瑞芬太尼调节IL-10/β-内啡肽信号通路对坐骨神经损伤大鼠疼痛的影响

目的探讨瑞芬太尼对坐骨神经损伤(SNI)大鼠疼痛的影响及作用机制。方法建立SNI大鼠模型,大鼠分为假手术组、模型组、瑞芬太尼低剂量组(5μg·kg^(-1)·min^(-1))、瑞芬太尼高剂量组(20μg·kg^(-1)·min^(-1))和瑞芬太尼+抑制剂组(20μg·kg^(-1)·min^(-1)的瑞芬太尼+10μL IL-10抗体),评估大鼠疼痛阈值,统计坐骨神经指数(SFI),Masson染液评价靶肌肉萎缩情况,酶联免疫吸附法(ELISA)检测白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量,免疫荧光检测微管相关蛋白(MAP2)的表达,Western blot检测IL-10、β-内啡肽蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠疼痛阈值、SFI和IL-10、β-内啡肽蛋白的表达水平下降,肌肉萎缩、IL-1β、IL-6、TNF-α、MAP2表达增加(P<0.05);与模型组比较,瑞芬太尼低、高剂量组大鼠疼痛阈值、SFI和IL-10、β-内啡肽蛋白的表达水平升高,肌肉萎缩、IL-1β、IL-6、TNF-α、MAP2表达降低,且呈剂量依赖性(P<0.05);与瑞芬太尼高剂量组比较,瑞芬太尼+抑制剂组大鼠疼痛阈值、SFI和IL-10、β-内啡肽蛋白的表达水平下降,肌肉萎缩、IL-1β、IL-6、TNF-α、MAP2表达增加(P<0.05)。结论瑞芬太尼可能通过激活IL-10/β-内啡肽信号通路抑制SNI大鼠的疼痛行为。

齐刺环跳穴干预坐骨神经损伤大鼠脊髓背角炎症因子及胶质原纤维酸性蛋白表达影响的实验研究

目的通过观察齐刺环跳穴对坐骨神经损伤(Sciatic nerve injury,SNI)大鼠脊髓背角炎症因子及胶质原纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic arotein,GFAP)表达的影响,探讨齐刺环跳穴治疗神经病理痛(Neuropathic pain,NP)的镇痛机制。方法60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、齐刺组、单刺组及药物组,每组12只,采用钳夹法制备大鼠坐骨神经损伤模型。造模第2天开始进行针刺及药物干预,连续14 d。观察各组大鼠干预前后热缩足反射潜伏期(Paw with⁃drawal latency,PWL)的变化,治疗结束后取损伤处坐骨神经,苏木素伊红(HE)染色观察神经形态;取腰3~5脊髓节段ELISA法检测白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)蛋白表达水平,实时定量PCR法及免疫组化法检测GFAP表达水平。结果治疗前,与假手术组比较,各组PWL指数降低(P<0.01),与模型组比较,齐刺组治疗后显著改善(P<0.01)。HE染色,模型组神经纤维排列紊乱,齐刺组、单刺组及药物组神经纤维在数量及排列紊乱程度等方面均有改善,齐刺组改善最为明显。ELISA法、RT-PCR法及免疫组化检测,模型组、齐刺组、单刺组、药物组IL-1β、IL-6、TNF-α、GFAP表达较假手术组显著升高(P<0.01);与模型组相比,齐刺组、单刺组、药物组IL-1β、IL-6、TNF-α、GFAP表达显著下降,齐刺组表达低于单刺组及药物组(P<0.01)。结论齐刺环跳穴缓解坐骨神经痛的镇痛机制可能与下调脊髓背角炎症因子表达,抑制星形胶质细胞活化,降低中枢痛觉敏化程度有关。

