商丘地区猪圆环2型与3型病毒混合感染情况监测与控制

为了解商丘地区圆环2型与圆环3型病毒感染情况,2022年在屠宰环节分季度采集脾脏和肺脏样品,使用商品化试剂盒集中检测,以探究圆环2型与圆环3型感染情况及二者混合感染情况。结果显示,本地屠宰企业生猪圆环2型阳性率达到57.08%,圆环3型阳性率6.88%,二者混合感染率6.46%,圆环3型阳性样品中圆环2型阳性比例为91.18%,春夏季节阳性率高于秋冬季节,母猪阳性率高于育肥猪。根据监测结果,商丘地区圆环2型感染率高,带毒生产情况存在,圆环3型阳性率较低但威胁持续存在。通过对混合感染养殖场的追溯,有针对性地采取措施进行防控,兼顾预防和治疗,全面提高养殖场的生物安全水平,减少圆环病毒的发生和传播。

慢性乙型病毒性肝炎患者歧视感知水平与应对方式的相关性

目的:分析慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者歧视感知水平与应对方式的相关性。方法:选取2018年8月至2022年6月该院收治的120例CHB患者进行前瞻性研究。采用慢性乙肝病毒感染者歧视测量量表评估患者歧视感知水平,采用简易应对方式问卷(SCSQ)评定患者应对方式,根据SCSQ评分将其分为消极组和积极组,并采用Pearson相关性分析CHB患者歧视感知与应对方式的相关性。结果:消极组的性别、居住地、婚姻状态、职业状态、受教育程度、医疗付费方式、年龄、病程与积极组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);消极组的歧视测量量表评分高于积极组,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示,CHB患者慢性乙肝病毒感染者歧视测量量表评分与SCSQ消极应对评分呈正相关(r>0,P<0.05),与SCSQ积极应对评分呈负相关(r<0,P<0.05)。结论:CHB患者倾向于采用消极应对方式,其歧视感知水平与消极应对呈正相关,而与积极应对呈负相关。

一株c基因型牛副流感病毒3型病毒的分离鉴定

从黑龙江省某牛场当中患有呼吸系统疾病的病牛鼻拭子中分离到一株病毒,该病毒在MDBK细胞上能够产生典型的病变。经免疫荧光鉴定表明成功分离到一株牛副流感病毒3型,命名为HLJ1。将病毒的M基因与GenBank中已发表BPIV3毒株的M基因进行同源性比较及系统进化分析,结果表明HLJ1与BPIV3c型参考毒株NX49的同源性最高为99.7%,因此HLJ1分离株属于c基因型BPIV3。我们的结果将为牛副流感病毒3型检测试剂盒及疫苗的研发工作奠定基础。

我国登革2型/4型病毒株嵌合E基因免疫原性的研究

目的构建含有我国登革2型/4型病毒株嵌合E基因片段的真核表达质粒,观察重组质粒DNA的免疫原性,为登革多价疫苗的研究提供依据。方法首先将包含我国登革2型病毒43株E蛋白I/II抗原区和4型病毒B5株E蛋白III抗原区的嵌合E基因片段克隆至真核表达载体pcDNA3.1中,通过测序确定嵌合基因序列的正确性。然后将重组质粒以肌肉注射途径,免疫Balb/C小鼠。通过间接免疫荧光法对采集的鼠血清中的病毒特异抗体进行检测。结果构建的含有我国登革2型/4型病毒株嵌合E基因的真核表达质粒pcDNA-D2/4,经序列测定表明,导入的嵌合E基因片段的序列是正确的。将重组质粒DNA免疫小鼠,在初次免疫后的第3周,可同时检测到针对登革2型和4型病毒的特异荧光。结论所构建的含有不同血清型的我国登革病毒株嵌合E基因片段的真核重组质粒,可诱导小鼠同时产生针对两个血清型病毒的特异抗体,该研究为新型登革多价疫苗的研制提供了依据。

