鞘内注射针对Toll样受体4基因的siRNA缓解坐骨神经结扎大鼠的神经病理性疼痛

目的观察坐骨神经结扎(CCI)大鼠鞘内注射针对Toll样受体4基因(TLR4)的siRNA(TLR4-siRNA)的镇痛作用及对脊髓TLR4、IL-1β、TNF-α表达的影响。方法大鼠随机分为4组(每组10只):假手术组、CCI组(鞘内注射生理盐水)、错配siRNA组(鞘内注射错配siRNA)及siRNA-TLR4组(鞘内注射TLR4-siRNA)。后3组大鼠均行右侧坐骨神经结扎术,并行L5～L6鞘内置管;假手术组仅暴露坐骨神经而不结扎。TLR4-siRNA组大鼠从CCI术前1 d开始鞘内注射脂质体包裹的有效TLR4-siRNA(10μg/30μl),连续7 d;CCI组、错配siRNA组分别注射等量生理盐水和错配siRNA。采用热辐射及von Frey测痛丝分别测定各组大鼠的热痛阈及机械性痛阈;采用实时定量RT-PCR法观察各组大鼠脊髓组织TLR4 mRNA的表达;采用ELISA法测各组大鼠脊髓组织炎症因子IL-1β、TNF-α的含量。结果与假手术组相比,坐骨神经结扎后,大鼠热痛阈及机械性痛阈降低,脊髓TLR4 mRNA表达量增加,脊髓组织IL-1β、TNF-α的含量也增加(P<0.05)。与生理盐水组及错配siRNA组相比,鞘内注射TLR4-siRNA可抑制坐骨神经结扎引起的热痛觉过敏及机械性异常性疼痛(结扎后1、3、7 d,P<0.05),降低脊髓TLR4 mRNA表达(P<0.05),降低脊髓IL-1β、TNF-α含量(P<0.05)。结论鞘内注射TLR4-siRNA可通过干扰大鼠脊髓TLR4基因表达抑制其信号通路下游炎症因子的水平,进而缓解坐骨神经结扎引起的神经病理性疼痛。

坐骨神经结扎大鼠脊髓组织Toll样受体4及下游细胞因子表达的变化

目的：观察大鼠坐骨神经结扎（CCI）后脊髓背角Toll样受体4（TLR4）及脊髓内IL-1β、TNF-α表达的变化，探讨神经病理性疼痛可能的治疗靶点。方法：结扎大鼠右侧坐骨神经，术后1、3、7、10、14d观察大鼠热痛阈及机械性痛阈的变化，采用实时定量RT-PCR、免疫荧光及Western印迹观察L1～L6段脊髓组织TLR4基因及蛋白表达的变化，ELISA法测量脊髓组织IL-1β、TNF-α表达的变化；以假手组大鼠作为对照。结果：坐骨神经结扎后，大鼠右足热痛阈及机械性痛阈明显降低，脊髓背角TLR4基因及蛋白表达明显增加，明显高于假手术组（P〈0．05）；脊髓组织IL-1β、TNF-α的含量也明显升高，明显高于假手术组（P〈0．05）。结论：坐骨神经结扎可能通过诱导TLR4表达，促进下游细胞因子释放，导致痛阈降低；TLR4有望成为治疗病理性疼痛的新靶点。

电针对慢性坐骨神经结扎性损伤模型大鼠外周血清中TNF-α、IL-1β、IL-6表达的影响

目的观察长期针刺治疗对慢性坐骨神经结扎性损伤(CCI)模型大鼠的镇痛效应及外周血清促炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6表达的影响,探讨针刺镇痛的作用机制。方法 SD雄性大鼠共37只,随机分为CCI假手术组(n=9)、CCI对照组(n=9)、CCI手针组(n=10)、CCI电针组(n=9)。所有大鼠均在术前、术后第7、17、27、37天进行机械性痛阈测定;于术后第37天,采用ELISA方法测定外周血清中TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白表达。结果 CCI对照组、CCI手针组和CCI电针组大鼠在治疗前机械性痛阈较术前明显下降,与同一时间段CCI假手术组大鼠比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后7天开始到第37天实验结束,CCI手针组和CCI电针组机械性痛阈较治疗前逐渐改善(P<0.05)。CCI对照组大鼠血清TNF-α和IL-6含量显著高于假手术组(P<0.05,P<0.01);CCI手针组和CCI电针组大鼠血清TNF-α的含量显著低于CCI对照组(P<0.05),并且两组大鼠血清IL-6含量与假手术组比较,差异无统计学意义(P>0.05),IL-1β在各组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论抑制血清中促炎性细胞因子的表达可能是针刺治疗神经病理性疼痛的机制之一。

