直流电刺激对鼠坐骨神经切断后脊髓运动神经元凋亡相关基因表达的影响(英文)

背景:周围神经损伤能致脊髓神经元的凋亡,严重影响神经修复后功能的恢复。电刺激能有效促进神经的再生,但对神经元凋亡的影响研究较少。目的:观察直流电场对鼠坐骨神经切断后脊髓运动神经元bcl-2,bcl-X/L,bax及c-jun表达的作用,探讨电刺激对预防细胞凋亡的机制。设计:采用随机对照实验研究。地点和对象:实验在上海同济大学附属铁路医院骨科完成,对象为雄性SD大鼠30只,6周龄,体质量180～220g。干预:将雄性SD大鼠随机分为对照组和实验组,每组15只大鼠。用10g/L硫喷妥钠(5mg/100g)腹腔麻醉后,在大鼠右侧臀肌间隙显露坐骨神经,距梨状肌下缘0.5cm处将坐骨神经切断,近端以5-0尼龙线作双重结扎,远端切除1cm后埋入股二头肌中,关闭切口。沿棘突后方正中切口,在T10～L3右侧椎板及棘突间钝性剥离骶棘肌,切除椎板,将电刺激器阳性盘状电极板置入T10椎板下硬膜囊之腹侧,阴性盘状电极板置入L3椎板上硬膜囊背侧,对照组置入无输出电流的刺激器,分批于术后1,4,7,14,28d取材。实验操作由同一组人员完成。主要观察指标:脊髓bcl-2,bcl-X/L,bax及c-jun的阳性运动神经元数。结果:坐骨神经切断后4,7,14d,电刺激组脊髓运动神经元bcl-2阳性数分别为(28.67±1.53),(34.67±1.53),(41.33±1.53)个;bcl-X/L阳性数分别为(23.00±4.36),

大鼠坐骨神经切断后GDNF mRNA在其向心端及脊髓表达的变化

目的 :探讨大鼠坐骨神经切断后胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF) m RNA在其向心端及脊髓表达的变化及其意义。 方法 :在切断 SD大鼠双侧坐骨神经后的不同时间采用半定量 RT- PCR方法 ,观察坐骨神经向心端及 T1 2 ～ L1 段脊髓GDNF m RNA表达的变化。 结果 :坐骨神经切断前 ,GDNF m RNA在坐骨神经及 T1 2 ～ L1 段脊髓微量表达 ,切断后其向心端及 T1 2 ～ L1 段脊髓表达逐渐减少 ,伤后 1、7、14、2 8d分别减少 10 %、38%、4 5 %、5 2 %及 2 0 %、6 8%、80 %、85 %。 结论 :坐骨神经切断后其向心端及 T1 2 ～ L1 脊髓 GDNF m RNA表达减少 ,推测是由于失去靶组织转运 GDNF m RNA所造成 ,为外源性GDNF应用于治疗脊髓损伤提供了实验依据。

大鼠坐骨神经切断后腰脊髓腹角内胶质细胞和神经元的可塑性变化

目的 :探讨大鼠单侧坐骨神经切断后腰脊髓腹角胶质细胞和运动神经元的反应及其相互关系。 方法 :用免疫组织化学技术、HE染色和Tunnel法 ,观察坐骨神经切断后 1,6 ,12 ,2 4h及 3,7和 14d腰脊髓腹角胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP)标记的星形胶质细胞、OX 4 2标记的小胶质细胞及运动神经元的变化。 结果 :坐骨神经切断侧腰脊髓腹角可见星形胶质细胞和小胶质细胞活化 ,星形胶质细胞的活化早于小胶质细胞 ;后期运动神经元发生凋亡 ,HE染色显示凋亡细胞周围为反应性OX 4 2阳性小胶质细胞和GFAP阳性星形胶质细胞包绕。 结论 :研究结果提示 ,坐骨神经切断后切断侧腰脊髓腹角活化的胶质细胞与凋亡的运动神经元之间关系密切。