一株禽腺病毒4型病毒分离与鉴定

为了对某肉鸡场暴发的疾病进行确诊,对送检的病死鸡进行解剖、细菌分离和荧光PCR检测,并进一步进行鸡胚半数致死量(ELD50)、动物回归试验和组织灭活疫苗研制。结果显示:病死鸡剖检可见肝脏肿大、出血,心包胶冻样积液,肾脏肿大,病料未分离到细菌。PCR检测禽腺病毒4型(FAV4)阳性,用处理液进行病毒分离,成功分离到一株FAV4病毒,扩增所分离病毒hexon基因部分序列,测序结果与GenBank上的FAV4hexon基因(登录号:EF554403)相似性为100%。分离病毒盲传3代,测定的ELD50为104.5/0.2mL,以0.2mL·只^(-1)的剂量胸部肌肉注射30日龄SPF鸡5只,4 d内鸡只全部死亡,病变与临床剖检病死鸡相似。取病死鸡肝脏制备组织灭活疫苗,免疫SPF鸡,能抵抗所分离FAV4病毒攻击。研究成功分离鉴定出一株FAV4病毒,并进行初步研究,丰富了毒种库,为FAV4病毒疫苗研制奠定了基础。

干扰素联合苦参素治疗慢性乙型病毒性肝炎的临床观察

目的:探讨干扰素联合苦参素治疗慢性乙型病毒肝炎(CHB)的疗效。方法:78例CHB临床随机分为治疗组(干扰素联合苦参素组)、对照组(干扰素组)。对照组采用干扰素α1b300万U,1次/d,1月后改为每周3次,疗程6个月。治疗组在对照组基础上加用苦参素氯化钠注射液100m1,1月后改为苦参素胶囊200mg,口服3次/d,疗程6个月。观察两组的乙肝病毒标志物的变化。结果:治疗组治疗后HBVDNA阴转率、HbeAg阴转率及抗Hbe阳转率均高于对照组,但它们之间差异无显著性(P>0.05)。随访12月,治疗组HBVDNA阴转率、HbeAg阴转率及抗Hbe阳转率均高于对照组两组之间有显著性差异(P<0.05)。结论:治疗组较能更有效的治疗慢性乙型病毒肝炎,且具有更好的远期疗效。治疗组HBVDNA阳转反跳率低于对照组(P<0.05)。

系统型病毒的检测与清除

计算机病毒是一种可以在计算机系统中潜伏、复制、传染和进行破坏的程序,是一种人为制造的程序。计算机病毒的出现给安全使用计算机工作带来了极大的危害。计算机病毒按存在方式可分为系统型和文件型两种:文件型病毒主要寄居在可执行的。

云南登革4型病毒的鉴定及NS1和NS2a基因序列分析

目的对1989年8月分离自云南省盈江县蚊虫的2株登革病毒进行生物学及分子特征的鉴定,明确这两株病毒的血清型及基因型。方法蚊虫用BHK21细胞和乳鼠法分离病毒,用间接免疫荧光试验、RT-PCR等方法进行鉴定,并对这两株病毒的分子生物学特征进行分析。结果从白纹伊蚊和达勒姆阿蚊中各分离到一株病毒,分别命名为M110和M113,这两株病毒对BHK21细胞能产生明显的细胞病变,脑内接种乳鼠4d左右导致乳鼠死亡。该病毒经血凝、血凝抑制和间接免疫荧光试验提示为黄病毒。分别用黄病毒属特异引物、登革4型病毒NS1和NS2a基因片段特异引物进行RT-PCR扩增、序列测定,证实为登革4型病毒。NS1和NS2a基因序列片段分析表明,M110和M113的NS1核苷酸序列与登革4型病毒基因Ⅰ型的H241株(Y19176)同源性最高,分别为99%、98%;NS2a基因片段与H241的核苷酸序列的同源性分别为96.5%、97.1%。结论从盈江县蚊虫分离到的M110和M113病毒为登革4型病毒基因Ⅰ型,表明云南省西部边境地区在20世纪80年代发生过登革4型病毒的流行。

