PIT-1及PROP-1与联合垂体激素缺乏症

垂体前叶特异性转录因子(PIT)-1及其祖先蛋白(PROP)-1异常可致联合垂体激素缺乏症(CPHD)。其中PIT-1与胚胎期垂体前叶的发育和促甲状腺激素(TSH)、催乳素(PRL)及生长激素(GH)基因的表达有关,其基因突变者典型表现为血TSH、PRL、GH完全缺乏,MRI示垂体萎缩。而PROP-1也是一种垂体特异转录因子,启动胚胎期PIT-1基因的起始表达及维持个体出生后的持续表达,并可直接促使PIT-1细胞系的前体分化为促性腺细胞系,其基因突变患者除GH、PRL、TSH缺乏外,尚有促黄体激素、促卵泡激素或促肾上腺皮质激素缺乏。

细胞分化周期蛋白27基因沉默抑制GH3细胞迁移及其分泌功能

目的进行3种全基因组外显子测序所得基因体外的功能验证,为垂体柄中断综合征病因研究的体内实验提供理论依据。方法将细胞分化周期蛋白27(cell division cycle protein 27,CDC27)、神经纤维瘤病1型(neurofibromatosis type1,NF1)、X染色体关联的泛素特异性蛋白酶9(ubiquitin specific peptidase 9,X-Linked,USP9X)三种基因经由小干扰RNA(si RNA)分别转染至细胞内,每种基因均设置实验组、阴性对照(negative control,NC)组、空白细胞组。通过RTPCR筛选出各基因最佳的si RNA敲低序列以用于复筛,Western bolt复筛各基因最佳敲低序列在蛋白水平的表达,以确定目标基因进行下一步研究。依次运用CCK-8检测细胞增殖能力及形态,细胞划痕实验检测细胞迁移,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞分泌功能,Western bolt检测垂体特异性转录因子-1(pit-oct-unc class 1homeobox 1,POU1F1)和垂体特异性转录因子祖先蛋白(homeobox protein prophet of pit-1,PROP1)表达水平。结果 1)CDC27在si RNA 117和1968序列时能够达到稳定的沉默效率,并且在mRNA及蛋白两个水平上均能够被敲低,NF1和UPS9X仅能在mRNA水平上实现敲低而未实现蛋白水平的敲低,无法进行后续实验;2)CDC27沉默对于细胞的增殖及形态无明显影响(P>0.05);3)CDC27沉默能够明显抑制细胞的迁移能力(P<0.05);4)CDC27沉默能够明显抑制细胞分泌生长激素(growth hormone,GH)、泌乳素(prolactin,PRL)分泌(P均<0.05),对促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)的分泌无明显影响(P>0.05);5)CDC27沉默能够明显下调POU1F1与PROP1的表达水平(P<0.05)。结论 CDC27沉默可以抑制GH3细胞的迁移及其生长激素、泌乳素的分泌。