紫铆因通过激活SIRT1介导FOXO1/NF-κB信号通路改善坐骨神经损伤

目的探讨紫铆因诱导SIRT1激活对大鼠坐骨神经损伤的影响及其可能的机制。方法将30只大鼠随机分为假手术组、坐骨神经损伤组和紫铆因组,每组10只。分别于建立大鼠坐骨神经损伤模型手术当天、术后第7天和第14天检测各组大鼠BBB运动评分和坐骨神经功能指数;术后第14天取材,通过HE染色观察各组大鼠坐骨神经病理学改变,通过TUNEL实验检测各组大鼠坐骨神经细胞凋亡水平,通过Western blotting检测各组大鼠坐骨神经BDNF、MBP、GAP-43、SIRT1、FOXO1、Keap1和NF-κB蛋白表达水平。结果与坐骨神经损伤组大鼠相比,紫铆因组坐骨神经损伤大鼠BBB运动评分和坐骨神经功能指数增加,坐骨神经病理损伤改善,坐骨神经细胞凋亡水平降低,坐骨神经BDNF、MBP、GAP-43和SIRT1蛋白表达水平增高,FOXO1、Keap1和NF-κB蛋白表达水平降低。结论紫铆因可通过上调坐骨神经损伤大鼠SIRT1表达抑制FOXO1/NF-κB信号通路激活,继而改善大鼠坐骨神经病理损伤。

麦粒灸对坐骨神经损伤大鼠脊髓组织TLR4/MyD88/NF-κB信号通路表达的影响

目的观察麦粒灸“环跳”对坐骨神经损伤(SNI)大鼠坐骨神经功能、坐骨神经干病理形态及脊髓组织TLR4/MyD88/NF-κB表达的影响,探究麦粒灸治疗SNI的可能机制。方法24只雄性SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组和麦粒灸组,每组6只。模型组、麦粒灸组采用坐骨神经钳夹制备SNI大鼠模型,造模后第7日起麦粒灸组取患侧“环跳”麦粒灸干预,每次6壮,1次/d,连续10 d。观察造模后第7日及干预结束后大鼠坐骨神经功能指数(SFI)、纤维丝测痛仪测量大鼠机械痛阈值(MWT),ELISA检测脊髓组织一氧化氮(NO)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)含量,HE染色观察坐骨神经干形态,Western blot检测脊髓组织Toll样受体4(TLR4)、核因子(NF)-κBp65、p-NF-κBp65、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、p-IκBα蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠SFI、MWT显著降低(P<0.01),坐骨神经干神经纤维排列紊乱,施万细胞数量明显增多,有大量空泡变性,脊髓组织NO、iNOS含量及TLR4、p-NF-κBp65、MyD88、p-IκBα蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,麦粒灸组大鼠SFI、MWT显著升高(P<0.01),坐骨神经干损伤减轻,细胞排列较整齐,施万细胞数量减少,轴突脱髓鞘及细胞空泡变性减少,脊髓组织NO、iNOS含量及TLR4、p-NF-κBp65、MyD88、p-IκBα蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论麦粒灸“环跳”可下调SNI大鼠脊髓组织TLR4、p-NF-κBp65、MyD88、p-IκBα蛋白表达,抑制NO、iNOS分泌,从而缓解疼痛、减轻受损神经组织炎症反应。

电针对慢性坐骨神经压迫性损伤大鼠神经病理学及背根神经节P2X_3受体表达的影响

目的:观察EA对CCI大鼠坐骨神经组织病理学及DRG P2X3受体表达的影响,探讨电针对神经组织学的影响及P2X3受体在电针镇痛效应中的作用。方法:将32只成年雄性SD大鼠,分为假模组、模型对照组、健侧EA组、患侧EA组,每组8只,模型对照组及EA组结扎坐骨神经造成CCI疼痛模型。各组于术前(0天)及术后3、57、1、01、2、14天分别测量大鼠患侧足MWT和TWL,EA组于术后第8天电针"足三里"-"阳陵泉"连续7天,每天1次。术后14天对坐骨神经标本行组织学观察,采用Estebe评分方法行组织学评分,免疫荧光组织化学检测患侧L5背根神经节中P2X3受体的表达情况。结果:与术前比较,CCI各组大鼠痛阈明显降低,出现痛觉过敏(P<0.01),而电针干预后EA组较CCI模型组痛阈明显增加(P<0.05)但仍低于假模组。各组大鼠坐骨神经组织学观察无明显差异,各组评分差异无统计学意义(P>0.05)。术后14天EA组较模型对照组患侧DRG L5中P2X3受体表达显著减少(P<0.05),并且患侧EA组较健侧EA组减少明显。结论:电针对坐骨神经压迫性损伤的镇痛效果可能是通过抑制大鼠DRG中P2X3受体的表达产生作用;患侧电针较健侧电针镇痛效果明显;电针后坐骨神经未见明显的病理组织学改变。

