目的利用小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)片段沉默卵巢癌细胞人垂体瘤转化基因1(human pituitary tumor-transforming gene 1,h PTTG1)基因表达,探讨其抑制细胞凋亡的分子机制。方法通过脂质体将h PTTG1 si RNA转染A2780细胞(h...目的利用小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)片段沉默卵巢癌细胞人垂体瘤转化基因1(human pituitary tumor-transforming gene 1,h PTTG1)基因表达,探讨其抑制细胞凋亡的分子机制。方法通过脂质体将h PTTG1 si RNA转染A2780细胞(h PTTG1 si RNA干扰组),并设立正常组和阴性对照组,转染48 h后进行检测。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测转染前后h PTTG1 m RNA表达水平的变化,采用逆转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测survivin m RNA和蛋白表达水平,采用DNA梯带电泳法和碘化丙啶单染法分析细胞凋亡,采用比色法测定胱天蛋白酶(caspase)-3活性。结果 h PTTG1 si RNA可抑制A2780细胞内h PTTG1 m RNA表达;h PTTG1 si RNA干扰组可见典型的细胞凋亡阶梯状电泳,流式细胞仪检测该组细胞凋亡率为(17.53±2.17)%,明显高于正常组和阴性对照组[(8.97±1.56)%、(9.64±1.31)%],差异有统计学意义(P<0.05);h PTTG1干扰后survivin m RNA和蛋白表达均下调,caspase-3活性增强。结论 h PTTG1 si RNA可下调survivin基因表达,活化caspase-3,导致A2780细胞凋亡,其可成为卵巢癌基因治疗的潜在靶点。展开更多
目的研究人垂体瘤转化基因1(hum an p itu itary tumor transform ing gene 1,PTTG1)上调表达对肺腺癌细胞株(A549)增殖和凋亡的影响。方法构建含PTTG1基因的真核表达载体,脂质体法转染A549细胞并用G418筛选出高表达的阳性克隆株,实时...目的研究人垂体瘤转化基因1(hum an p itu itary tumor transform ing gene 1,PTTG1)上调表达对肺腺癌细胞株(A549)增殖和凋亡的影响。方法构建含PTTG1基因的真核表达载体,脂质体法转染A549细胞并用G418筛选出高表达的阳性克隆株,实时荧光定量PCR(real-tim e fluorescent quantitation PCR)和免疫细胞化学(immunocytochem ical assay,ICA)分别检测PTTG1 mRNA及蛋白表达的改变,3H胸腺嘧啶核甙(3H-TdR)掺入法检测细胞增殖活性,AnnexinⅤ异硫氢酸荧光素(FITC)试剂盒检测凋亡情况。结果成功构建含PTTG1基因的真核表达载体,获得上调表达PTTG1的A549细胞,转染含PTTG1基因重组质粒的A549细胞增殖活性较未转染组细胞及转染空白质粒组细胞均显著增强(P<0.05);3组细胞间的凋亡率无显著差异。结论PTTG1基因能显著促进A549细胞的增殖,而对细胞凋亡没有影响。展开更多
文摘目的利用小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)片段沉默卵巢癌细胞人垂体瘤转化基因1(human pituitary tumor-transforming gene 1,h PTTG1)基因表达,探讨其抑制细胞凋亡的分子机制。方法通过脂质体将h PTTG1 si RNA转染A2780细胞(h PTTG1 si RNA干扰组),并设立正常组和阴性对照组,转染48 h后进行检测。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测转染前后h PTTG1 m RNA表达水平的变化,采用逆转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测survivin m RNA和蛋白表达水平,采用DNA梯带电泳法和碘化丙啶单染法分析细胞凋亡,采用比色法测定胱天蛋白酶(caspase)-3活性。结果 h PTTG1 si RNA可抑制A2780细胞内h PTTG1 m RNA表达;h PTTG1 si RNA干扰组可见典型的细胞凋亡阶梯状电泳,流式细胞仪检测该组细胞凋亡率为(17.53±2.17)%,明显高于正常组和阴性对照组[(8.97±1.56)%、(9.64±1.31)%],差异有统计学意义(P<0.05);h PTTG1干扰后survivin m RNA和蛋白表达均下调,caspase-3活性增强。结论 h PTTG1 si RNA可下调survivin基因表达,活化caspase-3,导致A2780细胞凋亡,其可成为卵巢癌基因治疗的潜在靶点。
文摘目的研究人垂体瘤转化基因1(hum an p itu itary tumor transform ing gene 1,PTTG1)上调表达对肺腺癌细胞株(A549)增殖和凋亡的影响。方法构建含PTTG1基因的真核表达载体,脂质体法转染A549细胞并用G418筛选出高表达的阳性克隆株,实时荧光定量PCR(real-tim e fluorescent quantitation PCR)和免疫细胞化学(immunocytochem ical assay,ICA)分别检测PTTG1 mRNA及蛋白表达的改变,3H胸腺嘧啶核甙(3H-TdR)掺入法检测细胞增殖活性,AnnexinⅤ异硫氢酸荧光素(FITC)试剂盒检测凋亡情况。结果成功构建含PTTG1基因的真核表达载体,获得上调表达PTTG1的A549细胞,转染含PTTG1基因重组质粒的A549细胞增殖活性较未转染组细胞及转染空白质粒组细胞均显著增强(P<0.05);3组细胞间的凋亡率无显著差异。结论PTTG1基因能显著促进A549细胞的增殖,而对细胞凋亡没有影响。