Niemann-Pick C1蛋白在埃博拉病毒感染中的作用及其靶向药物研究进展

埃博拉病毒属丝状病毒科,具有高传染性,能引起人类和灵长类动物出现严重出血热等症状,病死率高达90%。Niemann-Pick C1(NPC1)蛋白是埃博拉病毒感染过程中表达于宿主细胞内体膜上的一个重要受体,其与埃博拉病毒被组织蛋白酶裂解的糖蛋白(GP)的相互作用是病毒感染宿主的关键环节,介导病毒囊膜与内体膜的融合,进而将病毒基因组释放到宿主细胞。近年来,将NPC1蛋白作为广谱抗丝状病毒药物靶点研发的小分子抑制剂、单克隆抗体和基因治疗药物均有突破性进展。本文介绍了NPC1的结构及其在埃博拉病毒感染中的作用,并对靶向NPC1的小分子抑制剂、单克隆抗体药物和基因治疗药物的研究现状进行总结。

利用邻近标记-质谱联用技术筛选埃博拉病毒相关宿主因子

构建VP35与生物素连接酶TurboID融合蛋白,利用埃博拉病毒最小基因组系统(Ebola virus minigenome system, EBOV MG),在细胞中模拟病毒的生命周期和病毒包涵体(virus inlusion body, VIB)的形成过程,通过添加外源生物素,标记VP35相互作用蛋白。定量质谱丰度差异分析筛选出537个潜在的VP35互作蛋白,Gene Ontology(GO)分析发现其中包括大量与RNA结合相关蛋白。从中选取EIF4B和ZNF598进行初步验证,二者均与VP35存在相互作用,且敲低上述基因可显著抑制EBOV转录复制病毒样颗粒(trVLP)的复制效率。结果证实,邻近标记-质谱联用技术可以用于病毒-宿主相互作用蛋白挖掘,为病毒致病机制研究及抗病毒靶点挖掘提供重要手段。

右端不连续免疫对一类埃博拉病毒模型的影响

研究了一类右端不连续的埃博拉病毒微分系统,利用微分包含理论证明了模型地方病平衡点和无病平衡点的存在唯一性.得到了模型的种群再生数R0,并分析了各平衡点在有限时间内的全局渐近稳定性.文末借助MATLAB数值仿真验证了理论的准确性.

内含埃博拉病毒GP基因序列假病毒粒子的构建及应用

目的:构建内含埃博拉病毒(EBOV) GP基因序列的假病毒粒子,针对EBOV GP基因建立实时荧光定量PCR检测方法。方法:人工合成GP基因序列,克隆至慢病毒包装载体pGWLV-pseudovirus中,转化DH5α感受态细胞,筛选得到阳性克隆pGWLV-GP质粒。将重组质粒转染293T细胞,培养48 h后进行除菌,纯化后获得高纯度假病毒,通过RT-PCR鉴定该假病毒粒子含有EBOV GP基因。通过荧光定量qPCR对假病毒颗粒进行计数后,利用本研究所获得的假病毒颗粒制备用于EBOV核酸检测的标准品。结果:建立了基于EBOV GP基因的Taqman荧光定量PCR检测方法。结论:该方法所用标准品模拟了真实病毒粒子的结构,无生物传染性,经检测均匀性和稳定性良好,可作为EBOV核酸检测的阳性标准质控品,实现对核酸检测的全程监控。

土贝母苷可有效抑制新冠病毒和埃博拉病毒复制

近日,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所重要人兽共患病与烈性外来病创新团队在新冠病毒和埃博拉病毒入侵细胞机制及其抗病毒药物发现取得重要进展,发现土贝母苷这一植物提取物,可有效抑制新冠病毒和泛丝状病毒复制,发挥抗病毒作用。相关研究成果发表在《自然·通讯(Nature Communications)》上。

一类时滞SEIDR埃博拉病毒传播模型

研究了一类时滞埃博拉病毒传播模型。模型假设感染者死亡后仍然具有一定的传染能力,并且考虑了感染者染病后到死亡所经历的时间周期时滞。首先,以感染者染病后到死亡所经历的时间周期时滞为分岔参数,分析了模型的局部渐近稳定性,计算出模型局部渐近稳定和产生Hopf分岔的时滞关键值。进而借助中心流形法讨论了Hopf分岔的性质。最后利用仿真示例验证了理论结果的正确性。

