5-HT_(1A)受体亚型mRNA在坐骨神经分支选择性损伤模型大鼠脊髓和背根节中的表达变化(英文)

坐骨神经分支选择性损伤 (SNI)模型是一种新型神经病理痛模型。本实验用 SD雄性大鼠 ,分支结扎并切断左侧坐骨神经干的胫神经和腓总神经 ,保留腓肠神经分支 ,右侧仅暴露坐骨神经。术后 1、2、3、4、7、14、2 1和 2 8d,用 RT-PCR的方法对 5 -HT1 A受体 m RNA在腰髓的背角和背根神经节 (DRG)的表达水平进行检测。结果显示 ,5 -HT1 A受体 m RNA在损伤侧腰髓背角内的表达水平于 1d后开始升高 ,7d时达高峰 ,随后逐渐下降 ,但仍高于正常水平。其表达水平在对侧脊髓背角内没有明显变化。在损伤侧 DRG内 ,5 -HT1 A受体 m RNA的表达水平于 1d后开始增高 ,4d时达高峰 ,随后开始下降 ,但仍维持较高的表达水平 ;而损伤对侧 DRG内的 5 -HT1 A受体 m RNA的表达没有变化。上述结果提示 5 -HT1 A受体亚型可能在脊髓及外周伤害性信息的传递和调节中发挥着重要作用 ,本研究的结果为进一步了解 5 -HT1 A受体在神经病理性痛中的作用机制提供了依据。

坐骨神经分支选择性损伤模型L4～6背根神经节水平不同时间点P2X3mRNA表达变化

目的观察坐骨神经分支选择性损伤（SNI）动物制作型模后不同时间点L4~6背根神经节（DRG）水平P2X3mRNA的表达情况,探讨外周P2X3mRNA在神经病理性痛模型不同阶段中的作用。方法 54只健康雄性SD大鼠完全随机分为空白对照（control）组、假手术（sham surgery）组和手术（surgery）组。通过结扎腓总神经及切断胫神经,保留腓肠神经的方法建立SNI模型。动态观察造模前、造模后1d、3d、7d和14d双侧足跖机械痛阈;Real-time PCR法检测患侧造模后3d、7d和14d L4~6 DRG水平P2X3mRNA表达情况。结果模型制作后各时间点,surgery组大鼠患侧足跖痛阈明显降低（P〈0.05）,sham surgery组大鼠与control组比较差异无显著性（P〉0.05）;各组大鼠健侧足跖痛阈于模型制作后各时间点均无显著变化（P〉0.05）。模型制作后3d、7d,surgery组大鼠L4、L5、L6 DRG水平P2X3mRNA表达均有不同程度的提高（P〈0.05）;而模型制作后14d,surgery组大鼠L5、L6DRG水平P2X3mRNA表达明显减少（P〈0.05）,L4 DRG水平P2X3mRNA表达仍显著多于sham surgery组（P〈0.05）。模型制作后各时间点、各DRG水平,sham surgery组和surgery组大鼠P2X3mRNA表达差异均无显著性（P〉0.05）。结论外周P2X3mRNA参与SNI模型疼痛的产生和维持,且其在不同阶段发挥的作用不同。

碱性成纤维细胞生长因子在大鼠坐骨神经分支选择性损伤后的动态变化

目的观察坐骨神经分支选择性损伤(SNI)大鼠机械刺激缩足反射阈值(PWMT)与脊髓碱性成纤维细胞生长因子(FGF-2)、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白介素(IL)-6表达变化的时程关系,探讨神经病理性疼痛中脊髓FGF-2的动态变化规律及致痛机制。方法雄性SD大鼠100只,采用随机数字表法,将其随机分2组(n=50):假手术组(Sh组)和手术组(SNI组)。于术前1 d,术后1、4、7、14、28 d观察疼痛行为学,检测机械刺激缩足反射阈值(PWMT),并于术后各时间点应用免疫组织化学、Western blot以及ELISA方法,检测脊髓FGF-2、TNF-α和IL-6含量。结果 SNI后1 d PWMT下降,7 d达最低,28 d仍处于较低水平,与Sh组术后各时间点和术前比较差异显著(P<0.05)。SNI组脊髓FGF-2含量于术后4 d开始增加,14 d达高峰,28 d仍维持较高水平,与Sh组术后各时间点比较差异显著(P<0.05)。SNI组术后各时间点TNF-α和IL-6的表达高于Sh组(P<0.05)。结论大鼠SNI模型成功模拟神经病理性疼痛的发生,并且诱发损伤侧脊髓FGF-2以及炎性因子表达增加。