梓醇对坐骨神经结扎模型神经病理性疼痛的影响

目的:观察腹腔注射梓醇对坐骨神经结扎(CCI)大鼠神经病理性疼痛的影响。方法:将雄性SD大鼠56只制作CCI模型,术后4天随机分为假手术组,溶剂组(生理盐水),阳性药物组(巴喷丁50 mg/kg)和梓醇组(1、5、25、125 mg/kg),分别腹腔内注射给药。通过机械刺激缩足反射痛阈值(MWT)及炎症痛觉过敏抑制率(MPE)评估效果。结果:与术前和假手术组比较,每天给予梓醇治疗可逆转大鼠急性机械性疼痛。腹腔内注射阳性药物及梓醇后,大鼠MPE升高(P<0.05),连续给予梓醇(1、5、25、125 mg/kg)、阳性药物(巴喷丁50 mg/kg)7天后,MPE分别达到(31.94±5.64)%、(38.06±5.78)%、(61.94±5.14)%、(69.13±5.12)%、(61.19±6.18)%。结论:腹腔注射梓醇能够明显降低CCI大鼠的神经病理性疼痛,并有量效关系。

鞘内注射瞬时受体电位通道A1 shRNA对部分坐骨神经结扎小鼠神经病理性疼痛的作用及其机制

目的:探讨瞬时受体电位通道A1(TRPA1)在部分坐骨神经结扎(pSNL)小鼠神经病理性疼痛模型中的作用,阐明其作用机制。方法:30只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(n=6)、假手术组(n=6)和pSNL组(n=18)。pSNL组小鼠鞘内置管成功后随机分为pSNL组、pSNL+NC shRNA组(于术后第7天鞘内注射NC shRNA)和pSNL+TRPA1 shRNA组(于术后第7天鞘内注射TRPA1 shRNA)。检测注射前和注射后l、7、12和24 h各组小鼠后肢机械缩足反射阈值(MWT)和热阈值(TWL)。最后一次检测后2 h处死小鼠,采用Western blotting法检测各组小鼠术侧背根神经节(DRG)中TRPA1蛋白激酶Cε型(Prkce)和星形胶质细胞激活标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,ELISA法检测各组小鼠细胞上清和血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)水平。分离培养pSNL模型小鼠的原代星形胶质细胞,过表达或敲低TRPA1,检测星形胶质细胞中TRPA1、Prkce和GFAP蛋白表达水平以及细胞上清中TNF-α和MCP-1水平。采用STRING数据库和免疫共沉淀(Co-IP)法预测并验证TRPA1和Prkce相互作用。检测过表达或敲低TRPA1后空质粒组、Ad-TRPA1、sh-NC组和sh-TRPA1组星形胶质细胞中Prkce和GFAP蛋白表达水平以及细胞上清中TNF-α和MCP-1水平。将TRPA1 shRNA单独转染或与AdPrkce共转染星形胶质细胞,分为sh-TRPA1+empty vector组(转染空载体)、sh-TRPA1+Ad-Prkce组(转染TRPA1过表达载体)和sh-TRPA1+Ad-Prkce组(转染Prkce过表达载体)。采用Western blotting法检测各组细胞中TRPA1、Prkce和GFAP蛋白表达水平,ELISA法检测细胞上清中TNF-α和MCP-1水平。结果:与对照组比较,pSNL组小鼠MWT和TWL降低(P<0.01);与pSNL+NC中shRNA组比较,pSNL+TRPA1 shRNA组小鼠MWT和TWL升高(P<0.01)。与假手术组比较,术后第7天pSNL组小鼠DRG中TRPA1和GFAP蛋白表达水平升高(P<0.05),血清中TNF-α和MCP-1水平升高(P<0.05)。与pSNL+NC shRNA组比较,pSNL+TRPA1 shRNA组小鼠DRG中TRPA1和GFAP蛋白表达水平及血清中TNF-α和MCP-1水平降低(P<0.05)。与空质粒组比较,Ad-TRPA1组细胞中GFAP蛋白表达水平明显升高(P<0.01),细胞上清中TNF-α和MCP-1水平明显升高(P<0.05);与sh-NC组比较,sh-TRPA1组细胞中GFAP蛋白表达水平明显降低(P<0.05),细胞上清中TNF-α和MCP-1水平明显降低(P<0.05)。与sh-TRPA1+empty vector组比较,sh-TRPA1+Ad-Prkce组细胞中TRPA1、Prkce和GFAP蛋白表达水平升高(P<0.01),细胞上清中TNF-α和MCP-1水平明显升高(P<0.05)。结论:TRPA1通过与Prkce相互作用参与pSNL模型小鼠星形胶质细胞的激活以及神经病理性疼痛发生发展过程。