白纹伊蚊经滞育卵传递登革Ⅱ型病毒的实验研究

目的 证明登革Ⅱ型病毒能否在白纹伊蚊滞育卵内存活并传至子代。方法 采用逆转录 -聚合酶链反应检测病毒 ,C6 36细胞培养分离病毒。结果 能在白纹伊蚊滞育卵内检测到病毒 ,且滞育卵解除滞育后 ,子 1代幼虫和成蚊中均检测到病毒 ,总的批阳性率为 9.6 % ,子代最低感染率为 1∶2 94.3 ;第一个生殖营养周环子代未分离到病毒 ;第二、三生殖营养周环子代间最低感染率差异无显著性 ( χ2 =0 .0 1,P >0 .0 5 )。结论 试验证明登革Ⅱ型病毒能在白纹伊蚊滞育卵内存活并传至子代。

儿童急性暂时性髋关节滑膜炎与柯萨奇B组3型病毒感染的相关性研究

目的 :探讨儿童急性暂时性髋关节炎与柯萨奇B组 3型病毒的相关性。方法 :采用ELISA法检测 10 0例急性暂时性髋关节滑膜炎患儿血清及髋关节液中柯萨奇B组病毒 (CoXB)、腺病毒 (AdV )、巨细胞病毒 (CMV)、呼吸道合胞病毒 (RSV)抗体 ,其中 79例作病毒血清免疫学检测 ,2 1例作髋关节病毒学检测 ,怀疑柯萨奇病毒感染者 ,随机抽样 9例作髋关节液中的病毒分离。结果 :急性暂时性髋关节滑膜炎患儿 79例血清免疫学检测查出Coxb lgM阳性 11例 ,AdV lgM阳性 14例 ,CMV lgM阳性 8例 ,RSV lgM阳性 8例 ,3 8例阴性。 2 1例髋关节液中查出CoXB阳性 7例 ,AdV阳性 5例 ,CMV阳性 2例 ,7例阴性。同时在血液和髋关节液中查出CoXB阳性 1例 ,AdV阳性 2例。随机抽样 9例作病毒分离培养 ,1例分离出柯萨奇病毒 ,采用中和试验证实为柯萨奇B组 3型病毒 ,并经电子显微镜检查确认。结论 :柯萨奇B组 3型病毒具有感染儿童导致急性暂时性髋关节滑膜炎的可能性。

登革Ⅱ型病毒经白纹伊蚊滞育卵的传递

采用C6 36细胞培养分离病毒的方法检测感染登革Ⅱ型病毒的白纹伊蚊Aedesalbopictus滞育卵孵化的F1 代蚊虫感染率 ,从第一个生殖营养周期子代蚊虫中未分离到病毒 ,第二与第三生殖营养周期子代蚊虫最低感染率没有显著性差异 (χ2 =0 0 1,P >0 0 5 ) ,感染子代的批阳性率为 9.1% ,最低感染率为 1∶330 ;间接免疫荧光检测结果表明感染登革Ⅱ型病毒的白纹伊蚊滞育卵孵化的子代成蚊能通过叮咬将登革病毒传播给敏感乳鼠。这些研究结果表明登革病毒能在媒介滞育卵内存活并传至子代 。

甲型病毒性肝炎流行预警方法研究

目的建立一种简单、敏感、有效的甲肝疫情预警方法,早期发现甲肝流行的迹象,尽早采取有效的公共卫生措施,保障人民群众的身体健康。方法参考国内外传染病预警的一些方法,建立4种预警模型:比数图法3年模型、比数图法5年模型、控制图法3年模型、控制图法5年模型,分别计算各预警模型取不同预警界值时的敏感性和特异性,借助评价工具ROC曲线,结合甲肝发病率的分布类型,优选出最合适的预警模型及其预警界值。结果比数图法和控制图法均是5年模型的功效优于3年模型:无论是3年模型还是5年模型,控制图法的功效均高于比数图法;湖南省的甲肝发病率为非正态分布;控制图法5年模型取第65百分位数为预警界值时约登指数最大。结论控制图法5年模型是预警甲肝流行的有效方法,其最适预警界值为第65百分位数。