雪旺细胞来源的外泌体miR-21通过靶向SPRY2促进大鼠坐骨神经损伤后修复的研究

目的:研究高表达miR-21的雪旺细胞(Schwann cells,SC)来源外泌体对坐骨神经损伤(sciatic nerve injury,SNI)的修复作用及机制。方法:分别采用空载慢病毒和高表达miR-21的慢病毒感染SC株,收集SC上清外泌体并进行鉴定。采用神经断端吻合术建立SNI大鼠模型,术后随机分为模型组、SC来源外泌体组和高表达miR-21的SC来源外泌体组(n=10)。其中,SC来源外泌体组和高表达miR-21的SC来源外泌体组分别采用体外收集的外泌体局部注射进行治疗,3周后行为学实验检测神经功能恢复,免疫荧光染色评价SNI后轴突髓鞘再生,RT-q PCR检测血清外泌体miR-21及神经组织中miR-21和SPRY2的表达水平,双荧光素酶报告基因实验体外验证miR-21和SPRY2之间的靶向互作。结果:与模型组相比,其余各组大鼠坐骨神经功能和神经再生情况均出现明显改善,RT-q PCR结果显示血清外泌体及神经组织中miR-21的表达水平显著升高,神经组织中SPRY2的表达水平显著降低,其中高表达miR-21的SC细胞来源外泌体组较SC来源外泌体组变化更显著;双荧光素酶报告基因实验表明miR-21靶向调节SPRY2的表达。结论:高表达miR-21的SC来源外泌体通过靶向SPRY2显著促进SNI后修复。

实验性大鼠坐骨神经损伤与再生的病理学观察

目的 :研究大鼠坐骨神经钳夹损伤后的病理学改变。方法 :建立大鼠坐骨神经钳夹损伤模型 ,分别于术后 1、2、3、4、6周取受损坐骨神经进行光镜电镜和免疫组化观察 ,用图像分析仪测量 3、4、6周及对照组的坐骨神经轴突的等效直径、周长和面积等 8项参数。结果 :钳夹后 1周损伤处远段神经发生华勒变性 ,钳夹后 2周神经纤维开始再生。再生轴突在第 3、4周时与正常轴突有显著差异 (P <0 0 5或P <0 0 1) ,第 6周时无显著差异 (P >0 0 5 )。结论 :坐骨神经钳夹损伤后第 6周 。

针刺足三里、阳陵泉穴对坐骨神经损伤Wistar大鼠NGF、BDNF表达的影响

目的:比较针刺足三里穴、阳陵泉穴对Wistar大鼠坐骨神经损伤(SNI)的功能恢复作用差异。方法:将48只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为四组:假手术组、模型组、阳陵泉组、足三里组,每组12只,并采用物理损伤法制备大鼠坐骨神经损伤模型。造模结束24 h后,根据治疗方案,阳陵泉组和足三里组分别针刺大鼠双侧阳陵泉穴及足三里穴,直刺进针5 mm并留针15 min,每日1次,连续针刺治疗28 d。假手术组仅接受外科手术暴露坐骨神经而不进行挤压,不进行任何针刺治疗处理。观察针刺治疗后大鼠坐骨神经功能指数(SFI)的变化、受损坐骨神经组织病理学改变、免疫荧光法和Western blot检测受损坐骨神经组织中神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白的表达变化、Hoechst 33258染色观察雪旺细胞的参与情况。结果:与假手术组相比,模型组大鼠行走印迹明显减轻,SFI评分显著下降(P<0.01);HE染色结果显示模型组坐骨神经组织纤维结构紊乱,排列混乱,呈不规则形式,且周围雪旺细胞分布增多、变圆,部分变形呈空泡状变性。免疫荧光与蛋白质印迹分析显示模型组坐骨神经中NGF、BDNF蛋白阳性表达显著增加(P<0.01);Hoechst 33258染色结果显示模型组细胞核数量明显增加(P<0.01)。与模型组比较,足三里组、阳陵泉组大鼠行走印迹明显加深,SFI评分显著上升(P<0.01),足三里组较阳陵泉组各指标改善更显著(P<0.01);HE染色结果显示足三里、阳陵泉组大鼠坐骨神经组织纤维整体排列序列性尚整齐,仅有部分髓鞘脱落,轴索水肿减轻,雪旺细胞增殖分化,炎性细胞浸润明显减少,并观察到神经纤维出现新的生长,且足三里组病理变化改善程度优于阳陵泉组。坐骨神经中NGF、BDNF蛋白阳性表达明显上调(P<0.01),足三里组NGF、BDNF蛋白表达较阳陵泉组上调更显著(P<0.01);细胞核数量增加(P<0.01)。结论:针刺足三里穴、阳陵泉穴有助于促进受损坐骨神经的结构和功能恢复,并显著上调Wistar大鼠坐骨神经损伤处NGF、BDNF蛋白的表达,且针刺足三里穴对受损坐骨神经损伤的改善效果更好,从而促进受损神经再生与修复。