大鼠坐骨神经结扎后背根神经节神经生长因子的表达变化

目的：观察坐骨神经结扎后神经生长因子（NGF）在背根神经节的表达变化。方法：健康SD大鼠随机分为正常对照组、假手术对照组和坐骨神经结扎组，实验组结扎后分别存活1、3、5、7、14、21、28d，取腰4～6背根神经节（DRG），行NGF免疫组织化学显色结合图像分析技术分析其表达变化。结果：结扎后1d DRG NGF表达无明显变化；3d开始下降，7d达最低值，持续到21d；28d恢复正常。结论：神经结扎后DRG神经元NGF表达变化可能参与了神经损伤后的可塑性。

蛛网膜下腔注射SRT1720对慢性坐骨神经结扎大鼠脊髓SIRT1表达和NF-κB去乙酰化调节的影响

目的：探讨蛛网膜下腔注射SRT1720对慢性坐骨神经结扎（CCI）大鼠脊髓沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）表达和活性的影响，以及对NF-κB p65去乙酰化的调节作用。方法将120只雄性SD大鼠采用随机数表法分成5组，每组24只，即假手术组（S）组、坐骨神经结扎组（CCI组）、二甲亚砜（DMSO）组、坐骨神经结扎＋低剂量SRT1720治疗组（CCI＋LD组）和坐骨神经结扎＋高剂量SRT1720治疗组（CCI＋HD组）。其中CCI、DMSO、CCI＋LD和CCI＋HD组大鼠提前8d蛛网膜下腔预置给药导管后建立CCI模型。DMSO组从手术日起，每天通过蛛网膜下腔预置细管给予10μl DMSO，而CCI＋LD组和CCI＋HD组每天分别给予SRT172010μg和20μg（溶于10μl DMSO）。在CCI前1d、CCI后1、3和7d各组分别处死大鼠6只，取L4~5段手术侧脊髓组织，采用荧光法测定沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）活性，Western blot法测定SIRT1、NF-κB、乙酰化- NF-κB p65（Lys310）水平，并计算各组NF-κB的乙酰化水平（乙酰化- NF-κB p65/NF-κB）。结果与S组比较，CCI和DMSO组在CCI后各时点SIRT1水平和酶活性均显著下降（均P＜0.01），相反，NF-κB、乙酰化- NF-κB p65水平和NF-κB乙酰化水平均显著升高（均P＜0.01）；而与 CCI组比较，CCI＋LD和CCI＋HD组在CCI后3d、7d SIRT1水平和酶活性均较高（均 P＜0.01），NF-κB、乙酰化- NF-κB p65（Lys310）水平则较低。其中SRT1720高剂量组在CCI后7d，SIRT1水平和酶活性显著高于低剂量组（P＜0.01），而NF-κB的乙酰化水平则更低（P＜0.01）。结论 SRT1720蛛网膜下腔给药可改善CCI导致的脊髓SIRT1水平和酶活性的降低，抑制NF-κB p65的过高表达和乙酰化。

痛必定注射液对坐骨神经结扎慢性损伤模型大鼠脊髓背根神经节NR2B含量的影响

目的:观察痛必定注射液对大鼠脊髓背根神经节(DRG)细胞N-甲基-D-天门冬氨酸2B亚型受体(NR2B)含量的影响,以探讨其外周镇痛的机理。方法:将40只Wister大鼠分为A(正常组)、B(假手术组)、C(模型组)组、D(模型+痛必定组)4组各10只,采用坐骨神经结扎慢性损伤动物模型,通过免疫组化技术观察痛必定注射液对于DRG细胞内NR2B含量的影响。结果:A、B组NR2B含量比较,差异无显著性意义(P>0.05);C组NR2B含量较A、B组明显升高(P<0.05);D组NR2B含量较C组明显降低(P<0.05),与A、B组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。结论:痛必定注射液的外周镇痛作用可能是通过抑制NR2B的合成或释放而实现的,由此可推断NR2B与"不通则痛"的病机相关。

