垂体腺苷酸环化酶激活肽及其受体研究进展

垂体腺苷酸环化酶激活肽是首先从绵羊下丘脑分离出来的具有多种生物活性的神经肽 ,它广泛分布于中枢神经系统、周围神经系统及非神经组织中 ,通过与PACAP受体结合 ,激活腺苷酸环化酶 ,利用第二信号系统 ,作为神经递质、神经调质。

垂体腺苷酸环化酶激活肽减轻大鼠缺血性脑水肿作用的实验研究

目的 :研究垂体腺苷酸环化酶激活肽 (PACAP)在缺血性脑水肿中的作用及其可能的受体机制。方法 :采用大鼠四动脉结扎脑缺血模型 ,分别运用干湿重法和酶学法测定脑组织含水量及Na+ 、K+ 含量。结果 :大鼠四动脉结扎脑缺血 30min ,再灌流 1h ,脑组织含水量明显增加 ,Na+ 含量增高 ,而K+ 含量降低。缺血前经测脑室分别给予 1× 10 -9mol、1× 1110 mol及 1× 11-11mol的PACAP均能抑制脑组织含水量、Na+ 含量的增加和K+ 含量的降低。特异性PACAPⅠ型受体拮抗剂PACAP6 38能完全阻断PACAP的上述作用 ,而单纯给予PACAP6 38对脑缺血后脑组织含水量、Na+ 、K+ 含量无显著影响。结论 :外源性PACAP对缺血性脑水肿具有保护作用 ,该作用是由I型受体介导的。

垂体腺苷酸环化酶激活肽对家兔实验性动脉粥样硬化血管重塑的影响

为探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽对家兔动脉粥样硬化血管重塑的影响 ,将 6 0只新西兰雄性家兔随机等分为正常对照组、动脉粥样硬化组和垂体腺苷酸环化酶激活肽组 ,分别于实验的第 4、8和第 12周末随机处死每组家兔各 5～ 8只并取胸主动脉。在上述动脉条的头、中、尾部各截取约 0 .5cm长的组织作石蜡切片 ,苏木素—伊红染色 ,光镜下观察并用图像分析系统测量相关形态学参数。余下的动脉条用苏丹Ⅳ染色 ,作大体形态观察。结果发现 ,随时间延长 ,动脉粥样硬化组斑块面积逐渐增大 ,斑块检出率逐渐增加 (P <0 .0 5 ) ,且斑块多分布于头段 ,而中段、尾段依次减少。管腔面积在早期斑块形成时并无改变 ,晚期则明显缩小 (P <0 .0 5 )。垂体腺苷酸环化酶激活肽组斑块面积、斑块最大厚度均小于同期动脉粥样硬化组 ,而管腔面积则大于动脉粥样硬化组 (P <0 .0 5 )。

垂体腺苷酸环化酶激活肽基因的合成表达与活性研究

根据文献报道垂体腺苷酸环化酶激活肽 (pituitaryadenylatecyclaseactivatingpolypeptide,PACAP)的氨基酸序列 ,推导出其核苷酸序列并设计成部分互补的 6条寡核苷酸片段 ,利用DNA合成仪人工合成、纯化这 6条寡核苷酸片段 ,通过片段退火、连接、克隆及测序鉴定获得了PACAP基因 .将PACAP基因克隆至 pGEX 4T 3质粒中转化BL2 1进行表达分析 ,融合蛋白约占细胞总蛋白的 30 % ,其中部分为可溶性 ,部分以包涵体形式存在 .通过亲和层析纯化GST PACAP融合蛋白 ,该蛋白质能促进PC12细胞轴突生长及脊髓神经元存活 .

垂体腺苷酸环化酶激活肽减轻一氧化氮介导的谷氨酸神经毒作用

研究垂体腺苷酸环化酶激活肽 ( PACAP)是否通过作用于一氧化氮 ( NO)代谢途径 ,减轻谷氨酸的神经毒作用。取新生 SD大鼠海马 ,用 B2 7无血清培养基培养神经元 ;重氮化反应法测定 NO浓度 ,MTT法测定神经元存活率 ,PACAP能减少谷氨酸引起的海马神经元死亡 ;谷氨酸呈剂量依赖性地增加海马神经元培养液中 NO的含量 ,PACAP能不同程度地减少 NO的含量 ;分别给予 2 mmol/L L - Arg,1 0 0μmol/L SNP和 2 0 0 μmol/L SNAP处理后 ,海马神经元存活率明显下降 ,给予不同浓度的 PACAP( 1 0 -9,1 0 -11,1 0 -13mol/L)能增加神经元的存活率。上述结果提示 ,PACAP通过抑制 NO释放及其神经毒作用 ,减轻谷氨酸引起的海马神经元损害。