抗肿瘤药物对慢性放射性肠损伤影响的病理学研究

目的从病理学角度探讨抗肿瘤药物对宫颈癌慢性放射性肠损伤组织的影响。方法回顾性分析2016年8月至2023年4月期间安徽医科大学第一附属医院宫颈癌慢性放射性肠损伤患者的临床病理资料。根据RTOG/EORTC评分标准对49例患者的放射性肠损伤临床症状进行评分和严重程度分级。根据药物治疗方案分为抗血管生成药物治疗组和无抗血管生成药物治疗组,紫杉类药物化疗组和无紫杉类药物化疗组。采用病理学半定量评分系统评估患者的慢性放射性肠损伤程度,分别比较对应亚组间微血管计数、狭窄血管计数、狭窄血管比例、病理总分、溃疡、炎症、水肿、坏死和纤维化指标的差异。并使用Cox分析慢性放射性肠损伤患者发生严重并发症的独立危险因素。结果抗血管生成药物治疗组的狭窄血管计数、狭窄血管比例、溃疡和炎症程度均高于无抗血管生成药物治疗组,差异有统计学意义(P均<0.05);而抗血管生成药物治疗组的微血管计数和纤维化程度均低于无抗血管生成药物治疗组,差异有统计学意义(P均<0.05)。紫杉类药物化疗组与无紫杉类药物化疗组间的病理学指标比较,差异无统计学意义(P均>0.05)。Cox多因素分析显示,抗血管生成药物不是慢性放射性肠损伤患者发生严重并发症的独立危险因素(P>0.05)。结论抗血管生成药物加重了宫颈癌慢性放射性肠损伤组织的血管狭窄、溃疡和炎症,但减轻了纤维化。紫杉类药物对宫颈癌慢性放射性肠损伤组织无明显影响。

早期推拿对坐骨神经损伤模型大鼠腓肠肌生物力学参数及Myod、Myog、Mef2c表达的影响

目的探究早期推拿对坐骨神经损伤(SNI)模型大鼠腓肠肌肌肉状态及Myod、Myog、Mef2c表达的影响。方法将30只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和推拿O、T、F组,每组各6只。假手术组仅暴露右侧坐骨神经,不做夹持;模型组和推拿组建立坐骨神经夹持损伤模型。推拿O组在造模后第1天开始干预,总共干预7次;推拿T组在造模后第3天开始干预,总共干预5次;推拿F组在造模后第5天开始干预,总共干预3次。干预方法为每天以4 N的按摩力度,揉、拨、点法刺激大鼠术侧阳陵泉、殷门、委中穴,每法每穴1 min,每天1次。上述手法采用按摩推拿手法模拟仪进行操作。假手术组和模型组每天抓取,不作推拿干预。使用MyotonPRO数字化肌肉功能评估系统评估患侧腓肠肌振动频率(F)、对数衰减值(D)及动态刚度(S)3个生物机械力学特性参数;HE染色观察患侧腓肠肌肌纤维的形态学变化;Real-Time PCR法检测Myod mRNA、Myog mRNA、Mef2c mRNA表达水平;Western blotting法检测腓肠肌中Myod、Myog蛋白表达。结果治疗后,与假手术组相比,模型组、推拿F组的动态频率、对数衰减、动态刚度及推拿T组的动态刚度升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,推拿O、T组振动频率、对数衰减、动态刚度及推拿F组动态刚度降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。HE染色显示,假手术组大鼠患侧腓肠肌肌纤维排列致密、紧实、有序,模型组肌纤维紊乱、松散,部分组织断裂,炎细胞浸润;推拿组O、T组肌纤维排列等状态均接近假手术组,推拿F组肌纤维排列相对有序,存在部分组织断裂。PCR结果显示,与假手术组相比,模型组和推拿各组Myod mRNA、Myog mRNA、Mef2c mRNA表达升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,推拿各组Myod mRNA、Myog mRNA、Mef2c mRNA表达升高,且推拿O组高于推拿T组,推拿T组高于推拿F组,差异具有统计学意义(P<0.05)。Western blotting结果显示:与假手术相比,模型组和推拿各组Myod、Myog蛋白表达升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,推拿各组Myod、Myog蛋白表达升高,且推拿O组高于推拿T组,推拿T组高于推拿F组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论早期推拿能够有效改善腓肠肌肌肉状态,预防肌肉萎缩,其作用机制可能通过改善腓肠肌中Myod、Myog、Mef2c的蛋白和基因表达实现。