鞘内预先应用L—NAME可减轻坐骨神经结扎大鼠的热痛觉过敏和脊髓c—fos基因表达

观察鞘内预先应用L—NAME对坐骨神经结扎大鼠热痛阎和脊髓后角c—fos基因表达的影响。方法：选择鞘内置管后无神经损伤症状的SD大鼠80只，在实施坐骨神经结扎（CCI）和假手术前15min向鞘内注射L—NAME250μg（10μ1）或等容量生理盐水。分别在术后第1、第3、第7和第14天测量其热痛阈，并采用免疫组化方法观察其同侧脊髓后角c—fos基因的表达情况。结果：虽然CCI和假手术均能引起大鼠脊髓后角c—fos基因的迅疾和长期表达，但是只有CCI大鼠出现了热痛阈的显著降低。鞘内预先应用L—NAME使CCI大鼠第3、第7和第14天同侧脊髓后角Fos阳性神经元的数目分别降低了53．8％、57．1％和43．2％，并伴有热痛觉过敏反应的显著减轻。结论：鞘内预先应用L—NAME可显著减轻坐骨神经结扎大鼠的热痛觉过敏和脊髓c—fos基因表达，提示NO在神经病理性疼痛发生中具有重要作用。

氧化苦参碱对坐骨神经结扎小鼠的镇痛作用及其对CaMKⅡ受体表达的影响

目的研究氧化苦参碱(OMT)对神经病理性疼痛小鼠的镇痛作用及其机制。方法采用坐骨神经结扎模型(CCI)机械缩足反射法观察OMT的镇痛作用,并分析其镇痛作用与Ca MKII受体的关系。结果 1给小鼠腹腔注射160、80 mg·kg^(-1)OMT可明显延长小鼠的机械缩足反射期(P<0.05)。2给小鼠腹腔注射160、80、40 mg·kg^(-1)OMT可明显降低小鼠的冷缩足反射次数(P<0.05)。3 OMT能够跟CaMKⅡ拮抗剂KN-93和AIP发挥协同作用。4模型组小鼠的pCaMKⅡ蛋白表达较假手术组明显升高(P<0.01);与模型组比较,OMT(160 mg·kg~(^(-1)))组可明显降低p CaMKⅡ蛋白的表达(P<0.01)。结论 OMT对神经病理性疼痛具有镇痛作用,其镇痛作用可能与CaMKⅡ有关。

七叶皂甙钠对坐骨神经结扎术后大鼠热痛觉及脊髓神经细胞凋亡的影响

目的探讨七叶皂甙钠对坐骨神经结扎术后大鼠热痛觉及脊髓神经细胞凋亡的影响。方法90只SD大鼠随机分为正常对照组、坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)模型组(CCI组)和药物治疗组(药物组),每组30只大鼠。采用坐骨神经中段结扎法制作大鼠CCI模型。药物组大鼠术后给予腹腔注射0.1%七叶皂甙钠5 mg/(kg.d)治疗,CCI组给予等量生理盐水替代。各组于术前1 d取5只大鼠测定热痛觉,于术后8h、1 d、3 d、7 d、14 d及21 d时分别取5只大鼠测定热痛觉后处死。分别应用TUNEL法及免疫组化染色法检测大鼠相应损伤段脊髓组织中凋亡神经细胞数及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果各组大鼠术前1 d时热痛觉的比较差异无统计学意义。CCI组及药物组大鼠术后热痛觉均较正常对照组更敏感(均P<0.05);药物组大鼠术后热痛觉较CCI组迟钝(均P<0.05)。CCI组及药物组大鼠术后各时间点脊髓组织中凋亡细胞数均明显多于正常对照组(均P<0.05);药物组大鼠术后各时间点脊髓组织中凋亡细胞数均明显少于CCI组(均P<0.05)。CCI组大鼠术后8 h～14 d,药物组术后8 h～7 d脊髓组织TNF-α的表达均明显高于正常对照组(均P<0.05);两组TNF-α的表达均于术后8 h起逐渐增高,至术后3 d时达最高,其后逐渐减少(均P<0.05);并分别于术后21 d及14 d时降至正常对照组水平。结论结扎大鼠坐骨神经可产生神经病理性疼痛,并可诱发脊髓神经细胞凋亡。七叶皂甙钠能缓解坐骨神经结扎术后大鼠热痛觉增敏,这可能与其降低TNF-α在脊髓后角的表达及抑制神经细胞的凋亡有关。