埃博拉假病毒突变体感染性及靶向抗体中和作用评价

目的:利用埃博拉假病毒(EBOV)报告系统,体外评价埃博拉病毒突变体对4种细胞系的相对感染力及3株单抗对突变体的中和能力。方法:构建表达埃博拉假病毒及其突变体GP蛋白的重组质粒GP-pcDNA3.1,与含有萤火虫荧光素酶报告基因的HIV骨架载体pSG3.ΔEnv.CMV.Fluc共转染HEK293T细胞获得假病毒上清。利用Western blot法及HIV p24 ELISA抗原定量试剂盒对假病毒进行鉴定及定量,采用等量的假病毒感染HEK293T、Huh7、A549及THP-1细胞,36 h后,裂解细胞测荧光素酶活性(RLU),计算突变体与母本的相对感染力。将mAb114、ADI-15946、rEBOV-520与EBOV及其突变体假病毒预孵育1 h,将假病毒上清和抗体混合液感染HEK293T细胞,36 h后测RLU值,计算抑制率。结果:相对于母本,所有突变体感染细胞的能力均有不同程度增强。单抗mAb114、ADI-15946能有效中和母本及14株突变体,rEBOV-520对N107D-P330S-G480D中和作用减弱。结论:体外实验证明14株突变体入侵靶细胞能力增强。3株中和抗体对突变体中和作用良好,为应对EBOV突变引发的疫情提供了一定参考。

抗埃博拉病毒药物开发研究进展

埃博拉病毒(Ebola virus)感染引起烈性传染病,即埃博拉出血热,病死率在25%~90%。埃博拉疫情暴发主要集中在非洲地区,目前没有有效的治疗和预防措施,因此急需有效的抗埃博拉药物应用到临床治疗。目前,多家研究机构利用多种药物开发策略筛选抗埃博拉病毒感染的候选药物。已有一部分抗埃博拉药物进入了临床实验研究阶段,但大部分的药物研究仍处在普通细胞实验或动物实验水平。本文从埃博拉分子结构、病毒进入细胞感染方式、抗埃博拉药物研究模型和抗埃博拉药物等方面进行综述,以期望为相关研究提供参考。

埃博拉病毒病研究进展

埃博拉病毒病(Ebola virus disease,EVD)是1976年首次在刚果民主共和国埃博拉河附近发生的一种由埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)引起的人兽共患传染病,该病是以全身性病毒复制、免疫抑制、异常炎症反应、大量体液和电解质流失以及高病死率为特征的一种疾病。EVD的暴发通常是源于单一的感染事件,随后通过直接接触受感染的体液或被污染的污染物进行人际传播。EVD诊断需要临床症状和实验室检测相结合,实验室检测通常采用实时荧光定量PCR检测病毒RNA,或基于免疫分析的快速诊断技术检测病毒抗原。本文对EVD的分类学、流行病学及检测技术进行了综述。

内含埃博拉病毒NP基因序列假病毒粒子的构建及应用

目的:构建内含埃博拉病毒(EBOV) NP基因序列的假病毒粒子,建立EBOV Taqman实时荧光定量PCR检测方法。方法:对埃博拉病毒的NP基因序列进行分析,分析基因是否包含重复序列,复杂二级结构以及高GC含量等;根据序列分析结果,合成NP全基因序列,并将NP基因的序列克隆至慢病毒包装载体pGWLV-pseudovirus中,转化DH5α感受态细胞,筛选得到阳性克隆pGWLV-NP质粒。将重组质粒转染293T 细胞,培养48 h后进行除菌,纯化后获得高纯度假病毒,通过RT-PCR鉴定该假病毒粒子含有EBOV NP基因。通过荧光定量qPCR对假病毒颗粒进行计数后,利用本研究所获得的假病毒颗粒制备用于EBOV核酸检测的标准品。结果:建立了基于EBOV NP基因的Taqman荧光定量PCR检测方法。本研究建立的基于包含NP基因的EBOV假病毒核酸cDNA的Taqman荧光定量PCR检测方法的Ct值与核酸cDNA标准品1 × 109~1 × 101个/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数可达到0.99。结论:该方法所用标准品模拟了真实病毒粒子的结构,无生物传染性,经检测均匀性和稳定性良好,可作为EBOV核酸检测的阳性标准质控品,实现对核酸检测的全程监控。

科学家发现内质网分子伴侣调控埃博拉病毒复制新机制

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所与国外高校合作,阐明了内质网分子伴侣通过内质网膜上的E3泛素连接酶RNF185调控埃博拉病毒囊膜糖蛋白合成的新机制,该研究成果发表在《自然通讯》上。