三法三穴推拿对坐骨神经损伤大鼠的即刻镇痛作用及其机制

目的观察三法三穴推拿对坐骨神经损伤大鼠的即刻镇痛作用并探讨其机制。方法SD大鼠随机分为假手术组、模型组及推拿组,每组6只。模型组及推拿组建立轻型坐骨神经慢性压迫性损伤模型模拟临床神经病理性疼痛,假手术组仅暴露神经并缝合。推拿组在造模后7 d采用按摩推拿手法模拟仪进行三法三穴推拿干预,假手术组及模型组进行等时间的抓握束缚。分别于造模前(T_(1))、造模后推拿前(T_(2))、推拿后(T_(3))采用机械缩足反射阈值及热缩足反射潜伏期评价三法三穴推拿即刻镇痛效果;评价结束后取大鼠腰膨大节段脊髓背角组织,采用Western blotting法检测各组大鼠脊髓背角组织嘌呤能受体P2Y12(P2RY12)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白。结果与假手术组同时点比较,模型组、推拿组在T_(2)及T_(3)时点MWT、TWL均降低(P均<0.05);与模型组同时点比较,推拿组T_(3)时点MWT、TWL均升高(P均<0.05)。模型组脊髓背角组织P2RY12、p-p38 MAPK、TNF-α蛋白表达均高于假手术组、推拿组(P均<0.05),假手术组及推拿组P2RY12、p-p38 MAPK、TNF-α蛋白表达比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论三法三穴推拿在坐骨神经损伤大鼠中具有较好的即刻镇痛效果,其机制可能为抑制小胶质细胞P2RY12/p38 MAPK/TNF-α通路从而缓解神经病理性疼痛。

普伐他汀对大鼠坐骨神经压碎损伤功能恢复的影响

背景:普伐他汀是临床上治疗高胆固醇血症的有效药物,目前发现其在中枢神经损伤的治疗上也能发挥有益作用,然而其机制仍未可知。目的:探究普伐他汀治疗能否加速坐骨神经压碎损伤的功能恢复及其潜在作用机制。方法:将雄性SD大鼠随机分为假手术组(坐骨神经暴露但不损伤+生理盐水灌胃)、阴性对照组(坐骨神经压碎损伤+生理盐水灌胃)、普伐他汀组(坐骨神经压碎损伤+普伐他汀灌胃)。普伐他汀组大鼠术后普伐他汀(5 mg/kg)灌胃治疗1周,其余两组大鼠给予等量生理盐水灌胃。术后观察各组大鼠一般情况;术后第2,4,6,8周末测量各组大鼠的坐骨功能指数;术后8周末测量腓肠肌湿质量比;ELISA法检测血清中炎症细胞因子的水平;组织形态计量学分析坐骨神经有髓神经纤维数目、纤维直径、轴突直径、髓鞘厚度;RT-qPCR检测神经生长因子、脑源性神经营养因子的mRNA表达量,Western blot法检测生长相关蛋白43的蛋白表达量。结果与结论:与阴性对照组相比,普伐他汀组坐骨神经功能指数恢复更快(P<0.05),更接近于假手术组水平,血清中炎症细胞因子肿瘤坏死因子α及白细胞介素6表达更低(P<0.05)且接近假手术组,坐骨神经中神经生长因子、脑源性神经营养因子的mRNA相对表达量增加(P<0.05或P<0.01),坐骨神经中生长相关蛋白43的蛋白相对表达量也明显增加(P<0.05),有髓神经纤维数目增加更多,纤维直径、轴突直径及髓鞘厚度数值更大(P<0.01)且与假手术组更接近。结果说明,普伐他汀的治疗加速了坐骨神经压碎损伤的功能恢复,其可能机制是抑制炎症细胞因子肿瘤坏死因子α及白细胞介素6的表达及促进神经营养因子神经生长因子、脑源性神经营养因子的分泌。

