垂体腺苷环化酶激活肽对缺血再灌注脑神经元凋亡的作用

目的:观察垂体腺苷环化酶激活肽(pituitaryadenylatecyclase-activatingpolypeptide,PACAP)对缺血再灌注脑神经元凋亡的防治作用。方法:利用四血管结扎法,建立老龄大鼠脑缺血再灌注模型,侧脑室注射PACAP,观察脑组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧物酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,计数海马CA1区存活和凋亡神经元数目,电镜观察神经元的超微结构变化。结果:PACAP治疗后脑组织MDA含量为(1.35±0.39)nmol/mg,SOD和GSH-Px活性分别为(115±20)NU/mg、(10.3±2.0)U/mg,与缺血再灌注组有明显差异(P<0.05),海马CA1区存活和凋亡神经元数目为48.8±4.3,14.3±2.9,能促进神经元存活和减轻凋亡损伤(P<0.01),保护超微结构。结论:PACAP的保护作用可能与其降低脑组织氧自由基水平,提高抗氧化酶活性,防止神经元凋亡有关。

垂体腺苷环化酶激活肽调节cAMP对胃癌细胞的作用

垂体腺苷环化酶激活肽(pituitary adenylatecyclase activating polypeptide-38,PACAP-38)是由38个氨基酸组成的一种新的胃肠激素,现已证实PACAP对胃肠道分泌、胰腺外分泌、胃肠道运动有调节作用,但它与胃肠道肿瘤有何关系,目前尚了解甚少。本研究观察了PACAP对人胃腺癌细胞MKN-45生长的影响。方法:MKN-45细胞株用含10％新生小牛血清(FBS)RPMI

胃癌细胞垂体腺苷环化酶激活肽相关受体的分析

垂体腺苷环化酶激活肽(PACPA)属血管活性肠肽(VIP)家族的脑肠肽,它广泛分布于胃肠道,并参与许多胃肠功能的调节。在胃粘膜细胞及十二指肠、胰腺等组织细胞上存在有PACAP受体;研究亦发现,胰腺癌细胞膜上也表达PACAP受体,提示它可能与某些消化系肿瘤有一定关系,但是在胃癌细胞膜上是否存在PACAP受体,尚未见报道。

垂体腺苷环化酶激活肽对胃癌细胞增殖的抑制作用

垂体腺苷环化酶激活肽(PACAP)是一种新的胃肠激素,其参与许多胃肠功能的调节。为了解其是否对胃癌细胞有作用,我们应用细胞培养等方法研究了PACAP对MKN-45细胞的影响。结果发现:10nM～1μM PA-CAP作用3天后即表现出对细胞的生长有抑制效应,且可持续5天;并与PACAP的剂量呈正相关,其机制可能与延缓DNA合成、使细胞同期阻止在S期有关。

大鼠三叉神经节垂体腺苷环化酶激活肽免疫反应神经元对松果体的神经支配

目的 证实大鼠松果体的垂体腺苷环化酶激活肽 (PACAP)免疫反应神经纤维来源于三叉神经节神经元。方法 采用颞下窝入路切断大鼠眼 上颌神经 ,存活 3d～ 1周后 ,观察松果体的PACAP免疫反应神经纤维并计数 ,与未经手术的对照组动物比较。结果 在切断了眼 上颌神经的大鼠 ,其松果体的PACAP免疫反应神经纤维明显减少。结论 大鼠三叉神经节是松果体PACAP能神经纤维的主要来源 。

垂体腺苷环化酶激活肽对大鼠创伤性脑损伤的保护作用

目的观察损伤后给予不同剂量的垂体腺苷环化酶激活肽(PACAP)对大鼠脑创伤引起的神经凋亡等继发性损伤的影响。方法采用创伤性脑损伤(TBI)模型,侧脑室注射PACAP,观察脑组织含水量,丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活性,流式细胞术(FCM)检测神经细胞凋亡。结果与对照组相比,PACAP治疗组减轻脑水肿,降低MDA含量,提高SOD活性,降低神经细胞凋亡的比例。不同剂量PACAP治疗组的结果有差异。结论PACAP对大鼠脑创伤后的继发性损伤具有保护作用。