兴奋性氨基酸受体对大鼠坐骨神经切断后脊髓神经细胞的影响

目的通过建立神经再生室模型观察α-氨基-3-羧基-5-甲基-4-异口恶唑丙酸(AMPA)受体对大鼠坐骨神经损伤后L3～6脊髓神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法雄性SD大鼠,随机分为4组:AMPA组,6-氰-7-硝基喹喔啉-2,3-二酮(CNQX)组,细胞内液组以及正常对照组,前3组手术切断右侧坐骨神经并用硅胶管套接,分别向套管内注入AMPA,CNQX,细胞内液5μl,术后1,2,4周应用TUNEL及免疫组化技术检测L3～6脊髓神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的情况。结果(1)不同时间段凋亡细胞检测结果:CNQX组犤(4.9±0.8)%,(14.1±2.6)%,(4.4±0.6)%犦,明显低于细胞内液组犤(9.4±1.7)%,(19.3±1.7)%,(6.6±0.6)%犦,AMPA组犤(14.4±1.6)%,(25.7±1.3)%,(9.1±0.9)%犦则高于细胞内液组,t=3.7～5.7,P均<0.01。(2)不同时间段Bcl-2的表达:CNQX组犤(13.1±2.3)%,(22.9±2.4)%,(10.3±2.7)%犦高于细胞内液组犤(9.0±1.9)%,(17.4±1.2)%,(7.7±1.7)%犦,相反AMPA组犤(5.0±0.9)%,(11.8±2.8)%,(4.5±1.1)%犦则低于细胞内液组,t=1.8～4.4,P<0.05～0.01。(3)不同时间段Bax的表达:CNQX组犤(4.2±0.9)%,(12.5±1.3)%,(3.9±0.5)%犦低于细胞内液组犤(7.9±3.0)%,(16.8±1.5)%,(6.9±1.6)%犦。而AMPA组犤(11.8±2.0)%,(21.8±1.8)%,(10.5?

大鼠坐骨神经切断后Src抑制的蛋白激酶C的底物的表达变化

目的探讨大鼠坐骨神经切断后,Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)在神经中的表达变化及其意义。方法制备成年SD大鼠坐骨神经切断模型。通过Western blotting和免疫组织化学方法检测坐骨神经切断后SSeCKS表达的时空变化。结果Western blotting显示,大鼠坐骨神经切断后,近端SSeCKS的表达逐步升高,伤后2d达到高峰,之后逐渐下降。远端SSeCKS表达于12h达到高峰,之后呈下降趋势。免疫组织化学方法结果表明,SSeCKS在神经断端处高表达,成簇状聚集;在远离断端处表达明显降低,分布亦较为均一。免疫荧光双标记结果显示,SSeCKS与S100、NF200及GAP43有部分共定位。结论大鼠坐骨神经切断后,可以引起SSeCKS的表达变化,其可能参与周围神经损伤后某些伤害性刺激信号分子的转导,并与损伤后神经的再生及功能修复有关。

坐骨神经切断致脊髓背根神经节损伤的实验研究

坐骨神经切断致脊髓背根神经节损伤的实验研究△庞清江罗永湘＊毛宾尧＊＊李保文目前，修复周围神经损伤的显微外科技术已相当精湛，但神经损伤后的恢复效果仍不尽人意。究其原因，虽然与周围神经损伤的部位、程度、修复时间及方法等诸多因素有关，但周围神经损伤后导致该...

坐骨神经切断大鼠脑脊液中CCK-8含量的动态变化及其与吗啡镇痛的关系

目的研究神经源性疼痛时吗啡镇痛效应的降低与中枢八肽胆囊收缩素(CCK8)的释放量之间的关系。方法以切断大鼠单侧坐骨神经作为引起神经痛的动物模型,用放射免疫分析法,观察术后第3,7,10和14天脑脊液中CCK8ir含量的变化,并在相应的时间点分别皮下注射吗啡(4mg/kg)和CCKB受体拮抗剂L365,260(0.5mg/kg),观察痛阈(辐射热甩尾潜伏期)的变化。结果(1)大鼠单侧坐骨神经切断后一周,脑脊液中CCK8样免疫活性物质(CCK8ir)的浓度(代表中枢CCK8的释放量)增加了125%,此时吗啡的镇痛效果降低,而CCK拮抗剂使吗啡镇痛效果提高。(2)坐骨神经切断后1.5～2周,中枢CCK8释放减少或保持正常水平,此时吗啡镇痛效果正常,CCK拮抗剂也不能使其效应进一步提高。(3)假手术组大鼠于第14天(第四次注射吗啡)时,吗啡作用减弱(发生耐受),此时CCK拮抗剂显示出对吗啡镇痛的加强作用。结论单侧坐骨神经切断后一周吗啡镇痛效果减弱,可能与当时中枢CCK8释放过多有关。切断坐骨神经后中枢释放CCK8水平的变化,是影响阿片镇痛的重要因素。

