坏死性凋亡分子机制及与牙周炎的相关性

背景:近年来,随着细胞死亡研究的不断深入,坏死性凋亡逐渐成为学术界研究的热点和难点,其多种信号通路及蛋白在牙周炎的发生发展中起到不可忽视的作用,人们试图通过阻止细胞坏死性凋亡的发生,从而延缓牙周组织炎症的进程。目的:就坏死性凋亡的分子机制及其与牙周炎的相关性进行综述,期望为牙周炎的预防、诊断、治疗及预后提供新思路、新方向。方法:第一作者于2023年10月应用计算机检索PubMed、中国知网等数据库建库到2024年4月发表的相关文献,以“坏死性凋亡,细胞程序性死亡,牙周炎,牙周,免疫,炎症,受体相互作用蛋白激酶1,受体相互作用蛋白激酶3,混合系列蛋白激酶样结构域”为中文检索词;“necroptosis,programmed cell death,periodontitis,periodontal,immunity,inflammation,RIP1,RIP3,MLKL”为英文检索词,阅读每篇文献的文题、摘要、引言进行初步筛选,最终纳入56篇文献进行总结分析。结果与结论:①牙周炎的主要发病机制为牙周致病菌刺激机体,导致牙周微环境发生改变,打破原有免疫平衡并释放各种炎症因子,引发炎症反应造成牙周组织破坏,坏死性凋亡可以调控牙周组织免疫炎症反应,从而影响牙周炎的发生发展进程;②坏死性凋亡的发生与多种蛋白、信号通路及信号分子有关,已有动物实验证实了磷酸化混合系列蛋白激酶样结构域(pMLKL)的表达量与炎症程度有关,且在患有牙周炎小鼠的牙周组织中,RIP3和pMLKL高表达,通过阻断RIP3/MLKL通路,有利于减少牙周组织炎症、控制牙周炎的进展;③探究pMLKL是否可作为牙周炎的诊断指标,在牙周炎的预防、诊断及治疗上有很大价值。

基于生物信息学筛选卵巢癌预后的坏死性凋亡相关基因

目的通过生物信息学筛选与卵巢癌患者预后的坏死性凋亡相关基因。方法从公共数据库下载坏死性凋亡相关基因、卵巢癌的基因表达和相关临床数据,利用RStudio 4.1软件筛选出在卵巢癌组织与卵巢正常组织间差异表达的坏死性凋亡相关基因(差异表达基因),对差异表达基因进行基因本体论(GO)功能富集分析与京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。采用多因素COX回归模型筛选出与卵巢癌患者预后有关的坏死性凋亡相关基因。根据多因素COX回归结果构建卵巢癌预后风险模型,根据该模型风险评分中位数将卵巢癌样本分为高风险组和低风险组,采用Kaplan-Meier法比较高风险组和低风险组患者的生存情况,采用受试者工作特征(ROC)曲线验证卵巢癌预后风险模型的评估效能。通过COX回归模型分析卵巢癌预后的独立影响因素,并通过列线图展示卵巢癌独立预后影响因素与卵巢癌患者总生存率的相关性。结果(1)确定卵巢癌中有25个差异表达基因,包括13个上调基因与12个下调基因。(2)GO分析结果显示,差异表达基因涉及的生物学过程包括调节凋亡信号通路等,涉及的细胞组分主要为晚期内体膜等,涉及的分子功能主要包括细胞因子活性等。KEGG通路富集分析结果提示,差异表达基因主要富集在坏死性凋亡等信号通路。(3)多因素COX回归模型分析结果显示,信号转导与转录激活因子4(STAT4)基因和钙/钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ型亚基α(CAMK2A)基因与卵巢癌患者预后相关(P<0.05),其中STAT4基因属于保护基因,CAMK2A基因为危险基因。(4)构建基于STAT4基因和CAMK2A基因的卵巢癌预后风险模型,生存分析结果显示高风险组患者总生存期低于低风险组(P<0.05),根据此模型评估卵巢癌患者1年、2年和3年生存情况的曲线下面积分别为0.575、0.616和0.593。(5)COX回归分析结果显示,该模型风险评分是卵巢癌患者预后的独立影响因素(P<0.05);基于卵巢癌独立预后影响因素构建的预测患者总生存期的列线图C指数折线图、列线图校准曲线分析结果提示列线图具有较好的准确性。结论坏死性凋亡相关基因中的STAT4基因和CAMK2A基因与卵巢癌患者预后相关,其中STAT4基因属于保护基因,CAMK2A基因为危险基因,基于STAT4基因和CAMK2A基因构建的卵巢癌预后风险模型对评估卵巢癌患者预后具有一定价值。