坐骨神经结扎后神经生长因子在背根神经节的表达研究

目的探讨坐骨神经结扎后神经生长因子（NGF）生的变化及影响，并对其在背根神经节中的表达深入研究。方法选取SD品系大鼠50只为研究对象，随机分组，实验组：予以坐骨神经结扎，对照组予以假手术，对大鼠术前与术后的痛阀值进行测定，并对其NGF在背根神经节中的表达进行检测。结果经比较，实验组大鼠的痛阀值包括机械痛阈值和热痛阀值显著低于对照组，且NGF在背根神经节NGF的表达量明显高于对照组，P〈0．05。结论实验表明，坐骨神经结扎后，NGF在背根神经节中积累，降低了大鼠对痛感的敏感度，基因表达量明显增加。

反复(慢性)注射阿米替林和布比卡因对坐骨神经结扎大鼠痛行为学及神经病理学的影响

目的观察坐骨神经局部反复(慢性)注射阿米替林和布比卡因对慢性坐骨神经结扎损伤(chronic constriction injury,CCI)大鼠机械和热痛阈的影响,及神经组织病理学的改变,探讨其对外周抗痛觉过敏作用及神经组织的影响。方法健康成年雄性SD大鼠24只,体重(200±20)g,按照Bennett等的方法制备CCI模型,5d后随机分为3组(n=8):阿米替林组(A组)、布比卡因组(B组)、生理盐水组(C组)。模型制备后5、7、9d分别经留置导管给予0.5mL的0.5%阿米替林、0.5%布比卡因及生理盐水。观察大鼠一般情况,根据Hwang等标准行运动功能评分;于注药前及第3次注药后1、3、5、7d测定机械刺激缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩腿反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)。于模型制备后16d取坐骨神经标本,行大体观察及组织学观察,采用Estebe评分方法行组织学评分。结果大鼠均存活至行为学实验观察完成。A、B组大鼠于每次注药后均出现不同程度运动障碍,A组在8h内、B组在2h内运动功能评分与C组和注药前比较差异均有统计学意义(P<0.05);但第3次注药A组在8h后、B组在2h后大鼠运动功能均完全恢复。A组第3次注药完成后1、3d的MWT和TWL较注药前及注药后5、7d显著升高,也较1、3d的B、C组显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);B组各时间点MWT和TWL与注药前及C组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。3组大鼠坐骨神经光镜下组织学观察可见神经外膜、神经束膜完整,轴索排列大致整齐,无明显脱髓鞘改变,少量炎性细胞浸润,各组坐骨神经组织学评分均为1分,差异无统计学意义(P>0.05)。结论坐骨神经局部反复(慢性)注射0.5%阿米替林对神经病理性疼痛大鼠具有外周抗痛觉过敏的作用,其作用具有累加效应,且未见坐骨神经发生明显病理学改变。