血清垂体腺苷酸环化酶激活多肽与绝经后骨质疏松症严重性的相关性研究

目的检测绝经后骨质疏松症(PMOP)患者的血清垂体腺苷酸环化酶激活多肽(PACAP)水平,探索其与PMOP严重程度间的相关性,为诊疗提供借鉴。方法纳入某院123例PMOP确诊患者为试验组,以120例绝经后非骨质疏松症患者为对照组。比较2组患者的血清PACAP、骨转换标志物I型胶原氨基端延长肽(PINP)、I型胶原羧基末端肽(CTX-I)水平以及全髋关节、腰椎1~4节和左股骨颈骨密度;对椎体骨折进行分级并测量疼痛程度;测试6 min步行试验及重复坐立试验功能状态;评价血清PACAP水平与其他参数之间的相关性。结果研究组血清PACAP水平、全髋关节、腰椎1~4节和左股骨颈骨密度均低于对照组;椎体骨折患者血清PACAP水平低于非骨折患者,且血清PACAP浓度与Genant分级水平呈负相关(r=-0.54);研究组患者的血清PACAP水平与左股骨颈、全髋关节、腰椎1~4节骨密度、6 min步行试验、重复坐立试验、血清PINP水平均呈正相关(r=0.33~0.39),与NRS评分、血清CTX-1水平呈负相关(r=-0.34、-0.50);以上差异均有统计学意义(P值均<0.01)。结论PMOP患者血清PACAP水平显著低于PMNOP患者,且血清PACAP水平降低与疾病严重程度有关,表明PACAP可能在PMOP进展中起到了保护性作用。

基于垂体腺苷酸环化酶激活多肽在帕金森动物模型中的神经保护作用及机制探索

目的 探讨垂体腺苷酸环化酶激活多肽(PACAP)在帕金森病(PD)动物模型中的神经保护作用及机制。方法SD大鼠设置假手术组(Sham组)、PD组(帕金森造模组)、PD+PACAP_低浓度组(造模+按体重5μg/kg予PACAP鼻腔给药)、PD+PACAP_中浓度组(造模+按体重10μg/kg予PACAP鼻腔给药)、PD+PACAP_高浓度组(造模+按体重20μg/kg予PACAP鼻腔给药) 5组,最终每组纳入10只。四个PD组将脂多糖溶液注射至SD大鼠黑质中建立PD模型,假手术组同法操作但注射生理盐水。通过转棒法检测大鼠行为学表现;ELISA法检测黑质谷氨酸浓度(Glu)和α-突触核蛋白(α-syn)水平,WB法检测黑质α-syn及核因子激活的B细胞的κ-轻链(NF-κB)、核因子κB抑制蛋白α (IκBα)的表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应法(qPCR)检测大鼠黑质炎症因子肿瘤坏死因子α (TNF-α)、白细胞介素-1β (IL-1β)、白细胞介素-6IL-6的mRNA表达水平;WB法和免疫荧光法检测核转录因子胶质纤维酸性蛋白(GFAP)水平来观察星形胶质细胞的活化水平,TUNEL法检测黑质神经元的凋亡情况。结果 (1)行为学结果显示,在转棒实验中,与Sham组比较,PD组潜伏期缩短,掉落次数增加(37.20±5.27次/min);与PD组比较,PACAP组潜伏期延长,掉落次数减少(14.50±2.32次/min),PACAP治疗组的潜伏期和掉落次数随着PACAP浓度的增加而潜伏期可以更长,掉落次数可以更少(P<0.001)。(2)星形胶质细胞激活相关指标显示,PD组GFAP表达水平和黑质神经元的凋亡数量较Sham组显著升高;PACAP治疗组上述指标随着PACAP的浓度增加而显著减低(P<0.01)。(3)黑质神经炎症指标显示,与Sham组比较,PD组NF-κB含量及TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA显著升高,IκBα含量显著降低;PACAP治疗组NF-κB含量及TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA随着PACAP的浓度增加而减低,IκBα含量随着PACAP的浓度增加而升高(P<0.01)。(4) PD疾病特征指标显示,PD组谷氨酸和α-syn含量均较Sham组显著升高,3个PACAP组的上述指标较PD组显著降低;PACAP治疗组的上述指标随着PACAP的浓度增加而递减(P<0.01),以PD+PACAP_高浓度组效果最为明显。结论 PACAP在PD模型中具有神经保护作用,其机制可能为通过抑制星形胶质细胞激活来减轻神经炎症的发生。