鞘内注射地塞米松缓解坐骨神经分支选择性损伤大鼠神经病理性痛

目的探索坐骨神经分支选择性损伤(spared nerve injury,SNI)模型中糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)激动剂地塞米松对大鼠痛敏的影响。方法取成年雄性SD大鼠24只,随机均分为四组:假手术组(Sham组)、SNI+地塞米松组(SD组)、SNI+GR拮抗剂(RU)组(SR组)和SNI+生理盐水组(SNI+NS组,SS组)。用Von Frey纤维丝测定四组大鼠50%缩足阈值(50%mechanical withdrawal threshold,50%MWT)的变化;SD组和SR组均于术后8d鞘内注射地塞米松(2μg,0.05mg/ml,qd)和RU(2μg,0.025mg/ml,Bid),连续注射4d,术后13d取材,并利用免疫荧光染色检测各组脊髓中GR的表达变化情况。结果与SS组比较,SD组大鼠的50%MWT升高,脊髓背角GR表达明显增加(P<0.05或P<0.01)。而SR组和SS组的50%MWT差异无统计学意义;免疫荧光染色显示SR组脊髓背角GR表达明显低于SS组(P<0.05)。结论脊髓GR参与调节SNI所致的神经病理性痛,鞘内注射Dex能缓解SNI大鼠的机械痛敏。

大鼠坐骨神经分支选择性损伤后脊髓背角毛细血管和星形胶质细胞的反应

目的探讨成年大鼠坐骨神经分支选择性结扎切断(SNI)后,腰段脊髓背角内毛细血管和星形胶质细胞的反应。方法成年雄性SD大鼠40只,随机分为光镜组(n=30)和电镜组(n=10)。光镜组又分为对照组、假手术组和SNI手术组。SNI手术为分别结扎切断左侧胫神经和腓总神经,保留腓肠神经,存活20d。部分动物在术后经尾静脉给予30g/L伊文思蓝,切取脊髓L4平面,荧光显微镜观察伊文思蓝的渗出;另一部分在术后进行常规固定取材,切片进行抗鼠IgG和GFAP的免疫组织化学反应。电镜组(对照组和SNI后20d组),脊髓切片进行常规抗大鼠IgG的免疫电镜处理。结果 1.SNI后20d,可见明显的伊文思蓝渗出红色光斑;2.SNI后GFAP阳性细胞变为反应型,数量明显增加,毛细血管壁及其周围的IgG颗粒也显著增加。3.电镜观察:SNI术后20d,IgG阳性颗粒增多,内皮细胞观察到下列变化:(1)内皮细胞向管腔内伸出许多微细的突起,有的含有IgG阳性颗粒。(2)内皮细胞的管腔侧胞膜上有许多"内吞"小凹,凹内可见IgG阳性颗粒,胞质内有含IgG阳性颗粒的小泡,在反管腔侧胞膜上有"胞吐"现象。(3)内皮细胞紧密连接出现间隙,间隙内有IgG颗粒。(4)胞质内出现囊泡,有的泡内显示IgG阳性颗粒。结论 SNI后脊髓背角内毛细血管内皮细胞发生明显的反应,大鼠IgG和伊文思蓝可经过血脊髓屏障渗出,星形胶质细胞被激活。

依托度酸对坐骨神经分支选择性损伤模型大鼠神经病理性疼痛行为学的影响

神经病理性疼痛是由身体损伤、外科手术、病毒感染、化学治疗、某些代谢疾病（如糖尿病）或癌症等病理原因造成的神经系统功能异常，有痛觉过敏和痛觉超敏两种表现形式。其发病机制目前尚不明确，对非甾体类抗炎药（NSAIDs）无反应，对阿片类药抵抗或不敏感，此类患者通常凭经验治疗，或予抗抑郁药如三环类、5羟色胺再摄取抑制剂等，也有用抗惊厥药如卡马西平和加巴喷丁治疗.