科学家发现内质网分子伴侣调控埃博拉病毒复制新机制

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所与国外高校合作,阐明了内质网分子伴侣通过内质网膜上的E3泛素连接酶RNF185调控埃博拉病毒囊膜糖蛋白合成的新机制,该研究成果发表在《自然通讯》上。

从埃博拉出血热到埃博拉病毒病:更新认识、科学救治

埃博拉病毒病(Ebola virus disease,EVD)在非洲流行已近40年,2014年3月开始的在西非三国大暴发流行是最严重的1次,截至2015年1月14日西非三国确诊病例为13 427例,其中塞拉利昂和几内亚病死率为41.03%(4 226/10 300)。同时大量病例的积累也丰富了我们对EVD的认识。中国人民解放军援利医疗队在利比里亚埃博拉治疗中心(Ebola Treatment Center,ETC)工作2个月,对EVD有了感性认识,发现目前治疗存在诸多困难,提出了病情轻重程度的分型标准及以疾病进展速度为依据分为"快速进展型"和"平稳型"的观点。后者有利于预后判断和及时施治。结合文献资料对未来防治EVD提出几点建议:在高流行国家建立具备临床检验实验室的长久性ETC,加强病理研究,提高床旁快速检验能力,加强生命支持,研制特殊专用设备,改进个人防护装备及研发无害、高效消毒剂等。

赴利比里亚抗击埃博拉病毒病军人急性应激反应特点

目的探讨赴利比里亚抗击埃博拉病毒病军人急性应激反应特点。方法采用军人急性应激反应量表(acute stress response scale for armymen,ASRSA),对中国援利医疗队130名军人进行团体心理测评,分析赴利比里亚抗击埃博拉病毒病军人急性应激反应特点。结果 1女性的认知改变、情绪反应、行为变化、生理反应、工作效率、总反应指数维度分显著高于男性(P<0.05)。2抗埃军人急性应激反应得分在认知改变、行为变化、生理反应维度和总反应指数不同军龄组间差异有统计学意义(P<0.05),呈现随军龄增高逐渐增高的发展趋势。3军官情绪反应、行为变化维度分显著高于战士(P<0.05)。4抗埃军人急性应激反应得分呈现明显的学历组间差异(P<0.05),随专科、本科和研究生呈现倒"V"型的发展趋势:本科组认知改变和行为变化维度得分显著高于研究生组(P<0.05)和专科及以下学历组(P<0.05)。5护士认知改变和行为变化得分显著高于医生(P<0.05);护士认知改变、行为变化和总反应指数得分显著高于其他人员(P<0.05)。结论援利医疗队军人急性应激反应表现出明显的性别、军龄、层次、文化程度和人员类别特点。

5例埃博拉病毒病患者的临床特征分析

目的分析5例埃博拉病毒病(Ebola virus disease,EVD)确诊患者的诊治情况,为更好地防治EVD提供科学依据。方法 2014年12月5日至2015年1月17日在利比里亚中国埃博拉治疗中心(Ebola Treatment Center,ETC)收治5例EVD确诊患者,对其流行病学资料、症状、体征、实验室检查及治疗转归情况进行分析。结果本次确诊的5例患者,其中3例为家庭聚集性发病;有3例患者首次埃博拉病毒核酸检测为阴性,第2次复检为阳性;临床表现以发热、乏力、呕吐、腹泻等为主,少有出血相关症状及体征;通过尽早采取退热、补液等对症、支持治疗,3例患者康复出院,2例死亡。结论对有明确密切接触史但首次埃博拉核酸检测阴性的患者,必须于72 h后复检;治疗上目前仍以对症支持治疗为主,治疗的重点是纠正水、电解质紊乱,维持内环境稳定,预防并发症的发生。

138名赴利比里亚抗击埃博拉病毒病军人不同任务阶段正负性情绪变化特点

目的探讨赴利比里亚抗击埃博拉病毒病军人不同任务阶段正负性情绪变化特点。方法采用正负性情绪量表(PANAS),对援利医疗队138名队员进行4个阶段的团体心理测评,分析其情绪变化特点。结果 1正性情绪得分呈显著阶段差异(P<0.01),负性情绪得分阶段差异不明显(P>0.05)。各阶段正性情绪得分均显著高于负性情绪(P<0.01)。2女性正性、负性情绪得分均呈显著的阶段差异(P<0.01,P<0.05),男性正性情绪得分呈显著的阶段差异(P<0.05)。男性集结阶段负性情绪得分显著低于女性(P<0.01)。3除医生外,其余人员正性情绪得分呈显著的阶段差异(P<0.05);各类人员集训阶段正性情绪得分差异显著(P<0.05)。4军官正性、负性情绪得分和战士负性情绪得分均存在显著的阶段差异(P<0.01,P<0.05)。在集结和集训阶段,军官负性情绪得分显著高于战士(P<0.01)。结论赴利比里亚抗击埃博拉病毒病军人情绪反应以正性为主,正负性情绪呈现显著的阶段和人群差异。

