肿瘤坏死因子受体2(+676)位点GG基因型频率(6.8%)高于对照组(4.1%),差异有统计学意义(P=0.008);冠心病组G等位基因频率高于对照组(χ2=3.993,P=0.046);(3)稳定型心绞痛组T/G等位基因频率与不稳定型心绞痛组、急性心肌梗死组相比差异有统计学意义(P<0.05),不稳定型心绞痛组与急性心肌梗死组相比差异无统计学意义;(4)在冠心病组中,血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2水平显著高于对照组,差异有统计学意义,冠心病组3种基因型血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2水平与对照组比较有统计学差异,但对照组和冠心病组中血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2水平与各自的基因型和等位基因无明显关联;(5)TG+GG基因型的患者空腹血糖、总胆固醇、收缩压水平与TT基因型患者相比差异无统计学意义,且患冠心病的风险是TT型的1.648倍。结论肿瘤坏死因子受体2(+676)位点G等位基因可能是山西汉族人群冠心病发病的危险因素;可溶性肿瘤坏死因子受体2血浆水平可间接反映机体的炎症状态,用于冠心病的病情监测;可溶性肿瘤坏死因子受体2血浆水平与肿瘤坏死因子受体2基因型之间无明显的关联。

肿瘤坏死因子基因rs1799964多态性与慢性牙周炎易感相关性

目的探讨肿瘤坏死因子TNF-α基因单核苷酸多态位点与慢性牙周炎易感相关性。方法选择慢性牙周炎患者156例作为实验组,健康者161例作为对照组。利用PCR结合测序技术对两组患者肿瘤坏死因子rs1799964多态位点(C/T)多态性进行检测,并利用统计学软件对组间数据进行分析。结果 CC、CT、TT三种基因型在实验组中的检出分别为37例(0.237)、46例(0.295)、73例(0.468),在对照组中的检出例(率)分别为59例(0.366)、51例(0.317)、51例(0.317),组间差异具有统计学意义(P<0.05)。等位基因C和T在实验组中的检出率为0.353和0.647,在对照组中的检出率为0.525和0.475,经统计学分析显示组间差异亦具有统计学意义。结论 rs1799964基因多态性与慢性牙周炎具有密切关联,基因型TT可能是易感基因型,而等位基因T可能是牙周炎的易感基因。

大鼠脊髓损伤后白细胞介素-10、肿瘤坏死因子-α基因表达的变化

目的 探讨大鼠脊髓损伤后白细胞介素 1 0 (IL 1 0 )、肿瘤坏死因子 α(TNF α)mRNA表达的时序变化规律。方法 SD大鼠 4 2只 ,随机分为 7组 ,采用改良Allen’s脊髓损伤打击模型 ,以逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法测定伤段脊髓组织中IL 1 0、TNF αmRNA的表达情况。结果 正常脊髓组织内存在IL 1 0、TNF αmRNA的表达 ;脊髓损伤后IL 1 0mRNA表达逐渐上调 ,伤后 72小时明显上调 ,1 6 8小时达到高峰 ;TNF αmRNA伤后 1小时表达明显上调并达峰值 ,高表达持续至损伤后 2 4小时。结论 脊髓继发性损伤过程中抗炎性细胞因子与前炎性细胞因子共同存在 ;

精神分裂症与肿瘤坏死因子α基因G308A启动子多态性的相关性分析

目的 探讨精神分裂症及临床特征与肿瘤坏死因子α（TNFα）-G308A多态性之间的相关性.方法 采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）的方法检测57例精神分裂症患者和30例健康对照者TNFα基因G308A位点的基因多态性;用酶联免疫吸附法测定血清TNFα水平;阳性与阴性症状量表评定精神分裂症患者的精神症状.结果 精神分裂症组与对照组的TNFα-308位点GG、GA、AA基因型及 G和A等位基因型频率的差异均无统计学意义（均P ＞0.05）;各基因型患者阳性症状、阴性症状及一般精神病学的总分差异均无统计学意义（均P ＞0.05）;精神分裂症组与对照组血清TNFα水平的差异无统计学意义[（123.6±56.2）pg/ml vs （103.2±66.7）pg/ml,P ＞0.05],组内TNFα-G308A3种基因型的血清TNFα水平差异无统计学意义（P ＞0.05）.结论杭州地区汉族人群TNFα-G308A多态性和血清TNFα的水平与精神分裂症无明显相关性,也可能对精神分裂症患者的阳性、阴性和一般病理学症状无影响.

不明原因习惯性流产与肿瘤坏死因子水平及肿瘤坏死因子α-308基因多态性的相关性初步研究

目的研究肿瘤坏死因子(TNF)水平及肿瘤坏死因子α-308基因多态性与不明原因习惯性流产的关系。方法用放免法测定50例不明原因习惯性流产患者及50例健康对照者血清TNF水平,用聚合酶链反应扩增TNF-α-308基因片段,NcoI内切酶进行限制性酶切反应。结果50例妊娠高血压综合征患者及50例正常对照TNF-α-308基因型及等位基因频率均无显著性差异,而血浆中TNF水平,不明原因习惯性流产组明显高于对照组(p<0.05)。结论炎性反应在不明原因习惯性流产病程中有重要作用,TNFα-308基因多态性与不明原因习惯性流产无关联。