垂体腺苷酸环化酶激活肽对局灶性脑缺血大鼠脑水肿的影响

目的探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP38)对大鼠水通道蛋白4(AQP4)表达的影响,以观察其减轻脑水肿的作用及其机制。方法健康雄性SD大鼠198只,随机分为假手术组(18只)、模型组(90只)和PACAP38组(90只),采用koizumi法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,利用干湿重法、免疫组织化学染色、RT-PCR分别检测脑组织含水量、AQP4及AQP4 mRNA的表达。结果与假手术组比较,模型组和PACAP38组脑组织含水量、梗死灶周围AQP4、AQP4 mRNA表达明显增加;与模型组比较,PACAP38组能显著减少脑组织含水量,减轻梗死灶周围AQP4、AQP4 mRNA表达。结论PACAP38对局灶性脑缺血大鼠具有减轻脑水肿作用,其作用机制可能与其抑制AQP4的表达有关。

垂体腺苷环化酶激活多肽抑制β淀粉样蛋白对Neuro-2a细胞神经毒性作用的机制

通过MTT方法检测细胞活性 ,同时采用激光共聚焦显微镜技术检测细胞内游离钙离子的瞬时运动 ,研究了垂体腺苷环化酶激活多肽 (pituitaryadenylatecyclaseactivatingpolypeptide 2 7,PACAP2 7)通过调节细胞内钙对抗淀粉样蛋白Aβ2 5 35引起Neuro 2a细胞神经毒性作用的可能机制。结果表明 ,PACAP在一定浓度范围内 (<0 1μmol/L)可提高Neuro 2a细胞增殖能力并对抗Aβ引起的神经毒性 ,此作用可以被PACAP受体竞争性拮抗剂PACAP6 2 7所抑制。 2 5 μmol/LAβ使细胞内钙离子缓慢上升 ,并有一个较长时间的平台期。 0 1μmol/L的PACAP使细胞内钙离子迅速升高后下降 ,10min后回到接近基线水平 ,伴有较长时间的不应期。用PACAP预处理细胞 10min后Aβ引起细胞内钙的慢上升不再出现。推测 ,PACAP受体激活引起瞬时内向钙离子运动 ,而后伴随一个较长时间的不应期 ,可能是一个消除凋亡或阻止凋亡启动的保护机制。

垂体腺苷酸环化酶激活肽减轻大鼠缺血性脑水肿作用的实验研究

目的 :研究垂体腺苷酸环化酶激活肽 (PACAP)在缺血性脑水肿中的作用及其可能的受体机制。方法 :采用大鼠四动脉结扎脑缺血模型 ,分别运用干湿重法和酶学法测定脑组织含水量及Na+ 、K+ 含量。结果 :大鼠四动脉结扎脑缺血 30min ,再灌流 1h ,脑组织含水量明显增加 ,Na+ 含量增高 ,而K+ 含量降低。缺血前经测脑室分别给予 1× 10 -9mol、1× 1110 mol及 1× 11-11mol的PACAP均能抑制脑组织含水量、Na+ 含量的增加和K+ 含量的降低。特异性PACAPⅠ型受体拮抗剂PACAP6 38能完全阻断PACAP的上述作用 ,而单纯给予PACAP6 38对脑缺血后脑组织含水量、Na+ 、K+ 含量无显著影响。结论 :外源性PACAP对缺血性脑水肿具有保护作用 ,该作用是由I型受体介导的。