云南中缅边境登革1型病毒全基因组序列特征研究

目的阐明云南省中缅边境地区2013-2015年14株登革1型病毒(DENV-1)全基因组序列特征。方法采用C6/36细胞培养法分离病毒,用RT-PCR法扩增新分离DENV-1的全基因组序列,采用ClastalX1.83和MEGA6等生物信息学软件进行核苷酸和推导氨基酸序列同源性及系统进化分析。结果从登革热患者血清中分离到14株DENV-1,其中瑞丽市9株,临沧市3株,昆明市2株。经RT-PCR和序列测定,获得这14株DENV-1的全基因组序列(10 735nt),其开放读码框(95-10 271)编码3 392个氨基酸。系统进化和同源性分析表明,13株为基因I型(G-I),其中瑞丽和临沧本地病例7株,缅甸输入性病例6株;1株为G-III(昆明的印度输入性病例)。云南13株G-I可分为2个进化群,但均与缅甸、泰国等东南亚流行株具有较近的亲缘关系。云南13株G-I的E基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为97.02%-100%和98.78%-100%,它们与6株东南亚G-I参考株的核苷酸和氨基酸同源性分别为96.53%-99.53%和97.33%-100%,与DENV-1原型株US_Hawaii核苷酸和氨基酸同源性分别为93.76%-94.45%和95.86%-96.91%。所有云南株和东南亚参考株与US_Hawaii株在结构蛋白或非结构蛋白的氨基酸位点分别存在44和150个位点差异。结论云南中缅边境地区2013-2015年流行的DENV-1均为G-I,并具有基因多样性特点但均为来自缅甸的多个传播来源。

白蚊伊蚊经卵传递登革2型病毒的实验研究

目的证明白蚊伊蚊亲代能够经卵传递登革2型病毒给子代,并且在传递过程中病毒毒力呈逐渐增强趋势。方法采用套式PCR分批检测感染雌蚊的子一代至子四代卵内登革病毒结合C6/36细胞培养分离病毒及TCID50法滴定病毒滴度。结果白蚊伊蚊能经卵传递DEN-2,至少可传四代以上;且在传代中病毒毒力有增强的趋势。结论实验证明白蚊伊蚊对登革2型病毒有较大的媒介效能,且在维持登革病毒的自然循环中起重要作用。

登革1型和2型病毒混合感染样本的一步法实时荧光定量PCR检测方法的建立

本文旨在建立检测登革1型和2型病毒的一步法实时荧光定量PCR方法,为登革热的诊断和预测提供技术支撑。依据登革1型和2型病毒的保守区序列设计引物和探针,建立了同时检测两个血清型登革病毒的一步法实时荧光定量PCR方法。特异性实验结果显示,该方法可检测出登1型和2型病毒,与登革3型、4型病毒、黄热病毒、流感H3N2病毒均无交叉反应,具有较好的特异性。对登革1型和登革2型的灵敏度均为102copies/μL。应用该方法,可检测出登革1型和2型病毒混合感染C6/36后不同时间点病毒复制动态。在两个血清型登革病毒混合感染C6/36细胞72~120 h登革2型病毒的拷贝数与单独感染时登革2型病毒的拷贝数相比显著下降。上述研究证实建立的一步法实时荧光定量PCR方法具有特异性好灵敏度高、重复性好等特点,能够用于登革型和2型病毒混合感染样本的检测。

我国登革3型病毒广西80-2株基因组全序列分析

对我国登革 3型病毒 80 2株基因组进行全序列测定 ,为了解其基因组结构与功能的关系提供依据 .根据登革 3型病毒H87株的序列设计并合成引物 ,应用RT PCR和RACE法 ,对 80 2株基因组RNA进行扩增、克隆测序后获得我国登革 3型病毒广西株基因组序列 .该株病毒基因组全长10 696nt ,不含poly(A)尾 ,4种碱基数分别为A :3 4 3 7,C :2 2 15,G :2 773 ,U :2 2 71.包含一个读码框架 ,自 95至 10 2 67位 ,共 10 170个碱基 ,编码 3 3 90个氨基酸 ,5′和 3′非编码区长度分别为 94nt和4 3 2nt.与H 87株比较 ,核苷酸和氨基酸序列同源性均在 99%以上 ,有 2 8个碱基发生改变 ,其中 2 6个碱基突变发生在读码框架内 ,碱基转换 18个 ,颠换 10个 ;碱基突变引起 14个氨基酸的改变 .80 2株与H87株病毒的基因组全序列同源性高 ,变异度小 .