连翘苷抑制HMGB1/RAGE信号通路减轻大鼠糖尿病周围神经病变坐骨神经损伤

目的 基于高迁移率族蛋白Box-1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)信号通路探讨连翘苷(PHI)对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠坐骨神经损伤的影响。方法 利用高脂高糖饮食并注射链脲佐菌素(STZ)建立DPN大鼠模型,随机分为模型组、连翘苷低剂量(PHI-L)(50 mg/kg)组、连翘苷中剂量(PHI-M)(100 mg/kg)组、连翘苷高剂量(PHI-H)(200 mg/kg)组、阳性药物(甲钴胺,250μg/kg)组;另取正常饲料喂养大鼠为对照组。每组10只。采用BL-420S生物机能实验系统测定坐骨神经传导速度;血糖仪检测空腹血糖(FBG)水平;ELISA试剂盒检测血清HbAlc、IL-6、TNF-α水平;电镜观察坐骨神经超微结构形态;试剂盒检测坐骨神经中ROS、SOD、MDA、MBP水平;RT-qPCR、Western blot法检测坐骨神经中HMGB1、RAGE mRNA和蛋白水平。结果 与模型组比较,PHI-M组、PHI-H组、阳性药物组大鼠病理损伤明显减轻,坐骨神经传导速度、MBP、SOD水平显著恢复,FBG、HbAlc、IL-6、TNF-α、ROS、MDA、HMGB1、RAGE的mRNA及蛋白水平显著下降(P均<0.05)。结论 PHI可降低炎症反应,减轻大鼠DPN,发挥治疗作用,其机制可能与抑制HMGB1/RAGE信号通路有关。

三法三穴推拿对坐骨神经损伤大鼠即刻镇痛的效果及机制

目的观察三法三穴推拿对坐骨神经损伤大鼠即刻镇痛的效果及机制。方法用随机数字表法将27只SD大鼠分为假手术组、模型组及推拿组,每组9只。模型组、推拿组构建轻型坐骨神经慢性压迫性损伤模型模拟临床神经病理性疼痛,假手术组仅暴露神经并缝合。造模后7 d,推拿组给予三法三穴推拿干预,每穴每法1 min,共9 min;假手术组与模型组仅抓握束缚9 min,不干预。分别于造模前(T1)、造模后推拿前(T2)、推拿后(T3)采用机械缩足反射阈值(MWT)及热缩足反射潜伏期(TWL)评价即刻镇痛效果;评价结束后,取大鼠腰膨大节段脊髓背角组织,用Western blotting法检测各组大鼠脊髓背角组织脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶B(TrkB)及钾氯协同转运蛋白2(KCC2)蛋白,用免疫荧光法检测各组大鼠脊髓背角组织离子化钙结合适配分子1(IBA-1)、分化簇68(CD68)、细胞癌基因Fos(c-Fos)。结果与假手术组比较,模型组T2、T3时点MWT、TWL均低(P均<0.05);与模型组比较,推拿组T3时点MWT、TWL均高(P均<0.05)。与假手术组比较,模型组脊髓背角组织BDNF、TrkB表达均高(P均<0.05),KCC2表达低(P<0.05)。与模型组比较,推拿组脊髓背角组织BDNF、TrkB表达均低(P均<0.05),KCC2表达高(P<0.05)。与假手术组比较,模型组脊髓背角组织IBA-1、CD68、c-Fos荧光强度高(P均<0.05);与模型组比较,推拿组CD68、c-Fos荧光强度低(P均>0.05)。结论三法三穴推拿在坐骨神经损伤大鼠中具有较好的即刻镇痛效果,其机制可能与改变小胶质细胞-神经元相互作用和小胶质细胞活化状态有关。

肾著汤促进小鼠坐骨神经损伤后髓鞘再生作用的研究

目的 通过观察肾著汤灌胃后损伤小鼠坐骨神经模型中髓鞘的形态变化,探讨肾著汤对髓鞘再生及坐骨神经损伤修复的促进作用。方法 选取24只成年雄性昆明小鼠以随机数字表法分为正常组、对照7 d组(损伤)、实验7 d组(损伤后予以肾著汤灌胃),各8只。治疗1周后,运用电子显微镜、劳克坚牢蓝等染色技术观察各组髓鞘变化。结果 HE染色及电子显微镜下均显示正常组小鼠坐骨神经髓鞘排列紧密有序,对照7 d组小鼠坐骨神经中髓鞘折叠、排列杂乱无章,甚至有脱髓鞘表现,实验7 d组小鼠髓鞘结构开始修复。劳克坚牢蓝染色显示应用肾著汤后,与对照7 d组比较,实验7 d组镜下蓝色区域明显增多,髓鞘再生明显。结论 肾著汤对坐骨神经损伤后髓鞘再生有促进作用,为临床治疗坐骨神经损伤提供理论依据。