姜黄素对慢性坐骨神经结扎损伤大鼠脊髓背角神经元中PDCD5表达的影响

目的观察姜黄素(curcumin,Cur)对慢性坐骨神经结扎损伤大鼠脊髓背角神经元中程序细胞死亡因子5(programmed cell death 5,PDCD5)表达的影响。方法建立慢性坐骨神经结扎损伤(chronic construction injury,CCI)模型;健康雄性SD大鼠84只,随机分为6组:空白对照组(n=4)、假手术组(Sham组)(n=16)、神经结扎组(CCI组)(n=16)和不同浓度姜黄素组[Cur 50 mg/kg组(n=16)、Cur 100 mg/kg组(n=16)及Cur 200 mg/kg组(n=16)]。Cur组行坐骨神经结扎,并腹腔注射姜黄素50、100、200 mg/(kg·d),持续至术后21 d。Sham组,CCI组和Cur组按取材时间不同分为4个亚组(n=4),即术后3 d亚组、术后7 d亚组、术后14 d亚组和术后21 d亚组。分别于术前2 d及3 d、7 d、14 d和21 d测定行为学;采用末端生脱氧核糖核苷酸转移酶介导生物素标记(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP-biotin nick end labeling,TUNEL)标记法标记脊髓背角浅层凋亡细胞;免疫印迹法(Western blot,WB)法检测PDCD5蛋白的表达。结果空白组与Sham组相比,MTW和TWL差异无统计学意义(P>0.05)。CCI组术后MTW和TWL逐渐降低,在第14 d时降至最低值。给予Cur 100 mg/(kg·d)处理后,MTW和TWL逐渐增加,与CCI组在3 d、7 d、14 d及21 d比较,差异有统计学意义(P<0.05)。空白组与Sham组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。CCI组在术后3 d即出现凋亡细胞增多,细胞凋亡高峰期出现在术后7~14 d,与Sham组相比,差异有统计学意义(P<0.05);给予不同浓度Cur处理后,凋亡细胞在术后3 d开始减少,Cur 100 mg/(kg·d)组与其他Cur组相比,差异有统计学意义(P<0.05);另可见Cur 100 mg/(kg·d)组在术后7 d、14 d及21 d,与其他Cur组、CCI组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。空白对照组与Sham组在3 d、7 d、14 d及21 d时的PDCD5蛋白均为低水平表达,差异无统计学意义(P>0.05)。而CCI组PDCD5蛋白的表达水平,在3 d时已开始增高,在7 d及14 d时,PDCD5蛋白表达水平明显增高,14 d为PDCD5蛋白表达的高峰期,与Sham组比较,二者差异有统计学意义(P<0.05);在21 d时,PDCD5蛋白表达较7 d及14 d时降低,但仍高于3 d时的表达水平。给予低浓度Cur处理后,PDCD5蛋白表达水平较CCI组开始降低,在Cur 100 mg/(kg·d)组,PDCD5蛋白表达明显减低,与CCI组比较,二者差异有统计学意义(P<0.05)。在Cur200 mg/(kg·d)组,PDCD5蛋白表达较Cur100mg/(kg·d)组升高,二者差异有统计学意义(P<0.05)。结论姜黄素可以减轻CCI诱发的神经病理性痛行为,减少脊髓背角神经元细胞的凋亡,其机制可能与抑制PDCD5蛋白的表达有关。

盐酸文拉法辛对坐骨神经慢性结扎损伤模型大鼠神经病理性疼痛的影响

目的观察盐酸文拉法辛对坐骨神经慢性结扎损伤模型大鼠神经病理性疼痛的影响。方法采用坐骨神经慢性结扎损伤模型,将21只SD大鼠随机分为3组,即文拉法辛组(术后每天给予盐酸文拉法辛2 5 mg/kg,连续给药14 d)、假手术组和模型组(予等量生理盐水)。分别于术前1 d和术后2,7,14 d采用YLS-6B智能热板仪测定热痛缩爪潜伏期(TWL),用意大利UGO BASILE 37450动态足底触觉仪测定机械痛缩爪潜伏期(MWT)。结果术前3组TWL和MWL差异无统计意义(P>0.05)。术后2 d与术前1 d比较,模型组和文拉法辛组的痛阈值变化有高度统计意义(P<0.01),而假手术组无统计意义(P>0.05)。术后14 d与术后2 d比较,文拉法辛组的TWL和MWL均有统计意义(P<0.05),而模型组无统计意义(P>0.05)。文拉法辛组术后7 d与术后2 d比较,痛阈值变化无统计意义(P>0.05)。结论盐酸文拉法辛能减轻大鼠坐骨神经慢性结扎损伤模型引起的神经病理性疼痛。

单侧坐骨神经完全结扎术后Ⅰ型囊泡膜谷氨酸转运体在大鼠腰髓、背根神经节和结扎远侧端神经干内表达的变化(英文)