ASC在ONO-AE-248诱导的中性粒细胞非凋亡、非坏死性死亡中的表达

目的:探讨凋亡相关斑点样蛋白(Apoptosis-associated speck-like protein,ASC)在ONO-AE-248所诱发的中性粒细胞非凋亡、非坏死性死亡中的作用及意义。方法:TUNEL法标记凋亡细胞,结合激光共聚焦扫描显微镜观察细胞核形态以及DNA片段化发生的情况;Western blot法检测不同药物刺激组(LPS延迟凋亡组、TNF-α促进凋亡组、ONO-AE-248刺激组以及自发性凋亡组)的ASC蛋白的表达差异性。结果:TUNEL法检测ONO-AE-248培养12小时后的中性粒细胞,未见TUNEL阳性细胞。Western blot结果显示ONO-AE-248刺激后中性粒细胞ASC蛋白的表达一直处于下调状态。结论:ONO-AE-248诱导人中性粒细胞死亡过程中细胞核DNA断裂方式明显不同于自发性凋亡组,核内染色体可能只发生DNA较大片段的断裂,而没有发生小片段化。ONO-AE-248引起的ASC表达的下调可能是这种新型细胞死亡方式区别于自发性凋亡的重要差异点。

坏死性凋亡在肠道炎症中作用机制的研究进展

坏死性凋亡是一种以半胱天冬酶非依赖性方式调节的细胞死亡形式,主要由受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)、受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)和混合谱系激酶结构域样(MLKL)介导。在肠道炎症中,坏死性凋亡导致细胞膜破裂释放损伤相关的分子模式(DAMPs),促进结肠炎的发生发展。本文主要针对坏死性凋亡在肠道炎症中的调控机制以及近年报道的通过抑制坏死性凋亡缓解结肠炎症的药物进行综述,以期补充提供靶向坏死性凋亡治疗结肠炎的理论依据。

非凋亡程序性细胞死亡在代谢相关脂肪性肝病中的作用

既往认为程序性细胞死亡就是指凋亡,因此代谢相关脂肪性肝病中肝细胞死亡的最重要原因也被默认为凋亡。随着越来越多非调亡程序性细胞死亡(铁死亡、坏死性凋亡、焦亡等)的发现,它们与炎症、活性氧、免疫信号活化高度相关的特征日益受到重视。大量证据表明,相较于“免疫沉默”的凋亡,非凋亡程序性细胞死亡似乎在代谢相关脂肪性肝病的肝细胞死亡中起到更为关键的作用,焦亡的特点是在肝脏组织中诱导大量炎症分子释放,坏死性凋亡的特点是导致肝细胞彻底坏死,铁死亡的特点则是出现较为剧烈的脂质氧化应激。本文旨在阐述非凋亡程序性细胞死亡与代谢相关脂肪性肝病的联系,并对它们在代谢相关脂肪性肝病中的可能作用机制进行探讨。

食管癌坏死性凋亡关键基因的筛选与验证

目的:运用生物信息学分析以及验证坏死性凋亡基因在食管癌中的潜在作用机制。方法:利用生物信息学技术对数据集GSE38129行差异表达分析并与坏死性凋亡基因组交叉获取坏死性凋亡的差异基因(NRDEGs)。采用基因集富集分析评价食管癌的基因富集信号通路。利用STRING数据库和Cytoscape软件可视化蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,鉴定NRDEGs中的Hub基因。利用基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)对NRDEGs进行了富集分析。利用Network Analyst数据库预测坏死性凋亡相关转录因子-靶基因调控网络,CIBERSORT算法分析免疫浸润模式,探讨免疫细胞类型与Hub基因表达的相关性。为了确定组间相关性,进行了Spearman秩检验。结果:共筛选出29个NRDEGs。NRDEGs主要参与坏死性凋亡、甲型流感、NOD-样受体信号通路。预测了113个NRDEGs相关转录因子,并且发现食管癌中CD4+T细胞和树突状细胞活化明显失衡(Hub基因与CD4+T细胞和树突状细胞呈正相关)。结论:NRDEGs(29个基因)与食管癌的发生发展相关,其可能通过介导肿瘤的免疫机制参与食管癌的病理生理过程。