5-HT_1受体亚型mRNAs在坐骨神经分支选择损伤模型大鼠脊髓背角的表达变化

为探讨脊髓内5-HT1受体亚型在神经病理性痛信息传递和调控中的作用,本研究利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术观察了坐骨神经分支选择性损伤(SNI)模型大鼠脊髓背角内5-HT1A、5-HT1B、5-HT1D、5-HT1E和5-HT1F受体亚型mR-NAs表达变化。结果表明:损伤侧脊髓背角内5-HT1A受体亚型mRNA的表达水平在术后3d明显增高,7d达到高峰,随后开始下降,术后28d与正常对照相比仍有显著变化;5-HT1B受体亚型mRNA的表达水平也于术后3d开始显著增高,此后持续升高,至21d达到高峰,28d时有轻微下调,但高于对照水平;未观察到损伤侧脊髓背角内5-HT1D受体亚型mRNA表达水平的显著变化。5-HT1F受体亚型mRNA的表达水平于术后4d显著增高,此后一直维持该表达水平至28d。上述受体亚型在非损伤侧脊髓背角内的表达水平均无变化。在脊髓背角内未检测到5-HT1E受体亚型mRNA的表达。上述5-HT1受体亚型mRNA在SNI模型脊髓背角内具有不同的表达变化特点,提示不同的5-HT1各受体亚型在神经病理性痛信息的传递和调节中可能发挥着不同的作用。

新型芳烷酮哌嗪衍生物YXO611-1对坐骨神经分支选择性损伤大鼠的镇痛作用

建立了大鼠坐骨神经分支选择性损伤实验(SNI)模型,通过观察大鼠机械刺激阈值考察新型芳烷酮哌嗪衍生物YX0611-1对神经病理性疼痛的抑制作用。结果表明,YX0611-1以80 mg/kg灌胃给药明能显著提高SNI模型大鼠的机械痛阈值,与阳性对照药加巴喷丁(100 mg/kg)的镇痛效果无显著差异(P>0.05),提示该化合物对神经病理性疼痛具有较好的治疗作用。

鞘内注射氟代柠檬酸缓解坐骨神经分支选择性损伤大鼠神经病理性痛

目的探索坐骨神经分支选择性损伤(sparednerveinjury,SNI)模型中小胶质细胞抑制剂氟代柠檬酸(Fluorocitrate,FC)对大鼠痛敏的影响。方法取成年雄性SD大鼠24只,随机均分为四组:假手术组(Sham组)、模型组(SNI组)、SNI+生理盐水组(SNI+NS组)和SNI+氟代柠檬酸(SNI+FC组)。用VonFrey纤维丝测定四组大鼠50%缩足阈值(50%mechanicalwithdrawalthreshold,50%MWT)的变化;SNI+FC组和SNI+NS组于术后8天开始分别给予FC或NS,隔天1次,共3次,术后13d取材,利用Western-blot技术检测各组脊髓GR蛋白的表达情况。结果与Sham组相比,SNI组大鼠术后50%MWT显著降低(P<0.05);与SNI+NS组相比,SNI+FC组大鼠术后50%MWT显著增加(P<0.05);Western-blot显示,术后SNI+FC组大鼠GR的表达增加,与SNI+NS组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论SNI大鼠模型可成功模拟神经病理性疼痛;与SNI+NS组相比,Western-blot显示,SNI+FC组大鼠术后GR的蛋白水平显著增加(P<0.05),表明鞘内注射氟代柠檬酸可缓解坐骨神经分支选择性损伤大鼠神经病理性痛。

糖皮质激素受体激动剂地塞米松对大鼠血清促炎因子IL-6、TNF-α表达及神经病理性疼痛的影响

目的:探索坐骨神经分支选择性损伤诱导的早期神经病理性疼痛(SNI)模型中给予糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)激动剂对痛行为及促炎因子IL-6、TNF-α分泌的影响。方法:成年雄性SD大鼠随机均分为四组:Sham+Vehicle(生理盐水组),SNI+Vehicle组,SNI+DEX(GR激动剂地塞米松)组,SNI+RU(GR抑制剂米非司酮)组。Von Frey纤维丝检测各组大鼠缩足阈值(paw withdrawal threshold,PWT)的变化;Western Blot和免疫荧光染色检测各组脊髓中GR的表达水平;Elisa检测血清IL-6和TNF-α表达变化。结果:与SNI+Vehicle组比较,SNI+DEX组大鼠PWT阈值和脊髓GR的表达增高(P<0.05),血清IL-6和TNF-α浓度降低(P<0.05);SNI+RU组大鼠PWT阈值和脊髓GR表达降低(P<0.05),血清IL-6和TNF-α浓度升高(P<0.05)。结论:GR在脊髓水平能够通过下调促炎因子IL-6和TNF-α的表达缓解SNI诱导的早期神经病理性疼痛。