坐骨神经切断后Fas、FasL和Caspase-3在脊髓的分布

目的 :观察成年猫一侧坐骨神经切断后Fas、FasL和Caspase - 3在脊髓的分布。方法 :将成年猫坐骨神经切断后 2 4小时 ,处死取其脊髓 (L4)制作 8μm厚石蜡切片 ,用Fas、FasL、Caspase - 3(效价 :1:2 5 0 ,1:2 5 0 ,1:2 5 0 ,)行免疫组织化学ABC法染色。观察Fas、FasL、Caspase - 3在脊髓中的分布以及亚细胞定位。结果 :Fas阳性神经元遍布整个灰质 ,以背角为主 ,胞浆染色 ,灰质内胶质细胞阳性反应 ,细胞核染色。FasL阳性神经元遍布整个灰质 ,胞浆染色 ,未见胶质细胞阳性染色。Caspase - 3阳性反应神经元胞浆染色。结论 :一侧坐骨神经切断后 ,有Fas、FasL和Caspase- 3在猫脊髓分布 。

坐骨神经切断后胶质细胞源性神经营养因子mRNA的表达变化(英文)

目的探讨大鼠坐骨神经切断后,胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)mRNA在两侧断端的表达变化及其意义。方法采用Trizol一步法提取坐骨神经总RNA,取少量作紫外扫描分析和琼脂糖电泳分析,切断SD大鼠左侧坐骨神经,不同时间、半定量RT-PCR方法,观察两侧断端GDNFmRNA的表达变化。结果坐骨神经切断前,GDNFmRNA在两侧坐骨神经微量表达,为(6.5±1.3)%,坐骨神经切断后远断端表达逐渐增加,伤后1d(7.8±1.9)%,伤后7d(10.3±2.1)%,伤后14d(11.9±2.3)%,伤后28d(12.3±2.4)%,近断端表达逐渐减少,伤后1d(5.8±1.3)%,伤后7d(4.0±1.0)%,伤后14d(3.6±1.1)%,伤后28d(3.1±1.0)%。伤后1d与伤前比较(P>0.05,t=1.193,0.879),伤后7,14,28d与伤前比较(P<0.01,t=3.762,3.565,5.059,4.083,5.164,4.905)。结论GDNF在损伤信号的刺激下表达急剧增加,起到修复神经元的作用,为外源性GDNF治疗脊髓损伤提供了理论基础。

坐骨神经切断后脊髓前角GDNF mRNA的表达变化及其意义

目的 :探讨大鼠坐骨神经切断后 ,脊髓前角胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)mRNA的表达变化及其意义。 方法 :切断SD大鼠两侧坐骨神经 ,建立脊髓前角运动神经元损伤模型 ,应用半定量RT PCR方法 ,观察大鼠L3 L5脊髓前角运动神经元GDNFmRNA的表达。 结果 :坐骨神经切断前 ,GDNFmRNA在脊髓前角少量表达 ,坐骨神经切断后 1天表达减少 2 0 %,4天减少 40 %,7天减少 70 %,14天后减少 80 %。 结论 :脊髓前角运动神经元GDNFmRNA表达减少 ,是“细胞体 轴突 靶器官”轴质流中断所致 。