百草枯所致肺损伤大鼠肺组织凋亡情况及凋亡相关基因表达情况

目的分析百草枯所致肺损伤大鼠肺组织的凋亡情况,并基于基因芯片技术探讨大鼠肺组织凋亡相关基因表达变化。方法取18只SD大鼠,随机分为百草枯组和阴性对照组各9只,给予百草枯组大鼠腹腔注射百草枯建立急性肺损伤模型,阴性对照组大鼠腹腔注射等量的生理盐水。应用脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测两组大鼠肺组织细胞凋亡情况。采用大鼠细胞凋亡PCR芯片检测两组大鼠肺组织凋亡相关基因的表达情况,并对测序数据进行生物信息学分析,筛选出有意义的差异表达基因进行实时定量PCR验证。结果百草枯组大鼠肺组织中TUNEL阳性细胞比例高于阴性对照组(P<0.05)。共筛选出3个差异表达基因,百草枯组大鼠肺组织的TNFSF10、FASLG和TNFRSF1B基因表达降低,与PCR验证结果具有一致性。结论百草枯导致的肺损伤大鼠肺组织存在凋亡,可能与凋亡相关基因TNFSF10、FASLG和TNFRSF1B的表达下调有关。

坏死性凋亡在结直肠癌中的作用及研究进展

结直肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤,目前,全球50岁以下结直肠癌患者的数量在不断增长。由于易对化疗药物产生耐药性,结直肠癌患者的预后差、死亡率高,寻找治疗结直肠癌的其他方法迫在眉睫。坏死性凋亡是一种由多种细胞因子和模式识别受体介导的程序性坏死,越来越多的研究表明,坏死性凋亡相关DNA/RNA可以提示患者预后,诱导肿瘤细胞发生坏死性凋亡有希望治疗结直肠癌。本文介绍了坏死性凋亡的具体机制及其在结直肠癌中的作用,并列举了近些年发现的针对结直肠癌坏死性凋亡的靶向药物。

构建与坏死性凋亡相关预后模型预测胶质瘤预后

本研究旨在探讨胶质母细胞瘤中坏死性凋亡相关的lncRNAs(NRL)的预后特征,为胶质母细胞瘤(GBM)的治疗提供新的治疗靶点。方法 从肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中提取GBM基因表达谱,从KEGG数据库中下载坏死性凋亡相关基因,通过差异分析确定差异表达的NRL。通过构建矩阵、单变量和LASSO(最小绝对收缩和选择算子)分析确定了与预后相关的NRL。多因素分析构建预后特征,随后进行GO(基因本体论)和KEGG(京都基因与基因组百科全书)富集分析。结果 我们构建了9个与坏死性凋亡相关的lncRNAs(LINC01574、LINC02321、TMEM132E-DT、ZMIZ1-AS1、RNF216P1、RARA-AS1、ZNF516-AS1、MFF-DT、FAM27E3)的预后模型。测试组和训练组的AUC在1年时分别为0.657和0.887,在2年时分别为 0.791 和 0.928,在3年时分别为0.825和0.935决策曲线分析(DCA)显示坏死性凋亡相关特征表现优于所有病理特征。多因素Cox回归分析显示风险评分是独立的预后因素。主成分分析(PCA)图可明显区分高、低危患者的生存概率。风险评分根据免疫状态,将GBM患者分为两个不同的组,随后进行GO和KEGG富集分析,富集主要的功能或者通路。结论 我们证实了坏死性凋亡相关的lncRNAs在胶质瘤起着重要作用。这些研究结果为了解胶质瘤的发病机制和治疗提供了有价值的指导,这些坏死性凋亡相关的lncRNAs可以作为胶质瘤预防的生物标志物和治疗靶点。 。