肿瘤坏死因子α和肿瘤坏死因子α转化酶基因在糖尿病心肌病变大鼠心肌中的表达

对小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射加高脂饲料喂养建立糖尿病心肌病变大鼠模型的研究显示,模型组大鼠心肌组织中肿瘤坏死因子α(TNFα)和肿瘤坏死因子α转化酶(TACE)mRNA表达量均比正常组显著增高。

肿瘤坏死因子-α基因-环境交互作用与不明原因复发性流产易感性的关系

目的探讨肿瘤坏死因子(TNF)基因rs1800629、rs361525位点多态性及基因—环境交互作用与不明原因复发性流产(URSA)易感性的关系。方法使用SNaPshot多重SNP分型技术对150例URSA患者和150名健康对照检测TNF基因相关位点多态性,采用关联分析和广义多因子降维法(GMDR)分析其与URSA的关系。结果多因素回归分析显示,在共显性、显性和隐性遗传模式以及等位基因模式下,TNF基因rs1800629、rs361525位点均未发现与URSA发病风险增加有关(P>0.05)。但按流产次数进行分层分析,结果显示rs361525位点在显性遗传模式中,A等位基因携带者显著增加发生2次流产的风险(OR=2.402,95%CI:1.041~5.545)。GMDR分析显示,rs1800629、rs361525,工作属性存在交互作用。结论rs361525位点A等位基因可能为中国兰州地区URSA患者,特别是流产2次患者的易感等位基因。TNF基因-环境交互作用可能增加URSA发病风险。未发现TNF基因rs1800629多态性与USRA之间的联系。

肿瘤坏死因子基因多态性及与多发性硬化的相关性研究

目的对广东地区汉族MS患者作肿瘤坏死因子基因(tumornecrosisfactor,TNFβ)分型,探讨TNFβ基因与广东人群中MS遗传易感性的可能关系。方法采用聚合酶链式反应限制性片段长度多态性技术对30名无亲缘关系的MS的病人和103名无血缘关系的广东籍健康汉族人作TNFβ分型。结果TNFβ各等位基因型频率在MS组和正常人组间无显著差异(P均>0.5)。结论从目前调查的例数,广东人群中MS与TNFβ基因不关联。

猪源Bb SC-SN株的分离鉴定及其皮肤坏死毒素(DNT)全基因序列分析

【目的】了解当前支气管败血波氏杆菌（Bb）地方菌株皮肤坏死毒素（DNT）基因的变异特点。【方法】利用分离培养、PCR及16SrRNA扩增片段同源性分析,对采自四川遂宁某规模化猪场有明显萎缩性鼻炎症状的鼻拭子进行病原分离鉴定,并对分离株的DNT基因进行克隆和序列分析,对其抗原域、氨基酸二级结构、特定区域位于蛋白质表面可能性等参数进行预测,分析其B细胞抗原表位。【结果】成功分离得到一株支气管败血波氏杆菌,命名为支气管败血波氏杆菌SC-SN株。分离株DNT基因序列全长4 357bp,与其他11株菌DNT基因的核苷酸序列同源性为93.1%~100.0%,但由于其356位插入碱基A,使得该序列仅编码1 426个氨基酸,与上述11株DNT基因编码的氨基酸序列同源性仅为12.8%~47.0%。遗传进化树显示,SC-SN分离株与S798日本株和未知1株的亲缘关系最近。软件预测结果显示,Bb SC-SN株DNT基因编码氨基酸B细胞抗原表位发生较大变化。【结论】经鉴定,分离株确为支气管败血波氏杆菌,且SC-SN株的DNT基因序列变异较大,第356位插入的碱基A,对其氨基酸序列、ORF及B细胞抗原表位分布产生了较大的影响。

新型基因工程人肿瘤坏死因子-α的临床前研究

目的 研究一种新型基因工程人肿瘤坏死因子－α（ｎｒｈＴＮＦ－α）的临床前药理、毒理和药代动力学特性。方法观察ｎｒｈＴＮＦ－α对动物移植性肿瘤的抑制作用、毒副作用（如急性中毒反应和死亡情况，过敏反应，以及对神经系统、呼吸系统、心血管系统、造血系统和免疫系统的影响）及药代动力学变化。结果ｎｒｈＴＮＦ－α具有明显的抑瘤作用且呈剂量依赖性。对动物的急性中毒表现及病理变化与ｒｈＴＮＦ－α相似，未见其他不良反应。结论ｎｒｈＴＮＦ－α的抑瘤作用明显，毒副反应低，具有良好的临床应用前景。

牦牛肥胖基因和肿瘤坏死因子α基因的序列分析

肥胖基因(ob gene)是近年来刚被克隆的新基因,该基因的表达产物瘦蛋白(Leptin)具有调节体重、影响动物生长和繁殖率等一系列生物学功能.肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)是一种主要由活化单核巨噬细胞和T淋巴细胞产生的多效性细胞因子,对TNF-α基因的基础及应用研究已成为近年来动物抗病育种的研究热点之一.本文克隆及测序分析了牦牛上述两个基因的部分片段,结果表明:ob基因大小为1773bp,TNF-α基因为1160bp,通过genebank中的blastn比较分析牦牛ob基因和TNF-α基因与普通牛种的相应基因同源性都高达98％.