目的 研究单侧坐骨神经结扎对大鼠腰 4～ 5脊髓节段和相应的背根神经节 (DRGs)内VGluT1样免疫阳性反应产物表达的影响以及VGluT1通过轴浆流向外周转运的情况。 方法 采用免疫组织化学方法观察单侧坐骨神经结扎后不同时间内腰 4～ 5脊髓节段、DRGs和结扎部位的近、远侧端神经干内VGLuT1样免疫阳性反应强度的变化。结果 (1)坐骨神经结扎后第 1和第 2天 ,VGluT1样免疫阳性产物在结扎的同侧腰 4～ 5脊髓节段和相应节段的DRGs内未检测到明显变化 ;但自术后第 4天开始 ,可观察到VGluT1样免疫阳性产物的表达在上述部位逐渐减弱 ;VGluT1样免疫阳性产物表达的降低在上述部位所出现的时间和程度相平行。 (2 )结扎后第 1天即可观察到VGluT1样免疫阳性产物在坐骨神经结扎部位近侧端的表达有所升高 ,但自术后第 4天开始逐渐降低 ;而VGluT1样免疫阳性产物在坐骨神经结扎部位远侧端的表达自结扎后第 1天起就逐渐降低 ,至第 4周时已完全消失。结论 (1)DRG神经元合成VGluT1,并通过轴浆流将VGLluT1向中枢突和周围突运输 ,故腰髓内部分VGluT1样阳性末梢起源于DRG神经元 ;(2 )

背根节脉冲射频对坐骨神经缩窄模型大鼠脊髓背角小胶质细胞活化的影响

[目的]探讨背根节脉冲射频对坐骨神经缩窄模型大鼠脊髓背角小胶质细胞活化的影响.[方法]取清洁级雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、模型对照组和治疗组,治疗组给予背根节脉冲射频,参数为温度42℃,脉宽20ms,频率2Hz,时间240s.采用免疫组织化学方法检测术后1周各组大鼠脊髓背角小胶质细胞活化标志物OX-42的表达情况.[结果]模型对照组和治疗组OX-42阳性细胞数明显高于正常对照组(P<0.05),治疗组OX-42阳性细胞数明显低于模型对照组(P<0.05).[结论]背根节脉冲射频对坐骨神经缩窄模型大鼠脊髓背角小胶质细胞活化具有抑制作用.

辛伐他汀对大鼠神经病理性疼痛行为学和RhoA通路表达的影响

目的：观察Rho A相关细胞骨架调控信号通路在慢性坐骨神经结扎（chronic sciatic nerve constriction injury,CCI）神经病理性疼痛大鼠背根神经节激活及辛伐他汀（simvastatin）鞘内给药对该通路影响。方法：42只质量180~200 g SD雄性大鼠随机分为5组：Na？ve组（n=6）、Sham组（n=6）、CCI组（n=18）、Simvastatin组（n=6）及Rho激酶（Rho kinase,ROCK）抑制剂Y-27632组（n=6）。对大鼠行鞘内置管,于造模后7天结扎CCI组、Simvastatin组及Y-27632组大鼠单侧坐骨神经构建CCI模型,术后Simvastatin组每天鞘内注射10μl辛伐他汀（10μg/μl）,Y-27632组每天鞘内注射12μl Y-27632（4 mg/ml）,Na？ve组、Sham组、CCI组术后每天鞘内注射生理盐水10μl,连续注射7天。于CCI建模后1、3、7、14天进行动物行为学评估,观察大鼠对机械和热刺激的反应。于建模后第14天处死大鼠,取手术侧L4~6背根神经节（dorsal root ganglion,DRG）,并进行实时定量PCR观察RhoA、ROCK的m RNA表达变化,免疫荧光观察Rho A蛋白在DRG伤害性神经元中的分布及改变,以及免疫荧光强度随建模时间梯度增加,Western blot检测通路中主要因子RhoA、LIMK和cofilin蛋白水平表达的改变。结果：1 Simvastatin组大鼠给予辛伐他汀后第3天起缩足反射热辐射潜伏期、缩足反射机械刺激阈值明显高于CCI组,差异具有统计学意义（P〈0.05）;ROCK抑制剂Y-27632组大鼠缩足反射热辐射潜伏期、缩足反射机械刺激阈值给药后3天起较CCI组明显提高,差异具有统计学意义（P〈0.05）。2 CCI组大鼠DRG中Rho A、ROCK m RNA于术后第7天起表达显著增加（P〈0.05）;Rho A蛋白在背根神经节神经元中表达,CCI术后14天Rho A免疫荧光强度与Na？ve组比显著增高（P〈0.05）。3鞘内注射辛伐他汀能显著抑制通路主要因子Rho A、p-LIMK、p-cofilin的表达（P〈0.05）。结论：大鼠CCI慢性神经病理性疼痛存在Rho A/LIMK/cofilin通路的激活,辛伐他汀鞘内注射可抑制该通路的活化,为治疗神经病理性疼痛提供新的靶点。