急性胰腺炎小鼠胰腺和远隔脏器组织TRAF6、XIAP表达变化及其与细胞凋亡的关系

目的观察急性胰腺炎小鼠胰腺和远隔脏器组织中肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达变化,并分析其与多脏器细胞凋亡的关系。方法将30只雄性C57BL/10SnJ小鼠随机分为对照组、急性水肿性胰腺炎(AEP)组、急性坏死性胰腺炎(ANP)组,每组10只。AEP组建立AEP模型,ANP组建立ANP模型,对照组注射等量磷酸盐缓冲盐水。采用RT-qPCR法检测各组胰腺组织中的TRAF6、XIAP mRNA,Western blotting法检各组胰腺、肠、肝、肺、肾组织中的cleaved Caspase-3、TRAF6、XIAP蛋白。采用TUNEL法测算胰腺、小肠、肝、肺、肾组织细胞凋亡率。结果ANP组、AEP组胰腺及多个远隔脏器组织中TRAF6、XIAP蛋白表达与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.05);AEP组胰腺组织中XIAP mRNA表达低于ANP组(P<0.05);AEP组胰腺、肠、肝、肺、肾组织中TRAF6蛋白表达高于ANP组,XIAP蛋白表达低于ANP组(P均<0.05)。AEP组胰腺、肠、肝、肺、肾组织细胞凋亡率及cleaved Caspase-3表达高于ANP组和对照组(P均<0.05)。胰腺炎小鼠胰腺及多个远隔脏器组织中cleaved Caspase-3蛋白表达与TRAF6蛋白表达呈正相关,与XIAP蛋白表达呈负相关(P均<0.05)。结论急性胰腺炎小鼠胰腺和远隔脏器组织中TRAF6、XIAP表达异常,且与细胞凋亡指标存在相关性;TRAF6、XIAP在AEP与ANP中的表达趋势有所差异,TRAF6、XIAP对细胞凋亡的调控作用可能与急性胰腺炎严重程度有关。

坏死性凋亡相关复合物与肿瘤

坏死性凋亡相关复合物是坏死性凋亡信号通路中的关键信号分子。它的形成受到坏死小体和坏死性凋亡小体等一系列因素的调控。研究发现,坏死性凋亡相关复合物与多种肿瘤密切相关,如胰腺导管腺癌、胶质瘤等。深入研究其调控机制有望为肿瘤分子治疗提供新思路。

清肺口服液黄酮类成分对呼吸道合胞病毒感染小鼠坏死性凋亡的影响

目的研究清肺口服液黄酮类成分对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染小鼠坏死性凋亡的影响。方法将BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组及黄酮类成分低、高剂量(30、60 mg/kg)组和利巴韦林(46 mg/kg)组,建立RSV感染的小鼠模型,给药4 d后,苏木素-伊红(HE)染色法观察肺组织病理学变化;qRT-PCR检测肺组织中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和RSV-F mRNA表达;流式细胞术检测肺组织细胞坏死性凋亡率;ELISA法检测小鼠肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)水平;Western blotting检测肺组织受体相互作用蛋白激酶1(receptor-interacting protein 1,RIP1)、RIP3、混合系列蛋白激酶样结构域(mixed lineage kinase domain-like,MLKL)、磷酸甘油酸变位酶5(phosphoglycerate mutase 5,PGAM5)、动力相关蛋白1(dynamin-related protein1,DRP1)蛋白表达;免疫荧光检测肺组织RIP1和RIP3的共定位以及p-MLKL与上皮细胞的共定位。结果与模型组相比,黄酮类成分组小鼠肺组织病理损伤减轻;肺组织中IL-6、TNF-α和RSV-F m RNA表达水平降低(P<0.05、0.01);肺组织细胞坏死性凋亡率下降(P<0.05、0.01);BALF中HMGB1和LDH水平降低(P<0.05、0.01);肺组织RIP1、RIP3、MLKL、PGAM5、DRP1蛋白表达水平均显著降低(P<0.05、0.01);肺组织RIP1/RIP3坏死复合物的形成减少,肺上皮细胞中p-MLKL的荧光表达降低。结论清肺口服液黄酮类成分可能通过调节RIP1/RIP3/MLKL/PGAM5/DRP1信号通路,抑制坏死性凋亡,改善RSV感染的小鼠肺部炎症损伤。

坏死性凋亡在下肢缺血再灌注损伤中的作用

目的:探讨坏死性凋亡在下肢缺血再灌注损伤中的作用。方法:按照随机数字表法将29只雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(Sham组,n=9)、缺血再灌注组(IR组,n=9)、Nec-1+缺血再灌注组(Nec-1+IR组,n=11)。制备下肢缺血/再灌注模型,Nec-1+IR组在再灌注前1 h,再灌注后1、48 h腹腔注射Nec-1(1 mg/kg)。24 h后处死大鼠,取血浆及比目鱼肌标本,检测血浆中肌酸激酶(CK)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量。蛋白质印迹法(Western blot)检测受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)和受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)蛋白表达水平;光镜观察肌肉组织显微结构。结果:与Sham组相比,IR组MDA及CK含量升高,而SOD含量降低,差异均有统计学意义(P均<0.05);与IR+Nec-1组相比,IR组MDA及CK含量升高,差异无统计学意义(P>0.05),而SOD含量降低,但差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot显示Nec-1+IR组RIPK1和RIPK3表达量明显低于IR组。光镜下可看到IR组肌肉组织间隙明显水肿,血管周围炎细胞浸润较Nec-1+IR组及Sham组增多。结论:坏死性凋亡参与下肢骨骼肌缺血再灌注损伤,给予Nec-1可减轻大鼠下肢缺血再灌注损伤。