大鼠坐骨神经切断后VEGF及其受体flk-1在脊髓与脊神经节中的表达

目的观察大鼠坐骨神经切断后脊髓与神经节组织中血管内皮生长因子(VEGF)及其胎肝激酶-1(flk-1)受体的表达变化规律. 方法取成年雄性Wistar大鼠45只,对照组5只,实验组切断双侧坐骨神经后,在术后8 h、24 h、72 h、5 d、7 d、10 d、14 d、21 d取L4～L6段脊髓与相应脊神经节组织,采用免疫组织化学方法和图像分析技术,对VEGF及其flk-1受体的表达进行检测与分析. 结果大鼠正常脊髓与神经节组织中均存在VEGF及flk-1的表达,坐骨神经切断后其表达可反应性地增强,持续一段时间后迅速回落至正常水平.并且flk-1在胶质细胞及白质中的神经纤维也有所表达. 结论本实验从中枢神经元的角度揭示VEGF促周围神经再生机制,为今后进一步应用VEGF治疗外周神经损伤奠定基础.

Apelin对大鼠坐骨神经切断后脊髓前角神经元凋亡的影响

我们通过建立大鼠坐骨神经切断缝合术后动物模型，观察Apelin对脊髓前角神经元凋亡的影响。

加巴喷丁联合吗啡镇痛对坐骨神经轴索切断大鼠脊髓神经丝蛋白表达的影响

目的:观察加巴喷丁联合吗啡镇痛对坐骨神经轴索切断大鼠脊髓神经丝蛋白(NF200)表达的影响。方法:选择重量在180～220g的成年雄性SD大鼠24只,随机分为四组(n=6):假手术组(S组),模型组(M组),术前开始镇痛组(P组)和常规镇痛组(N组)。M组、P组和N组建立左侧坐骨神经轴索切断模型,P组在术前1d至手术后9d使用加巴喷丁联合吗啡镇痛,N组在手术当日至手术后第9天给予加巴喷丁联合吗啡镇痛,S组和M组仅给予生理盐水。分别于手术前1d和手术后第3、5、7、9天测定各组右后足50%机械刺激缩足阈值,手术后第10天取腰5节段脊髓分别行改良三色法染色和神经丝蛋白(NF200)免疫组化染色。结果:M组在手术后各天50%机械痛阈均较S组显著降低,而P、N组均恢复正常水平;M组神经三色染可见部分髓鞘彻底溃变,Aβ纤维发生位置变化,而N组和P组神经三色染较M组有一定的缓解;免疫组化结果显示M组NF200表达较S组显著增高,而P组和N组较M组明显降低。结论:加巴喷丁联合吗啡对坐骨神经轴索切断大鼠有良好的镇痛效果,同时可改善坐骨神经轴索切断后相应脊髓节段的解剖学变化和NF200的表达变化。

神经干细胞移植治疗坐骨神经半切断神经病理性疼痛的最佳剂量

背景：有研究表明神经干细胞移植治疗神经病理性疼痛有一定效果,但神经干细胞移植数量对神经病理性疼痛的疗效并不确切。目的：观察不同数量神经干细胞鞘内注射对坐骨神经半切断大鼠神经病理性疼痛及脊髓背角、背根神经节胶质源性神经营养因子表达的影响。方法：选取1只孕14-16 d SD大鼠制备神经干细胞悬液,分别以细胞数1×10^-3,1×10^-4,1×10^-5,1×10^-6,1×10^-7经坐骨神经半切断伤模型大鼠鞘内注入30μL,并设置模型组和假手术组作对照。记录术前1 d,术后1,3,7,14,21 d机械痛及热痛阈;术后7,21 d免疫组织化学与RT-PCR检测同侧脊髓背角及背根神经节胶质源性神经营养因子的表达。结果与结论：与假手术组比较,其他各组术后1 d痛阈下降,术后7,14 d最低（P〈0.05）;与模型组比较,术后7 d,随着移植神经干细胞的浓度不断增加,神经干细胞1×10^-4,1×10^-5,1×10^-6,1×10^-7组痛阈逐渐升高,脊髓背角及背根神经节胶质源性神经营养因子表达逐渐上调（P〈0.05）;术后21 d,神经干细胞1×10^-5,1×10^-6,1×10^-7组痛阈均与术前差异无显著性意义,但其胶质源性神经营养因子表达在神经干细胞1×10-5组最高（P〈0.05）。说明鞘内注射神经干细胞能缓解大鼠的神经病理性疼痛,注射剂量以1×10^-5神经干细胞效果最佳。