垂体腺苷酸环化酶激活肽对家兔实验性动脉粥样硬化血管重塑的影响

为探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽对家兔动脉粥样硬化血管重塑的影响 ,将 6 0只新西兰雄性家兔随机等分为正常对照组、动脉粥样硬化组和垂体腺苷酸环化酶激活肽组 ,分别于实验的第 4、8和第 12周末随机处死每组家兔各 5～ 8只并取胸主动脉。在上述动脉条的头、中、尾部各截取约 0 .5cm长的组织作石蜡切片 ,苏木素—伊红染色 ,光镜下观察并用图像分析系统测量相关形态学参数。余下的动脉条用苏丹Ⅳ染色 ,作大体形态观察。结果发现 ,随时间延长 ,动脉粥样硬化组斑块面积逐渐增大 ,斑块检出率逐渐增加 (P <0 .0 5 ) ,且斑块多分布于头段 ,而中段、尾段依次减少。管腔面积在早期斑块形成时并无改变 ,晚期则明显缩小 (P <0 .0 5 )。垂体腺苷酸环化酶激活肽组斑块面积、斑块最大厚度均小于同期动脉粥样硬化组 ,而管腔面积则大于动脉粥样硬化组 (P <0 .0 5 )。

垂体腺苷酸环化酶激活肽基因的合成表达与活性研究

根据文献报道垂体腺苷酸环化酶激活肽 (pituitaryadenylatecyclaseactivatingpolypeptide,PACAP)的氨基酸序列 ,推导出其核苷酸序列并设计成部分互补的 6条寡核苷酸片段 ,利用DNA合成仪人工合成、纯化这 6条寡核苷酸片段 ,通过片段退火、连接、克隆及测序鉴定获得了PACAP基因 .将PACAP基因克隆至 pGEX 4T 3质粒中转化BL2 1进行表达分析 ,融合蛋白约占细胞总蛋白的 30 % ,其中部分为可溶性 ,部分以包涵体形式存在 .通过亲和层析纯化GST PACAP融合蛋白 ,该蛋白质能促进PC12细胞轴突生长及脊髓神经元存活 .

垂体腺苷酸环化酶激活肽减轻一氧化氮介导的谷氨酸神经毒作用

研究垂体腺苷酸环化酶激活肽 ( PACAP)是否通过作用于一氧化氮 ( NO)代谢途径 ,减轻谷氨酸的神经毒作用。取新生 SD大鼠海马 ,用 B2 7无血清培养基培养神经元 ;重氮化反应法测定 NO浓度 ,MTT法测定神经元存活率 ,PACAP能减少谷氨酸引起的海马神经元死亡 ;谷氨酸呈剂量依赖性地增加海马神经元培养液中 NO的含量 ,PACAP能不同程度地减少 NO的含量 ;分别给予 2 mmol/L L - Arg,1 0 0μmol/L SNP和 2 0 0 μmol/L SNAP处理后 ,海马神经元存活率明显下降 ,给予不同浓度的 PACAP( 1 0 -9,1 0 -11,1 0 -13mol/L)能增加神经元的存活率。上述结果提示 ,PACAP通过抑制 NO释放及其神经毒作用 ,减轻谷氨酸引起的海马神经元损害。

