埃可病毒25型新型中和实验方法的建立与应用

目的：建立一种新型的快速、高通量的埃可病毒25型（ECHO25）中和抗体检测方法,并初步评价其在ECHO25中和抗体筛选和血清流行病学调查中的应用价值。方法：应用免疫荧光方法筛选ECHO25高亲和性抗体并将其作为检测单抗,结合酶联免疫斑点检测技术（ELISPOT）建立ECHO25中和抗体检测方法;使用不同效价的血清评价该方法的准确性;采用所建立的中和方法对ECHO25单克隆抗体、临床血清样品进行检测。结果：建立了快速检测ECHO25中和抗体的Nt-ELISPOT方法,以ECHO25单克隆抗体5B9作为检测抗体;相比经典的中和实验方法 Nt-CPE,该方法可显著缩短检测时间（从5～7 d缩短至1 d以内）,检测结果具有较好的一致性;采用所建立的Nt-ELISPOT方法首次筛选获得3株对ECHO25具有较好中和能力的单克隆抗体;临床血清样品检测结果显示厦门地区可能存在ECHO25的流行。结论：该方法可以应用于中和抗体筛选和血清学的临床辅助诊断,为ECHO25的防治研究提供支持。

中国内地地区埃可病毒25型全基因组进化与重组分析

埃可病毒25型(Echovirus 25,E25)属于肠道病毒B组(Enterovirus B,EV⁃B),其在临床上可引起包括手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD),无菌性脑膜炎(Aseptic meningitis,AM),急性弛缓性麻痹(Acute flaccid paralysis,AFP)等在内的多种疾病。本文从全国HFMD监测网络选取了2009⁃2018年的18株E25毒株进行全基因组测序,将所得全长序列及GenBank上目前已发表的E25全长序列,以及EV⁃B组其它原型株全长序列分别构建全基因组和各编码区的亲缘进化树,并依据不同进化分支选取具有代表性的两株E25毒株进行重组分析。结果显示,中国内地地区E25在P1区具有更高的亲缘关系,而P2和P3区建树中各出现了两个分支,且在每个分支上,与多个EV⁃B组的原型株具有较高的核苷酸同源性,提示E25可能存在多种重组模式。此外所选的两株毒株均与EV⁃B的其它血清型流行株在P2及P3不同区域发生重组,且重组的模式不相同,因此中国内地地区的E25至少存在两种重组模式,并且致病力可能与基因的重组有关。通过本研究的分析,进一步的揭示中国内地地区E25的重组特征,对其进化变异及后续的预防与治疗具有重要意义。

云南省人类埃可病毒25型的基因特征分析

目的对云南省2006-2014年从急性弛缓型麻痹(acute flaccid paralysis,AFP)、手足口病(hand,foot and mouth disease)、病毒性脑炎(viral meningitis,VM)病例和健康儿童中分离到的15株人类埃可病毒25型(echovirus 25,E25)VP1区的基因特征进行分析。方法对云南省分离到的15株E25毒株进行血清中和试验和基因测序鉴定并对其完整VP1区基因进行逆转录聚合酶链反应及定型,构建其亲缘性进化树揭示其基因特征。结果2006-2014年云南15株E25毒株的基因进化分析表明,14株分布在基因型B分支2(lineage 2)的簇1(cluster 1),1株分布在簇2(cluster 2)。云南株与原型株JV-4株的核苷酸差异率为19.91%,氨基酸差异率为5.56%。结论基因进化分析结果表明15株云南E25病毒株为基因型B,其中14株为分支2的簇1,只有1株为簇2,簇1毒株是云南省主要流行株。

一株埃可病毒25型河南分离株全基因特征分析

埃可病毒25型（Echo25）是一种常见的肠道病毒,2008年河南省从病毒性脑炎患者脑脊液中分离出4株Echo25.鉴于目前除原型株JV-4外,尚未有Echo25全基因序列的测定,为了解其基因特征,本研究对其中1株进行全基因组序列测定.

2011~2018年埃可病毒25型山东分离株的分子流行病学特征

埃可病毒25型(Echovirus 25,E-25)感染所导致的疾病谱广泛,其侵入中枢神经系统后可引起严重的儿童感染性疾病无菌性脑膜炎(Aseptic meningitis,AM)。为探索E-25山东分离株分子流行病学特征,本研究对2011~2018年山东省环境生活污水标本和AM患儿脑脊液标本开展病毒分离,并对分离物进行核酸提取、VP1区序列扩增和型别鉴定,通过同源性比较和系统发生学分析,研究山东省及全球不同来源E-25分离株的亲缘进化关系。结果显示,2011~2018年环境污水分离株之间核苷酸同源性为87.7%~100.0%,与原型株(JV-4)核苷酸同源性为78.2%~80.9%,与无菌性脑膜炎病例分离株之间高度同源(核苷酸同源性为90.6%~98.2%)。通过系统发生学分析将全球的E-25分离株分为6个基因群A^F,山东分离株位于基因群A的两个不同的分支。本研究结果证实了环境监测对探索肠道病毒本地流行的重要作用,为E-25在山东省内的流行趋势及对其感染所致相关疾病的一级预防提供分子流行病学依据。

江苏省仪征市某小学一起埃可病毒引起的病毒性脑炎疫情的流行病学调查

调查2013年仪征市某小学一起病毒性脑炎疫情的病因及流行病学特征。共发生11例病例，集中在二年级3班和4班，班级罹患率为13．9％。发病时间为5—6月，年龄8～10岁，男女性别比为1．75：1。通过病原学检测确定为一起由埃可病毒25型引起的病毒性脑炎暴发疫情。提示学校在高发季节应加强监测，发现病例及早采取隔离等相关措施，以避免迅速蔓延。