一步法MGB荧光定量RT-PCR检测埃博拉病毒扎伊尔亚型和苏丹亚型方法的建立

目的为了建立一种快速准确的检测埃博拉病毒(EBOV)亚型的方法。方法本研究根据GenBank中公布的EBOV NP基因序列,设计引物和MGB探针,通过优化反应条件,建立了一种检测EBOV扎伊尔亚型和苏丹亚型的一步法MGB荧光定量RT-PCR方法。结果以体外转录的EBOV RNA为模板进行试验,该方法检测的灵敏度可以达到1.0×103个拷贝/μL,检测范围达到8个数量级为103～1010。建立的方法对马尔堡病毒(MARV)、登革病毒(DENV)、新疆出血热病毒(XHFV)、乙型脑炎病毒(JEV)、流感病毒(H1N1和H3N2)和猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)E基因组RNA无非特异性扩增。结论本文将荧光定量RT-PCR技术用于埃博拉病毒的定量检测中,并且建立了EBOV扎伊尔亚型和苏丹亚型荧光定量RT-PCR检测方法,具有一定的创新性。该方法的建立对加快我国EBOV诊断技术的研究具有重要推动作用。

督导护士在救治埃博拉病毒病患者的医护人员自身防护安全中的作用

目的探讨设置督导护士在救治埃博拉病毒病患者的临床一线医务人员个人防护中发挥的重要作用和意义。方法根据个人防护标准流程,设计中英文双语《援利医疗队穿PPE督查表》及《援利医疗队脱PPE督查表》。由督导护士对进出留观、治疗病房每位工作人员进行全程防护流程执行情况的督导提示和心理积极暗示,记录、归纳、总结杜绝的问题和心理状况,并对督导效果进行评价。结果 2015年1月16日至2015年3月19日期间共对进出中国埃博拉诊疗中心的留观、治疗病房临床一线的中国和利比里亚医务人员约3 000人次进行了督导,督导内容约126 000项,督导护士杜绝发生潜在问题共计1 532项。结论设置督导护士能有效确保救治埃博拉病毒病患者的临床一线医务人员的自身防护安全,确保实现医务人员"零感染"的目标。

国内外埃博拉病毒相关研究的对比分析

采用共词矩阵、聚类分析等数据挖掘方法分析了Pub Med和"中国知网"收录的埃博拉病毒相关文献进行分析。对比国内外埃博拉病毒领域研究现状,分析了该领域国内外研究热点、重要作者及其合作网络、国家与地区,提出了我国应持续关注埃博拉病毒研究、加强疫苗研究、加强与国外埃博拉病毒学者的合作等建议。

埃博拉病毒病患者围手术期医务人员感染防护方案探讨

西非地区暴发的埃博拉病毒病（Ebola virus dis-ease，EVD）是一次全球性的公共卫生灾难，截至2015年3月8日，仅西非3国已报道感染24247人，其中840名医护人员感染，死亡491名，医务人员的病死率达58．45％［1］。面对威胁，我们应全面地分析如何降低医护人员感染的风险，特别是针对外科高危操作环节。一方面，一定数量的 EVD 确诊患者，以及更多的可能、疑似患者，需要接受急诊外科手术治疗，如急腹症、妊娠、宫外孕、创伤、骨折等；另一方面，由于埃博拉病毒（Ebola virus，EBOV）的高传染性，穿刺、留置导管、气管插管、手术过程等操作给医务人员带来巨大风险［2－3］。目前，临床上尚缺乏相关的指南与实践，因此，建立正确处理 EVD 患者的围手术期流程，对减少医务人员感染风险极其重要。笔者结合本人在中国援助利比里亚埃博拉治疗中心（Ebola Treatment Center，ETC）的工作实践与经验，以及世界卫生组织（WHO）、美国疾病控制与预防中心（CDC）等发布的相关防控指南，探讨了医务人员在处理确诊或疑似 EVD 患者围手术期的相关操作流程、安全防护等方面的问题，为提高医务人员的预防控制水平提供参考。