高压氧对神经病理性疼痛大鼠p38 MAPK信号通路的影响

目的探讨高压氧对神经病理性疼痛大鼠p38 MAPK信号通路的影响,从而明确其作用机制。方法实验分为2部分,每部分选用30只SD大鼠,又随机分为3组:假手术组(S组)、坐骨神经慢性缩窄组(CCI组)和高压氧组(HBO组),每组10只。第一部分实验测定术后3,7,14,28 d疼痛行为学指标,并在术后28 d取脊髓标本Western blot方法检测磷酸化p38表达,免疫组化法检测P2X4受体;第二部分实验先对各组大鼠行腰段鞘内置管,并将p38 MAPK信号通路阻断剂(SB203580)连续注入蛛网膜下腔中,测定阻断p38 MAPK信号通路后3,7,14,28 d疼痛行为学指标及术后28 d免疫组化法检测P2X4受体。结果第一部分实验中CCI组、HBO组大鼠疼痛行为学评分较S组明显降低(P<0.05),且CCI组比HBO组降低显著(P<0.05)。CCI组、HBO组的磷酸化p38及P2X4受体含量较S组增加(P<0.05),且CCI组磷酸化p38及P2X4受体的表达比HBO组显著增加(P<0.05)。第二部分实验中大鼠p38 MAPK信号通路抑制后,CCI组、HBO组疼痛行为学评分无统计学差异(P>0.05),但与未给抑制剂第一部分实验的CCI组、HBO组比较明显增高(P<0.05);CCI组及HBO组的P2X4受体表达比S组显著增高(P<0.05),但2组间比较无统计学差异(P>0.05)。结论高压氧可能通过P2X4受体介导的p38 MAPK信号通路影响神经病理性疼痛大鼠。

坐骨神经部分结扎模型大鼠的痛阈以及SCN9a基因和胶质细胞表达的变化

目的观察坐骨神经部分结扎（SNL）大鼠的痛阈以及大鼠脊髓胶质细胞的活化情况和背根神经节（DRG）部位SCN9a基因表达变化。方法雄性SD大鼠26只，体质量210～250g，随机分为两组：假手术组（Sham组，n=8）和模型组（SNL组，n=18）。SNL组大鼠做左侧坐骨神经L5结扎模型，Sham组大鼠做同样步骤找到M神经后缝合切口。两组均在建模前1d、建模后第3天开始一直到第14天检测所有大鼠的左后肢机械缩足阈值（MWT），Sham组大鼠于建模前0d、建模后第8、10、14天各处死2只大鼠，SNL组大鼠于建模后第8、10、14天各处死6只大鼠，取大鼠的脊髓腰膨大组织和DRG，用Western blot方法检测大鼠脊髓胶质纤维酸性蛋白（GFAP，星形胶质细胞激活标志）、OX42（小胶质细胞激活标志）和DRG部位Nav1．7的表达变化。结果与Sham组大鼠MWT（11．31±0．17）比较，SNL建模后3～14d，MWT（3．87±0．12）显著下降，差异有统计学意义（P〈0．01）；Nav1．7蛋白灰度分析显示，与Sham组大鼠（0．38±0．03）比较，SNL后第8天（0．70±0．04）、第10天（0．81±0．06）、第14天（0．85±0．05），Nav1．7蛋白水平均显著增高，差异有统计学意义（P〈0．01）；GFAP蛋白灰度分析显示，与Sham组大鼠（0．40±0．05）比较，SNL后第10天（0．75±0．06）和第14天（0．85±0．10），蛋白水平均显著增高，差异有统计学意义（P〈0．01）；0X42蛋白灰度分析显示，与Sham组大鼠（0．35±0．05）比较，SNL后第8天（0．45±0．02）、第10天（0．44±0．03）、第14天（0．43±0．03）脊髓表达增高差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Nav1．7与脊髓胶质细胞参与了大鼠SNL模型疼痛的发生和发展，其中小胶质细胞参与了SNL模型疼痛的发生发展，星形胶质细胞参与了SNL模型疼痛的维持。