垂体腺苷酸环化酶激活肽基因合成表达和产物纯化与鉴定

为利用基因工程技术获得垂体腺苷酸环化酶激活肽 (pituitaryadenylatecyclaseactivatingpolypeptide ,PACAP) ,根据大肠杆菌的密码偏好性 ,设计并人工合成编码 38个氨基酸的PACAP基因 .克隆到表达载体pET 35b(+) ,构建重组质粒pET PACAP ,转化大肠杆菌BL2 1 (DE3)pLysS+ .实现纤维素结合域 (cellulosebindingdomain ,CBD)与PACAP融合蛋白的表达 ,并在两者之间引入 (凝血 )因子Ⅹa识别位点 (Ile Glu Gly Arg↓ ) .融合蛋白CBD PACAP经纤维素亲和层析纯化后 ,因子Ⅹa酶切释放PACAP .在因子Ⅹa识别位点前引入 7个氨基酸的柔性短肽 (Gly Thr Gly Gly Gly Ser Gly)明显提高了融合蛋白对因子Ⅹa的敏感性 .HPLC进一步纯化得到纯度大于 95 %PACAP多肽 .所得的PACAP多肽的Western印迹鉴定为阳性 ;激光飞行质谱测定分子量结果与理论值相符 .生物活性分析表明 ,所制备的PACAP具有促进胰腺癌细胞株SW 1

垂体腺苷酸环化酶激活肽对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤脑保护作用的研究

目的观察垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的脑保护作用。方法采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤(MCAO)模型,缺血前经侧脑室分别给予不同剂量的PACAP,脑缺血2 h/再灌注24 h,测定脑含水量、脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量。结果与NS组相比,PACAP各组脑含水量、MDA及NO含量均明显降低,SOD活性有不同程度的提高。结论PACAP对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤有明显的脑保护作用,中、高剂量组效果优于低剂量组,其机制可能与减轻脑水肿、清除自由基、抗脂质过氧化有关。

垂体腺苷酸环化酶激活肽的分布及其生物学功能

垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitaryadenylatecyclaseactivatingpolypeptide,PACAP),是一种新发现的神经肽,具有多种生物活性。本文主要就PACAP的分子结构和基因组成、组织器官分布及其生物学功能作一综述。

垂体腺苷酸环化酶激活肽减轻谷氨酸引起的大鼠海马神经元细胞内钙离子浓度升高的可能机理

目的 探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽 38(PACAP 38)稳定海马神经元细胞内钙离子浓度([Ca2 + ]i)作用的可能机理。方法 取新生SD大鼠海马 ,用B2 7无血清培养基培养神经元 ;经Fura 2 /AM标记后 ,共聚焦显微镜下测定 [Ca2 + ]i。结果PACAP 38(10pmol·L- 1)能抑制谷氨酸 (5 0 0 μmol·L- 1)所致海马神经元 [Ca2 + ]i 升高 ,而Rp型硫化环腺苷酸 (2 0 μmol·L- 1)或氯化白屈菜赤碱 (0 .1μmol·L- 1)能阻断PACAP 38的抑制作用。二丁基环腺苷酸 (0 .1～ 10 0 μmol·L- 1)和豆寇酰佛波醇乙酯(0 .0 1～ 10 μmol·L- 1)也能抑制谷氨酸引起的海马神经元 [Ca2 + ]i 升高。结论 PACAP 38减轻谷氨酸引起的海马神经元 [Ca2 + ]i

垂体腺苷酸环化酶激活肽对动脉粥样硬化形成过程中脂质过氧化的影响

目的 探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽 (PACAP)对家兔实验性动脉粥样硬化 (AS)形成过程中脂质过氧化的影响。方法 80只雄性新西兰家兔 ,随机分为 3组 :(1)对照组 (C组 ) :喂饲普通颗粒兔饲料 ;(2 )AS模型组 :每只兔每日喂饲含胆固醇 1 5g的颗粒兔饲料 ;(3)PACAP组 (P组 ) :喂饲与AS组同样的饲料 ,另从耳缘静脉注射PACAP。分别于实验的 0、4、8、12周末记录兔体重 ,同时从兔耳中央动脉取空腹血 ,测定丙二醛 (MDA)含量 :并取若干兔的主动脉标本作苏丹Ⅳ染色 ,测量斑块面积。结果 (1)AS组及P组血清MDA含量均显著高于C组 ;而P组显著低于AS组。 (2 ) 4周末时P组斑块面积显著小于AS组。结论 PACAP具有抗脂质过氧化作用 。

垂体腺苷酸环化酶激活肽的分布及其生物学功能

垂体腺苷酸环化酶激活肽 (PituitaryAdenylateCyclaseActivitingPoly peptide ,PACAP) ,是一种新发现的神经肽 ,具有多种生物活性。主要综述PACAP的分子结构和基因组成、组织器官分布及其生物学功能。