不同浓度脂多糖对脓毒症急性肺损伤肺上皮细胞坏死性凋亡和线粒体自噬的影响

目的观察不同浓度脂多糖(lippopolysaccharide,LPS)对肺上皮细胞坏死性凋亡和线粒体动力学相关蛋白1(dynamin related protein 1,Drp1)依赖的线粒体自噬的影响,探讨LPS制作脓毒症急性肺损伤模型的合适浓度。方法对数生长期A549细胞分为对照组、5 mg/L LPS组、10 mg/L LPS组、25 mg/L LPS组、50 mg/L LPS组,5 mg/L LPS组、10 mg/L LPS组、25 mg/L LPS组、50 mg/L LPS组分别采用PBS稀释的5、10、25、50 mg/L LPS处理16 h,对照组给予等体积PBS培养16 h。采用Western blot法检测各组细胞坏死性凋亡标志蛋白p-RIP3、RIPK1、p-MLKL和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α以及线粒体自噬标志蛋白PINK1、LC3B、Drp1、p-Mfn2相对表达量,并采用JC-1线粒体探针检测线粒体膜电位。结果10、25、50 mg/L LPS组细胞p-RIP3、RIPK1、p-MLKL、TNF-α、PINK1、Drp1、LC3B蛋白相对表达量依次增高(P<0.05),且均高于5 mg/L LPS组和对照组(P<0.05)。10、25、50 mg/L LPS组p-Mfn2蛋白相对表达量(1.043±0.085、0.844±0.085、0.204±0.040)和细胞线粒体膜电位(7.323±0.331、6.429±0.456、4.661±0.456)依次降低(P<0.05),且均低于5 mg/L LPS组(1.288±0.035、9.013±0.648)和对照组(2.497±0.440、14.392±1.216)(P<0.05)。5 mg/L LPS组细胞p-RIP3、RIPK1、p-MLKL、TNF-α、PINK1、LC3B蛋白相对表达量高于对照组(P<0.05),p-Mfn2蛋白相对表达量和细胞线粒体膜电位低于对照组(P<0.05),Drp1蛋白相对表达量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论10~50 mg/L LPS可诱导肺上皮细胞发生坏死性凋亡,可能与Drp1依赖的线粒体自噬有关;10~50 mg/L LPS可能是建立脓毒症急性肺损伤细胞模型的较合适浓度。

磷酸甘油酸变位酶5介导线粒体自噬与坏死性凋亡的研究进展

线粒体自噬是选择性降解损伤的线粒体以保证正常的线粒体数量和质量,对维持细胞内稳态与存活具有重要意义;坏死性凋亡是一种程序性细胞坏死,可由过度线粒体自噬诱导。活性氧(ROS)主要由线粒体产生,可损伤线粒体。高氧性急性肺损伤(HALI)是临床氧疗的严重并发症,致病机制不明确,现有研究表明,线粒体自噬与坏死性凋亡参与了HALI的发生过程。调控线粒体自噬与坏死性凋亡的机制众多,包括肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、PTEN诱导激酶1/PARK2基因编码的E3泛素蛋白连接酶(PINK1/Parkin)蛋白通路、磷酸甘油酸变位酶5(PGAM5)等,其中PGAM5已被证实是连接线粒体自噬和坏死性凋亡的关键因子。本课题组前期研究发现,微小RNA-21-5p(miR-21-5p)减轻HALI的机制与其靶向PGAM5介导的抑制线粒体自噬有关,但PGAM5介导的线粒体自噬和坏死性凋亡的机制尚不清楚。因此,本文就PGAM5介导线粒体自噬与坏死性凋亡的靶点进行综述,以期寻找到在HALI中PGAM5介导线粒体自噬与坏死性凋亡的靶点对肺保护的线索,为后续基础研究提供理论基础。