大鼠SNI神经痛模型不同时相脊髓背角p-p38MAPK和p-ATF2表达的变化

目的观察坐骨神经分支选择性损伤(SNI)模型大鼠不同时间点术侧腰段L4~L6脊髓背角神经元磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)和磷酸化活化转录因子2(p-ATF2)的表达情况,探讨脊髓背角p-p38MAPK和p-ATF2在神经病理性痛模型不同阶段中的作用。方法健康雄性SD大鼠36只,完全随机分为空白对照组、假手术组和手术组,各12只。通过结扎腓总神经及切断胫神经,保留腓肠神经的方法建立SNI大鼠模型。观察造模前、造模后3天和14天术侧足跖缩足阈值(PWT);免疫荧光法检测造模后3天和14天术侧腰段脊髓背角p-p38MAPK和p-ATF2阳性细胞表达情况。结果选模后3天和14天,手术组大鼠术侧足跖PWT较假手术组与空白对照组明显降低(P<0.01),假手术组大鼠与空白对照组大鼠比较差异无统计学意义(P>0.05)。造模后3天和14天,手术组大鼠术侧腰段脊髓背角p-p38MAPK和p-ATF2阳性细胞表达率较假手术组和空白对照组均明显升高(P<0.01),假手术组和空白对照组SNI模型大鼠造模后各时间点,术侧腰段脊髓背角p-p38MAPK和p-ATF2阳性细胞表达率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 SNI模型神经病理痛的产生和维持可能与术侧腰段脊髓背角p-p38MAPK和p-ATF2表达上调有关。

低频电针对选择性神经损伤大鼠神经痛维持期脊髓背角PKA—TRPV1通路及痛敏递质的干预作用

目的 探讨低频电针干预神经病理痛维持期脊髓背角（SCDH）蛋白激酶A（PKA）、辣椒素受体（TRPV1）通路的调控机制。 方法 将大鼠随机分为空白对照组、假手术组、模型对照组、电针干预组4组。采用坐骨神经分支选择性神经损伤（SNI）方法建立神经病理痛模型。电针干预取术侧足三里、昆仑穴，频率2Hz，每日1次，连续干预14d。检测大鼠术侧后足缩足阈值（PWT）、SCDH PKA和TRPV1以及降钙素基因相关肽（CGRP）和P物质（SP）水平。 结果 SNI模型大鼠术侧PWT下降（P〈0.01），术侧SCDH PKA、TRPV1、CGRP、SP水平均上调（P〈0.05）；2Hz电针可提高SNI模型大鼠PWT（P〈0.01），降低术侧SCDH PKA、TRPV1、CGRP、SP水平（P〈0.05）。 结论 低频电针能改善神经病理痛，可能与其下调SCDH PKA-TRPV1通路以及CGRP、SP痛敏递质水平有关。

Reg-Ⅲβ和C-fosmRNA在尼莫地平抗大鼠背根反射介导的神经病理痛中的作用

目的研究C-fos及Reg-Ⅲβ在大鼠背根反射介导的神经病理痛中的表达变化;并探讨尼莫地平治疗对其的影响。方法建立SD大鼠选择性坐骨神经损伤(SNI)模型,采用Von Frey纤维丝测量不同时间点手术侧后肢的机械痛阈。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测坐骨神经损伤后不同时间内Reg-Ⅲβ及C-fos的mRNA表达,以及不同剂量尼莫地平治疗对这些分子表达的影响。结果与-1 d相比,1、3、5、7、14 d大鼠其SNI术后各时间段脊髓背角组织中的Reg-Ⅲβ及C-fos mRNA表达均普遍上调。腹腔注射尼莫地平对Reg-ⅢβmRNA的表达上调产生明显的时间和剂量依赖性的抑制作用。模型组大鼠的机械痛阈在SNI术后1 d即明显低于基础痛阈,术后5 d降至最低,随后缓慢恢复。尼莫地平治疗后大鼠机械痛阈仍呈下降趋势,但其幅度较模型组显著减小,且术后转归时间显著提前。这些治疗效果随药物浓度提升而明显加大。结论选择性坐骨神经损伤可引起大鼠脊髓背角组织中C-fos及Reg-ⅢβmRNA表达发生时序性变化,尼莫地平能显著减轻神经病理性痛并缩短疼痛转归时间,其机制可能与逆转背根神经节介导的脊髓背角中C-fos及Reg-Ⅲβ的病理性表达有关。