实验性脑损伤大鼠血浆及肾组织垂体腺苷酸环化酶激活肽水平的变化

目的研究脑损伤大鼠血浆及肾组织匀浆中垂体腺苷酸环化酶激活肽含量变化及急性肾损害中的作用。方法提高建立大鼠脑损伤模型,用RIA方法测定血浆及肾组织匀浆中垂体腺苷酸环化酶激活肽含量。结果大鼠脑外伤组血浆垂体腺苷酸环化酶激活肽含量明显高于对照组,而肾组织匀浆中垂体腺苷酸环化酶激活肽含量明显低于对照组。结论脑外伤后的急性肾损害与血浆和肾组织匀浆中PACAP含量变化有关,PACAP在脑外伤后急性肾损害过程中所起作用有待进一步研究。

垂体腺苷酸环化酶激活肽对大鼠脑缺血再灌注损伤后缺血皮层p-JNK表达及神经细胞凋亡的影响

目的研究活化的c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后的表达和垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)的影响、抑制细胞凋亡的机制。方法制成局灶性脑缺血再灌注损伤模型。72只大鼠随机分成假手术组、缺血再灌注对照组、PACAP治疗组。缺血开始时治疗组静脉注射PACAP 2.5μg。再灌注后各时间点处死取脑,进行HE染色、p-JNK免疫组化染色和TUNEL法检测神经元凋亡。结果不同时间点PACAP组神经细胞缺血性损伤较缺血再灌注对照组减轻。缺血再灌注对照组p-JNK分别在2、48h成2次表达高峰,凋亡细胞较多;PACAP组再灌注后p-JNK表达下降,凋亡细胞减少。结论PACAP对局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用,可抑制细胞凋亡,部分依赖于其可下调p-JNK表达。

垂体腺苷酸环化酶激活肽对脑缺血-再灌注大鼠核因子κB和肿瘤坏死因子α表达的影响

目的观察垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)对局灶性脑缺血-再灌注大鼠的脑保护作用及对核因子κBp65(NF-κBp65)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响。方法取健康雄性SD大鼠72只,采用随机数字法分为假手术组、缺血-再灌注组、PACAP组,每组大鼠24只,每组再分为再灌注12h和24h组,每时间点12只大鼠。采用线栓法建立大脑中动脉缺血模型,于缺血后2h进行再灌注。PACAP组于再灌注30min内,由尾静脉注射(5×10-7)%的PACAP,(5×10-9)g/kg,假手术组和缺血-再灌注组,用等体积(0.1ml/kg)的等渗盐水代替PACAP。再灌注12、24h取脑,光镜下观察脑组织的结构;并采用Western印迹法检测NF-κBp65的表达,免疫组化法检测TNF-α的表达。结果①PACAP组大鼠光镜下脑组织细胞损伤程度与缺血-再灌注组相比明显减轻。②PACAP组再灌注12、24h,TNF-α阳性细胞的表达分别为(20.0±2.5)、(30.7±1.3)个/高倍视野,缺血-再灌注组分别为(40.8±3.7)、(60.7±3.5)个/高倍视野,与假手术组的(2.8±0.8)、(3.0±0.7)个/高倍视野的表达比较,差异均有统计学意义(P<0.01),缺血-再灌注组与PACAP组比较,差异亦有统计学意义(P<0.01)。③再灌注12和24h,PACAP组NF-κBp65表达的灰度值为57±7、49±8,缺血-再灌注组为90±14、74±10,与假手术组的41±17、41±10比较,差异均有统计学意义(P<0.01),缺血-再灌注组与PACAP组比较差异亦有统计学意义(P<0.01)。结论PACAP能抑制大鼠局灶性脑缺血-再灌注后TNF-α、NF-κBp65的表达,这可能是其脑保护作用机制之一。

垂体腺苷酸环化酶激活肽对大鼠脑缺血再灌注损伤后缺血皮层p-ERK及c-Fos表达的影响

目的观察大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后活化的胞外信号调节激酶和c-Fos的表达变化及垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)对其表达的影响。方法采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,72只大鼠随机分成假手术组、缺血再灌注对照组、缺血再灌注PACAP治疗组,大脑中动脉阻塞2h分别再灌注2、12、24、48h。再灌注后各时间点进行神经功能学评分后处死大鼠,免疫组织化学法分别检测3组大鼠p-ERK及c-Fos表达水平。结果缺血再灌注不同时间点PACAP组大鼠神经功能学评分较缺血再灌注对照组减低。脑缺血诱导JNK活化,缺血再灌注对照组缺血侧皮层p-ERK 2h达高峰后渐下降;c-Fos分别在2、24h表达高峰。与之相比,PACAP组各时间点p-ERK表达升高,24、48h c-Fos表达下降。结论PACAP对局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用,部分依赖于其上调了磷酸化EPK的表达,并下调了延迟表达的c-Fos基因。