中性粒细胞凋亡对急性胰腺炎相关性肺损伤的影响

目的研究中性粒细胞(PMN)在急性胰腺炎相关性肺损伤(PALI)中自发性凋亡的变化及与肺损伤的相关性,探讨PMN凋亡在这一过程中的病理意义。方法采用5%牛磺胆酸钠(TAC)逆行胆胰管注射造成大鼠急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)模型。将36只实验动物随机分为AHNP组、假手术组及地塞米松(DXM)治疗组,3h后处死动物。从支气管肺泡灌洗液分离PMN,在体外分别孵育1、3、6h后,以AnnexinV/PI双染色法测定其自发性凋亡率。取肺组织测定肺湿/干比值、髓过氧化物酶(MPO)含量及肺通透性指数,研究自发性凋亡率与肺损伤之间的相关性。结果三组大鼠支气管肺泡灌洗液PMN的自发性凋亡率随体外孵育时间的延长而逐渐增加;在3、6h时,AHNP组均低于假手术组及DXM治疗组,而肺温/干比值、MPO含量及肺通透性指数则高于后两组。AHNP组3h凋亡率与肺温/干比值、MPO含量及肺通透性指数呈负相关。结论肺PMN凋亡减低与PALI大鼠模型肺损伤成负相关,同时伴有活性增强,是PALI发生的重要原因;DXM可减轻PALI,与其促进PMN凋亡。

髓样分化蛋白2介导脓毒症相关性脑病的机制研究

目的通过脂多糖(LPS)建立脓毒症相关性脑病(SAE)体外模型,探讨人髓样分化蛋白2(MD2)在LPS导致神经元死亡过程中的作用及内在机制。方法选择健康C57BL/6J孕鼠,孕期14~18 d,取胎鼠脑皮质组织,用0(空白对照组)、1、5和10 g/L的LPS刺激神经元后24 h,检测乳酸脱氢酶(LDH)释放量,观察神经元死亡情况,并用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子白细胞介素(IL-6、IL-1β)水平,以确定建立SAE体外神经炎症模型的最佳LPS剂量。将细胞分为空白对照组和LPS组,用原位末端缺刻标记法(TUNEL)染色检测细胞凋亡情况,用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测相关蛋白标志物活化天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)表达、坏死性凋亡相关蛋白神经元受体相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶3(RIPK3)及磷酸化RIPK3(p-RIPK3)水平,用免疫荧光化学染色检测p-RIPK3和微管相关蛋白2(MAP2)的表达,以评估细胞死亡类型及神经元死亡程度;用Western blotting法检测MD2表达,免疫荧光化学染色观察p-RIPK3及MD2在神经元中的表达和分布,以评估MD2是否参与炎症反应促进神经元死亡。此外,将细胞分为空白对照组、LPS组和MD2干扰肽组(LPS+TC组),检测IL-6、IL-1β、LDH水平,评估干扰MD2能否减轻LPS诱导的神经炎症。结果10 g/L LPS可诱导明显的神经元死亡,该浓度刺激神经元24 h后LDH释放量较空白对照组明显增加(相对释放量:1.45±0.04比1.00±0.00,P<0.01),神经元发生凋亡及坏死性凋亡,炎症因子IL-6、IL-1β水平显著增加〔IL-6(相对水平):1.94±0.04比1.00±0.00,IL-1β(相对水平):1.53±0.09比1.00±0.00,均P<0.01〕。与空白对照组比较,LPS组TUNEL检测细胞凋亡明显增多,活化caspase-3表达明显增加(活化caspase-3/GAPDH:1.55±0.10比1.00±0.00,P<0.01),p-RIPK3/RIPK3比值明显升高(相对值:1.54±0.06比1.00±0.00,P<0.05),神经元周围p-RIPK3表达显著增多,提示脓毒症环境下神经元发生显著凋亡及坏死性凋亡。同时,与空白对照组比较,LPS组MD2表达量显著增加(MD2/GAPDH:1.91±0.07比1.00±0.00,P<0.01),神经元周围MD2表达显著增多,提示LPS诱导的MD2上调可能在脓毒症神经炎症及诱导神经元死亡中发挥关键作用。此外,与LPS组比较,MD2干扰肽能够降低炎症因子IL-6、IL-1β的表达水平〔IL-6(相对水平):1.16±0.08比1.94±0.04,IL-1β(相对水平):1.15±0.05比1.75±0.09,均P<0.01〕,减少LDH释放(相对释放量:1.09±0.01比1.44±0.04,P<0.05)。结论LPS刺激神经元通过MD2诱导神经元炎症反应,最终导致神经元发生凋亡和坏死性凋亡;干扰MD2功能可减轻炎症,抑制神经元死亡。