选择性坐骨神经分支部分切断术治疗膝关节屈曲痉挛

目的探讨选择性坐骨神经分支部分切断术治疗膝关节屈曲痉挛的效果。方法回顾分析2000年2月至2001年11月手术治疗的33例共计44侧膝屈曲痉挛状态的病人资料,所有病人均采用选择性坐骨神经分支部分切断术治疗。结果全部病人平均随访11.6个月。所有病人术后立即感膝部痉挛状态缓解,随访期间缓解率为91%(30/33)。术后2周内步态功能均有改善,随访期间改善者为87.88%(29/33)。生活质量在随访期间所有病人均有提高。术后发生小腿感觉障碍5例,随访期间3例完全恢复,2例部分恢复。无1例发生严重肌无力。结论选择性坐骨神经分支部分切断术是治疗膝关节屈曲痉挛安全有效的方法。

坐骨神经损伤后脊神经节神经元凋亡的形态学观察

周围神经损伤后,神经修复困难的原因之一是一定数量的神经元胞体死亡。运用NGF可保护感觉神经元胞体免于死亡,但对于细胞死亡的性质目前尚未肯定,因而对NGF的保护机理也就不清楚。本研究通过对大鼠坐骨神经切断再吻合后,观察其脊神经节感觉神经元的胞体形态变化,认为神经元死亡的主要形式是细胞凋亡(apoptosis)。

晚期周围神经损伤后感觉功能恢复中:脊髓后角P物质及降钙素基因相关肽的变化(英文)

背景:晚期周围神经损伤有无修复价值?如果脊髓神经元中P物质和降钙素基因相关肽的变化发生了不可逆的变化,其修复后也预示着感觉功能的缺失。目的:定量研究周围神经损伤24周后,脊髓后角中P物质和降钙素基因相关肽的变化。设计:建立以大鼠坐骨神经损伤为研究对象的实验模型,损伤后24周为最远期观察点,自身对照(对侧空白组),定量化研究。单位:第四军医大学骨科研究所。材料:实验于2002-10/2003-05在第四军医大学骨科研究所完成。SD大鼠55只,分成11组,即坐骨神经切断1,2,3,4,6,8,10,12,16,20,24周各组。干预:切断大鼠一侧坐骨神经并结扎其近端的方法建立周围神经损伤模型;另一侧为对照侧。应用计算机图像分析技术测试P物质和降钙素基因相关肽免疫反应区的面积。主要观察指标:各组大鼠脊髓后角中P物质和降钙素基因相关肽阳性纤维的终末分布面积的变化。结果:55只大鼠均进入结果分析。①P物质时间序列表示:周围神经损伤后2～6周,P物质在脊髓后角免疫反应区面积下降至最低,随之回升,至16周恢复正常,20,24周无明显的进一步变化。②脊髓后角降钙素基因相关肽阳性纤维和终末分布面积损伤与自身对照侧的比值:1周时1.14,6周时1.13,24周时0.29,各时间点基本相似(P>0.05)结论:周围神经损伤至晚期,脊髓后角及后根神经节细胞合成和分泌P物质及降钙素基因相关肽的功能尚未受到破坏,脊髓后角已处于一种稳定的平衡状态,仍有恢复感觉功能的神经学基础。

萌动激活灵芝孢子促进大鼠受损伤的脊髓运动神经元轴突再生的作用

目的探讨萌动激活灵芝孢子对大鼠坐骨神经切断再吻合后受损伤运动神经元轴突再生的影响。方法对单侧坐骨神经切断再吻合后的大鼠ig给予萌动激活灵芝孢子,通过电生理、荧光金(FG)逆行标记和组织学等方法观察受损伤运动神经元轴突再生情况。结果坐骨神经切断再吻合6周后,灵芝孢子组坐骨神经再生轴突的动作电位潜伏期及峰峰值的恢复率以及运动神经元胞体的荧光金逆行标记率均明显高于对照组,灵芝孢子组大鼠腓肠肌萎缩程度也轻于对照组。结论萌动激活灵芝孢子能够促进大鼠坐骨神经切断再吻合后的脊髓受损伤运动神经元轴突再生。