垂体腺苷酸环化酶激活肽的研究概况

垂体腺苷酸环化酶激活肽 (PACAP)及其受体存在于许多动物的下丘脑和垂体中 ,而且在肾上腺、睾丸、卵巢、肝脏、肾脏、胰腺、松果腺、心脏、脊椎、神经节、呼吸系统和消化系统等组织或系统中也存在 ,其中肾上腺含量最高 .在这些组织或系统中 ,通过Ca2 +、Na+、腺苷酸环化酶或磷酸肌醇等作用通路 ,PACAP发挥神经递质 /调质、或神经营养因子等生物学功能 .

垂体腺苷酸环化酶激活肽的生物学效应及其与偏头痛之间的相关性

垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitary adenylate cyclaseactivating polypeptide,PACAP)是由ADCYAP1基因编码的,属于血管活性肠肽(VIP)-胰高血糖素-促胰液素家族。PACAP由ADCYAP1基因编码,形成一个包含175个氨基酸的前肽。经过剪切,PACAP表达为两种形式的蛋白,分别是由27个氨基酸组成的PACAP-27和由38个氨基酸组成的PACAP-38。最初,PACAP是Miyata等[1]人在1989年从羊下丘脑中发现的一种神经肽。

血垂体腺苷酸环化酶激活肽38表达与冠心病患者经皮冠状动脉介入术后需再次血运重建的相关性研究

目的分析冠心病患者行经皮冠状动脉介入(PCI)术后血垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)-38的表达及与需要再次血运重建的相关性。方法抽取焦作市第二人民医院心内科二区于2016年1月至2017年6月PCI术后因胸痛复查的冠心病患者114例作为研究对象,基于复查结果分为再次血运重建组40例和非再次血运重建组74例,比较两组基线资料、心脏标记物、血流动力学指标和血PACAP-38 mRNA表达。多因素logistic分析再次血运重建的风险和保护因素,ROC曲线计算血PACAP-38 mRNA的预测价值。结果与非再次血运重建组比较,再次血运重建组患者的高敏肌钙蛋白I(hs-cTnI)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)和脂蛋白a[Lp(a)]表达显著升高,而射血分数(EF)、每搏输出量(SV)、左室缩短分数(FS)和局部射血分数(REF)显著降低(均为P<0.05)。再次血运重建组患者的PACAP-38 mRNA相对表达显著低于非再次血运重建组(439.85±85.56比625.55±75.21,t=4.896,P=0.0006)。Killip分级越高,冠心病患者PCI术后血PACAP-38 mRNA表达越低(P<0.05)。完全血运重建患者的血PACAP-38 mRNA表达显著低于不完全血运重建患者(357.52±72.31比454.52±86.35,t=3.073,P=0.0106)。Pearson相关性分析显示,再次血运重建患者的PACAP-38 mRNA表达与hs-cTnI、CK、LDH、TG、TC、Lp(a)、纤维蛋白原和N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)呈显著负相关性,而与EF、SV和REF呈显著正相关性(均为P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,hs-cTnI、CK、LDH、冠状动脉病变血管数、Lp(a)、NT-proBNP、左室舒张末内径、吸烟和高血压均是冠心病患者PCI术后需要再次血运重建的独立预测危险因素,而PACAP-38、REF、EF和SV是独立预测保护因素(均为P<0.01)。ROC曲线显示,PACAP-38 mRNA表达对冠心病患者PCI术后再次血运重建和是否完全血运重建具有预测价值。结论冠心病患者PCI术后血PACAP-38 mRNA<443.50时有再次血运重建风险。

垂体腺苷酸环化酶激活肽对胃肠道分泌与运动的影响

垂体腺苷酸环化酶激活肽 (PACAP)是近年来发现的一种具有多种生物活性的神经肽。它广泛分布于中枢和外周神经系统 ,以及非神经组织内 ,它不仅是一种新的下丘脑促垂体激素 ,而且还是一种新的神经递质和神经调质。此外 ,它在某些类型细胞的旁分泌和自分泌调节中也发挥作用。本文着重介绍PACAP在胃肠道中的分布 。

垂体腺苷酸环化酶激活肽基因的合成及pIRES1-PACAP表达载体的构建

根据文献报道的垂体腺苷酸环化酶激活肽 ( pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP)基因序列和信号肽基因序列 ,设计 10条单链寡核苷酸片段 ,通过 5次 PCR扩增获得 PACAP基因片段 ,同时两端设有 Sm a 和 Xba 酶切位点 ,酶切后将其克隆至 p IRES1- neo质粒中 ,经 PCR、酶切和测序鉴定 ,证明已获得 PACAP基因并构建了 p IRES1-