基于小胶质细胞-BDNF-神经元信号探讨电针对SNI大鼠的镇痛作用及机制

目的:观察电针“环跳”“委中”对坐骨神经选择性神经损伤(SNI)大鼠脊髓背角胶质细胞活化、脑源性神经营养因子(BDNF)表达、神经元兴奋性及树突棘数量的影响,探讨电针对SNI的镇痛效应机制。方法:第一部分:60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组和假电针组,每组15只。除假手术组外,其余组均制备SNI大鼠模型;假手术组仅做切开处理,不损伤神经。电针组于患侧“环跳”“委中”行电针干预,连续波,频率2 Hz,电流强度1 m A,每次30 min,每日1次,共14 d。假电针组于患侧“环跳”“委中”旁开0.5 cm处行电针干预,操作、电针参数及疗程同电针组。于造模前1 d,造模后3、7、14 d检测各组大鼠热缩足反射潜伏期和机械缩足反射阈值。造模后14 d,采用Western blot法检测各组大鼠脊髓背角离子钙接头蛋白1(Iba-1)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、BDNF、即刻早期基因(c-Fos)蛋白表达;采用免疫荧光法检测各组大鼠脊髓背角Iba-1、c-Fos蛋白表达;采用免疫组化法检测各组大鼠脊髓背角GFAP蛋白表达;采用高尔基染色法检测各组大鼠脊髓背角神经元树突棘数量。第二部分:30只SD大鼠随机分为对照组、BDNF组、BDNF+anti-Trk B组,每组10只。对照组予10μL 0.9%氯化钠溶液和二甲基亚砜(DMSO)的1︰1混合液鞘内注射,BDNF组将10μg大鼠重组BDNF溶于10μL0.9%氯化钠溶液和DMSO的1︰1混合液鞘内注射,BDNF+anti-Trk B组将10μg大鼠重组BDNF和30μg酪氨酸激酶受体B(Trk B)抗体溶于10μL0.9%氯化钠溶液和DMSO的1︰1混合液鞘内注射。于鞘内注射前1 d,注射1、3、7 d后检测各组大鼠机械缩足反射阈值。注射7 d后,采用Western blot法和免疫荧光法检测各组大鼠脊髓背角c-Fos蛋白表达。结果:第一部分:造模后3、7、14 d,与假手术组比较,模型组大鼠热缩足反射潜伏期和机械缩足反射阈值降低(P<0.05);造模后7、14 d,与模型组比较,电针组大鼠热缩足反射潜伏期和机械缩足反射阈值增加(P<0.05)。模型组大鼠脊髓背角Iba-1、GFAP、BDNF、c-Fos蛋白表达及神经元树突棘数量较假手术组增加(P<0.05);电针组大鼠脊髓背角Iba-1、BDNF、c-Fos蛋白表达及神经元树突棘数量较模型组降低(P<0.05)。第二部分:鞘内注射3、7d后,BDNF组大鼠机械缩足反射阈值较对照组降低(P<0.05);BDNF+anti-Trk B组大鼠机械缩足反射阈值较BDNF组增加(P<0.05)。BDNF组大鼠脊髓背角c-Fos蛋白表达较对照组增加(P<0.05);BDNF+anti-Trk B组大鼠脊髓背角c-Fos蛋白表达较BDNF组降低(P<0.05)。结论:电针“环跳”“委中”对SNI大鼠产生镇痛作用,其机制可能是抑制脊髓背角小胶质细胞活化,从而阻断小胶质细胞-BDNF-神经元信号,最终降低神经元的兴奋性。

CCI和SNI神经病理性疼痛动物模型的认知功能研究进展

神经病理性疼痛常伴有情感和认知障碍的合并症,但其内在机制并不清楚。神经病理性疼痛动物模型中坐骨神经慢性结扎(CCI)模型和坐骨神经分支选择性损伤(SNI)模型的行为和功能改变与临床神经病理性疼痛症状更为相似,且可以诱发疼痛晚期神经精神障碍(焦虑样、抑郁样及认知障碍等),常被用于神经病理性疼痛认知功能的研究中。文章介绍两种动物模型的特点及其在神经病理性疼痛改变认知功能研究中的应用,旨在为神经病理性改变认知功能的病理机制和干预研究提供帮助。