抑制AKT通路对埃克替尼耐药的非小细胞肺癌细胞迁移能力的影响

目的探讨抑制AKT通路对埃克替尼耐药的非小细胞肺癌细胞迁移能力的影响。方法采取持续暴露并逐渐增加药物浓度方法筛选建立耐药细胞系,MTT法检测细胞增殖能力,Transwell法检测细胞迁移能力,Western blotting检测蛋白表达。结果耐药细胞PC9/IcoR迁移能力高于PC9细胞(P<0.05);PC9/IcoR细胞表皮生长因子受体及AKT磷酸化水平明显高于PC9细胞(P<0.05);LY294002抑制AKT活化后PC9/IcoR细胞迁移能力明显下降(P<0.05)。结论抑制AKT通路可以抑制埃克替尼耐药的非小细胞肺癌细胞迁移。

千金藤素通过调控p53信号介导的自噬逆转人非小细胞肺癌细胞的埃克替尼耐药性

目的探讨千金藤素对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的埃克替尼耐药性的影响及可能的作用机制。方法采用埃克替尼(Icotinib)浓度递增的方式诱导人NSCLC PC-9细胞耐药建立埃克替尼耐药细胞PC-9/Icotinib resistance(IR)。MTT法筛选千金藤素的实验浓度,并检测千金藤素对PC-9/IR细胞埃克替尼敏感性的影响;取对数生长期PC-9/IR耐药细胞,分为PC-9/IR组(PC-9/IR细胞)、千金藤素组(PC-9/IR细胞+8μmol/L千金藤素)、埃克替尼组(PC-9/IR细胞+20μmol/L埃克替尼)、千金藤素+埃克替尼组(PC-9/IR细胞+20μmol/L埃克替尼+8μmol/L千金藤素)、3-MA组(PC-9/IR细胞+5 mmol/L的3-MA+20μmol/L埃克替尼+8μmol/L千金藤素)、PFT-α组(PC-9/IR细胞+40μmol/L的p53抑制剂Pifithrin-α+20μmol/L埃克替尼+8μmol/L千金藤素),流式细胞术检测细胞凋亡;MDC染色检测细胞自噬;透射电镜观察细胞超微结构变化;Western blot检测自噬相关蛋白表达[p53、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及其磷酸化蛋白(p-mTOR)、自噬相关蛋白Beclin-1、微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)、微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3-Ⅰ)]。结果千金藤素能增加PC-9/IR细胞的埃克替尼敏感性,与PC-9/IR组相比,单用千金藤素和埃克替尼对PC-9/IR细胞的凋亡、自噬无显著影响(P>0.05);与千金藤素组、埃克替尼组相比,千金藤素+埃克替尼组细胞凋亡率、绿色荧光的平均光密度、p53、Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达显著增加(P<0.05),p-mTOR/mTOR的比值显著降低(P<0.05),自噬小体的数量增加;3-MA和PFT-α能明显抑制自噬和凋亡,逆转千金藤素对PC-9/IR细胞的埃克替尼耐药逆转作用。结论千金藤素可能通过激活p53介导的自噬,逆转PC-9/IR细胞的埃克替尼耐药性。