垂体腺苷酸环化酶激活肽基因合成表达和产物纯化与鉴定

为利用基因工程技术获得垂体腺苷酸环化酶激活肽 (pituitaryadenylatecyclaseactivatingpolypeptide ,PACAP) ,根据大肠杆菌的密码偏好性 ,设计并人工合成编码 38个氨基酸的PACAP基因 .克隆到表达载体pET 35b(+) ,构建重组质粒pET PACAP ,转化大肠杆菌BL2 1 (DE3)pLysS+ .实现纤维素结合域 (cellulosebindingdomain ,CBD)与PACAP融合蛋白的表达 ,并在两者之间引入 (凝血 )因子Ⅹa识别位点 (Ile Glu Gly Arg↓ ) .融合蛋白CBD PACAP经纤维素亲和层析纯化后 ,因子Ⅹa酶切释放PACAP .在因子Ⅹa识别位点前引入 7个氨基酸的柔性短肽 (Gly Thr Gly Gly Gly Ser Gly)明显提高了融合蛋白对因子Ⅹa的敏感性 .HPLC进一步纯化得到纯度大于 95 %PACAP多肽 .所得的PACAP多肽的Western印迹鉴定为阳性 ;激光飞行质谱测定分子量结果与理论值相符 .生物活性分析表明 ,所制备的PACAP具有促进胰腺癌细胞株SW 1

垂体腺苷酸环化酶激活肽对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤脑保护作用的研究

目的观察垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的脑保护作用。方法采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤(MCAO)模型,缺血前经侧脑室分别给予不同剂量的PACAP,脑缺血2 h/再灌注24 h,测定脑含水量、脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量。结果与NS组相比,PACAP各组脑含水量、MDA及NO含量均明显降低,SOD活性有不同程度的提高。结论PACAP对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤有明显的脑保护作用,中、高剂量组效果优于低剂量组,其机制可能与减轻脑水肿、清除自由基、抗脂质过氧化有关。

垂体腺苷酸环化酶激活肽的分布及其生物学功能

垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitaryadenylatecyclaseactivatingpolypeptide,PACAP),是一种新发现的神经肽,具有多种生物活性。本文主要就PACAP的分子结构和基因组成、组织器官分布及其生物学功能作一综述。

垂体腺苷酸环化酶激活肽减轻谷氨酸引起的大鼠海马神经元细胞内钙离子浓度升高的可能机理

目的 探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽 38(PACAP 38)稳定海马神经元细胞内钙离子浓度([Ca2 + ]i)作用的可能机理。方法 取新生SD大鼠海马 ,用B2 7无血清培养基培养神经元 ;经Fura 2 /AM标记后 ,共聚焦显微镜下测定 [Ca2 + ]i。结果PACAP 38(10pmol·L- 1)能抑制谷氨酸 (5 0 0 μmol·L- 1)所致海马神经元 [Ca2 + ]i 升高 ,而Rp型硫化环腺苷酸 (2 0 μmol·L- 1)或氯化白屈菜赤碱 (0 .1μmol·L- 1)能阻断PACAP 38的抑制作用。二丁基环腺苷酸 (0 .1～ 10 0 μmol·L- 1)和豆寇酰佛波醇乙酯(0 .0 1～ 10 μmol·L- 1)也能抑制谷氨酸引起的海马神经元 [Ca2 + ]i 升高。结论 PACAP 38减轻谷氨酸引起的海马神经元 [Ca2 + ]i

垂体腺苷酸环化酶激活肽的研究概况

垂体腺苷酸环化酶激活肽 (PACAP)及其受体存在于许多动物的下丘脑和垂体中 ,而且在肾上腺、睾丸、卵巢、肝脏、肾脏、胰腺、松果腺、心脏、脊椎、神经节、呼吸系统和消化系统等组织或系统中也存在 ,其中肾上腺含量最高 .在这些组织或系统中 ,通过Ca2 +、Na+、腺苷酸环化酶或磷酸肌醇等作用通路 ,PACAP发挥神经递质 /调质、或神经营养因子等生物学功能 .