脱细胞异体神经移植物联合电针对坐骨神经损伤大鼠脊神经节的保护作用及机制

目的探讨脱细胞异体神经移植物(ANA)联合电针对坐骨神经损伤(SNI)大鼠脊神经节的保护作用及机制。方法选取50只雄性SD大鼠,10只制备ANA;40只随机分为正常组、模型组、ANA组和联合组,每组10只。分离右侧坐骨神经,于梨状肌下缘5 mm处去除10 mm制备SNI模型。ANA组将制备好的ANA连接在损伤神经的两断端处。联合组于ANA连接术后2 d采用电子针疗仪电针“环跳穴”和“阳陵泉穴”,15 min/d,7 d为1个疗程,共4个疗程。电生理检测各组大鼠坐骨神经传导速度,评估受损轴突再生情况;尼氏染色观察脊神经节中神经元的形态结构;Western blotting和免疫荧光法检测脊神经节中神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经传导速度明显降低(P<0.01);神经节神经元中的尼氏体因肿胀、溶解导致结构不完整,数量显著减少(P<0.01);NGF和BDNF蛋白表达量明显降低(P<0.01)。与模型组比较,ANA组和联合组大鼠坐骨神经传导速度明显增加(P<0.01);神经节神经元中尼氏体损伤减弱,数量明显增加(P<0.01);NGF和BDNF蛋白表达量显著升高(P<0.01)。与ANA组比较,联合组大鼠坐骨神经传导速度显著增加(P<0.01);神经节神经元中尼氏体形态较规则,数量明显增加(P<0.01);NGF蛋白表达量显著升高(P<0.01)。结论ANA联合电针可提高大鼠坐骨神经传导速度,改善神经节中神经元的形态结构,发挥对脊神经节神经元的保护作用,其机制可能与提高神经元中NGF和BDNF蛋白的表达,尤其是NGF蛋白的表达相关。

巴戟天联合运动对小鼠坐骨神经损伤修复的影响

目的 研究巴戟天和运动对坐骨神经损伤小鼠神功能恢复的作用。方法 建立小鼠坐骨神经损伤模型,80只小鼠随机分为对照不运动、对照运动、巴戟天不运动和巴戟天联合运动组,每组20只。巴戟天组每天按0.1 ml/10 g巴戟天水提液灌胃、对照组每天按0.1 ml/10 g生理盐水灌胃,适应性喂养5 d后,灌胃半小时后对照运动组和巴戟天联合运动组小鼠在动物跑台上跑步训练,1次/天,连续28 d。通过观察神经元变化和神经胶质细胞数量、检测小鼠血清丙二醛(MDA)含量和超氧化歧化酶(SOD)活力值、坐骨神经功能指数、腓肠肌湿重等,观察巴戟天和运动对坐骨神经功能的恢复情况。结果 各组都存在神经元浓缩、破碎,尼氏Nissl数量减少,但巴戟天联合运动组神经元浓缩、破碎的情况明显减少,神经胶质细胞数量明显增加。腓肠肌湿重结果显示,对照组与巴戟天联合运动相比差异有统计学意义(P<0.01);坐骨神经功能指数结果显示,21 d时对照组与巴戟天联合运动相比差异有统计学意义(P<0.01),巴戟天联合运动和巴戟天不运动相比差异有统计学意义(P<0.05),28 d时对照不运动与巴戟天组相比差异有统计学意义(P<0.05);MDA含量测定结果显示,对照组与巴戟天联合运动相比差异有统计学意义(P<0.05);SOD活力值检测显示,对照运动与巴戟天组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 巴戟天可能有助于小鼠坐骨神经损伤的恢复,其与运动联合的恢复效果更佳。