登革Ⅱ型病毒在白纹伊蚊体内分布的研究

利用蚊虫连续石蜡切片免疫组织化学技术 ,对登革Ⅱ型病毒 (DEN 2 )感染白纹伊蚊Aedesalbopictus后的散播时间、程度及组织器官的感染顺序进行监测 ,以了解DEN 2在媒介白纹伊蚊体内的分布规律。结果表明 :大剂量感染登革Ⅱ型病毒后 ,在蚊虫消化道的主要部位以及大多数组织器官包括神经及内分泌系统在内 ,如涎腺、脑、神经节等亦检测到病毒抗原。登革Ⅱ型病毒一旦感染并逸出中肠会迅速侵染其它组织。从各组织感染率的高低推断 ,病毒逸出中肠后通过血淋巴传播到其它组织的顺序通常为 :前肠、涎腺、咽部神经节、脑及食管下神经节。

亚甲基蓝光化学法对全血中人免疫缺陷Ⅰ型病毒的灭活研究

目的 观察不同浓度的亚甲基蓝 (methyleneblue ,MB)与可见光联合作用对全血中人免疫缺陷Ⅰ型病毒(HIV 1)的灭活能力。方法 以HIV 1为试验病毒 ,通过MB与可见光 ( 64 0nm)单独及联合作用于含病毒的模拟全血 ,采用MT4细胞感染法评价病毒的灭活效果。结果 当全血中MB含量分别为 5、10、15 μmol/L时 ,以 40 0 0 0Lux强度的可见光分别照射 3 0、2 0、10min ,可完全杀灭试验滴度为 10 5 78TCID50 HIV 1病毒。结论 亚甲基蓝光化学法可高效灭活全血中HIV 1病毒。

牛副流感3型病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒和牛支原体多重PCR检测方法的建立

为建立检测牛副流感3型病毒(BPIV3)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛支原体(M.bovis)的多重PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的BPIV3的HN基因、IBRV的g C基因、BVDV的5'UTR和M.bovis的oppD/F基因序列设计特异性引物,通过优化反应条件建立了一种可以同时检测以上4种病原的多重PCR方法。结果显示,该方法对牛呼吸道合胞体病毒、小反刍兽疫病毒、牛布鲁氏菌、羊布鲁氏菌、牛源多杀巴氏杆菌A型和B型无特异性扩增,对BPIV3和BVDV的cDNA最低检测量分别为100 pg和1 ng,对IBRV和M.bovis的DNA最低检测量分别为10 pg和100 pg,具有较高的特异性和灵敏性。对临床33份鼻拭子样品和12份牛肺样品的检测结果与已发表文献中PCR方法的检测结果一致。本研究建立的多重PCR检测方法可同时对BPIV3、IBRV、BVDV和M.bovis进行检测,为这4种病原的诊断和检测提供了一种实用、便捷的方法。

两株登革2型病毒感染BALBC小鼠特异性抗体产生动态的比较

目的 :两株登革 2型病毒 (DengueType 2virus ,DV2 )初次和再次感染BALB C小鼠建立动物感染模型 ,对其产生特异性抗体进行动态观察 ,探讨感染DV2 NGC株和DV2 临床分离株 (B株 )引起的体液免疫应答的差异。方法 :两株DV2 毒株模拟自然感染途径 ,经皮下多点注射建立BALB C小鼠感染动物模型 ;采用间接ELISA法检测感染动物血浆中抗DV2 特异性IgM类抗体、IgG类抗体 ,并同时分离病毒观察病毒血症期的变化。结果 :不同DV2 毒株初次、再次感染BALB C小鼠后诱导特异性Ig产生的类别存在差异 ,且DV2 B株再次感染动物后表现为病毒血症期相对延长。结论 :两株DV2 诱导特异性抗体产生的动态与病毒血症期不同。