干细胞治疗坐骨神经损伤的研究进展

坐骨神经损伤在临床上较为常见,损伤后神经再生和功能恢复一直是基础研究和临床治疗的热点和难点,如何最大程度实现神经修复与再生是改善坐骨神经损伤患者功能恢复的关键。干细胞移植治疗坐骨神经损伤成为近年来的研究热点,并已证实其在神经修复方面效果显著。除胚胎干细胞(ESCs)、神经干细胞(NSCs)及羊水干细胞(AFSc)外,从骨髓和脂肪组织中分离出干细胞,并定向诱导分化为施万细胞(SCs)亦为研究重点。在动物模型中将上述干细胞移植至横断的坐骨神经中,结果显示损伤处神经再生并伴有髓鞘合成。干细胞移植后促进损伤处细胞因子及神经营养因子产生、细胞外基质合成,并改变其微环境及进行免疫调节,进而促进损伤后神经再生。本文通过对近二十年来干细胞移植促进坐骨神经损伤修复和神经再生的研究进展进行综述,探讨干细胞移植治疗坐骨神经损伤可能的机制,为今后基础与临床试验研究提供新思路。

活血通督汤对大鼠坐骨神经损伤基于Notch信号通路的保护作用

目的探究活血通督汤在大鼠坐骨神经损伤中的保护效应。方法选取了54只成年雄性大鼠,按照随机数字表法将其分为假手术组、模型对照组以及活血通督汤组,每组18只。再根据大鼠造模后处死的时间节点,分为术后第7、14、28天三个亚组,每个亚组6只大鼠。假手术组仅进行坐骨神经的暴露而没有进行钳夹处理,而模型组和活血通督汤组则采用钳夹法建立了坐骨神经损伤模型。在术后第7、14、28天分别处死各亚组大鼠并取材。观察大鼠坐骨神经受损程度及NICD和Hes1蛋白的表达水平。结果模型组的坐骨神经组织病理改变明显,随着时间推移未见改善趋势。活血通督汤组的坐骨神经组织病理变化较模型组有明显改善,随着时间推移呈进一步改善趋势。在蛋白表达方面,与模型对照组相比,活血通督汤组在术后各时间节点的NICD和Hes1的表达量都明显增加(P<0.01)。结论活血通督汤可能通过Notch信号转导通路促进坐骨神经损伤的修复。

人胚胎干细胞衍生的神经干细胞微囊泡通过调节AKT/eNOS信号通路促进坐骨神经损伤大鼠坐骨神经再生和修复

目的探讨人胚胎干细胞衍生的神经干细胞微囊泡(hESC-NSC-MVs)通过调节蛋白激酶B(AKT)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)信号通路促进坐骨神经损伤(SNI)大鼠坐骨神经再生和修复的作用。方法取SD大鼠随机分为假手术组、模型组、hESC-NSC组、hESC-NSC-MVs组、hESC-NSC-MVs+CCT128930(AKT抑制剂)组,每组10只,模型组和实验干预组大鼠建立SNI模型,以hESC-NSC、hESC-NSC-MVs和CCT128930分组干预后,以坐骨神经功能指数(SFI)评测各组大鼠坐骨神经功能;检测各组大鼠坐骨神经传导速度、支配的腓肠肌恢复情况(以腓肠肌湿重比、肌纤维横截面积评测);透射电子显微镜(TEM)检测各组大鼠坐骨神经超微结构;试剂盒测定各组大鼠血清与坐骨神经eNOS和一氧化氮(NO)水平;免疫印迹实验检测各组大鼠坐骨神经AKT/eNOS信号通路相关蛋白表达。结果假手术组相比,模型组大鼠坐骨神经超微结构发生显著损伤,SFI、坐骨神经传导速度、腓肠肌湿重比、肌纤维横截面积、eNOS和NO水平、p-AKT/AKT与eNOS蛋白表达显著降低(P<0.05);与模型组相比,hESC-NSC组、hESC-NSC-MVs组大鼠坐骨神经超微结构损伤均减轻,SFI、坐骨神经传导速度、腓肠肌湿重比、肌纤维横截面积、eNOS和NO水平、p-AKT/AKT与eNOS蛋白表达均升高,且hESC-NSC-MVs对SNI大鼠上述各指标的作用更强(P<0.05);与hESC-NSC-MVs组相比,hESC-NSC-MVs+CCT128930组大鼠坐骨神经超微结构损伤加重,SFI、坐骨神经传导速度、腓肠肌湿重比、肌纤维横截面积、eNOS和NO水平、p-AKT/AKT与eNOS蛋白表达降低(P<0.05)。结论hESC-NSC-MVs可通过激活AKT/eNOS信号通路而减轻SNI大鼠坐骨神经超微结构及功能损伤,促使坐骨神经再生和修复,并改善其坐骨神经功能。