人类埃柯病毒11型的基因特征分析

目的 对来自15个国家和中国2个省不同时间分离的82株人类埃柯病毒11型（ ECHO11）病毒VP1区基因特征进行分析.方法 按所查文献下载基因库中不同国家、不同时间发表的82株ECHO11病毒VP1区基因序列,用Mega软件计算不同毒株的核苷酸和氨基酸差异率,并构建系统发生树.结果 82株病毒可分为4个基因型（基因型A～D）,A和D基因型又各可分为7个亚型,B基因型单独由ECHO11病毒原型株Gregory组成,C基因型可分为3个亚型.不同毒株的核苷酸差异率为7.1% ～26.1%（氨基酸差异率为1.0%～13.0%）,不同基因型之间的核苷酸差异率为21.7% ～24.1%（氨基酸差异率6.0％～12.1%）.结论 不同基因型/亚型可以在同一个地区流行很长时间,同一时间内不同的基因型/亚型又可在不同的地区流行,具有明显的时间和地域流行特点.

福州地区无菌性脑膜炎病原——埃柯病毒30型分子流行病学分析

目的研究福州地区2004年无菌性脑膜炎病原——埃柯病毒30型(ECHO30)VP1区基因特征及其分子流行病学特点。方法选取福州地区2004年2株ECHO30(FJ-C2-04、FJ-C7-04),进行核糖核酸(RNA)提取和VP1区逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),测定和分析PCR产物的核苷酸序列。结果所测2株ECHO30VP1区基因全长都是876bp,翻译的氨基酸全长292aa。2株病毒VP1区核苷酸同源性为99.89%(仅相差1个bp),氨基酸序列完全相同。FJ-C2-04株VP1区基因全长和基因库(GenBank)上检索的相关ECHO30毒株比较,同源性为75.66%～97.49%。构建的ECHO30遗传进化树将已知的ECHO30划分为7个组,福州地区分离的ECHO30在第7组。结论ECHO30随着年代沿革不断衍化,福州地区分离株与早期分离株差异最大,与2004年浙江省分离株亲缘关系最近。2002～2004年在浙江、福州和2003年山东、江苏省存在引起无菌性脑膜炎的ECHO30的局部流行。

四川省什邡市健康儿童中埃柯病毒11型基因特征分析

目的分析四川省什邡市埃柯病毒E11型(echovirus 11,E11)的基因特征。方法对采集的健康儿童大便标本进行肠道病毒(enterovirus,EV)核酸检测、病毒分离和VP1区核苷酸全序列测序,根据进化树聚集确定E11基因型/基因亚型。结果69份标本中,EV核酸阳性32份,选取Ct值≤33的20份标本进行病毒分离,收获毒株14株,其中8株为E11。E11间VP1区核苷酸序列一致性≥99.4%,推导氨基酸序列一致性≥98.9%。进化树分析显示,什邡市E11与D5基因亚型参考株聚集在同一进化分支上。结论什邡市健康儿童中分离到的E11为D5基因亚型,与以前我国流行的基因型(A和C)不同。D5基因亚型E11可引起脑炎、脑膜炎和手足口病等疾病,需对其流行程度和持续时间开展监测。

人类埃柯病毒6的基因特征分析

目的对来自10个国家和中国4个省不同时间分离的69株ECHO6病毒VP1区基因特征进行分析。方法在GenBank,EMBL和DDBJ 3个基因库中进行BLASTN搜索,共得到69株ECHO6病毒基因可用,用Mega软件计算病毒基因同源性并构建基因进化树。结果 69株ECHO6病毒可分为4个基因型(基因型A～D),C基因型又可分为7个亚型,D基因型可分为8个亚型。不同毒株的核苷酸差异率为10.6%～24.5%(氨基酸差异率为0.8%～7.3%),不同基因型之间的核苷酸差异率为17.6%～22.4%(氨基酸差异率3.5%～6.6%)。结论 ECHO6不同基因型/亚型可以在同一个地区流行很长时间,同一时间内不同的基因型/亚型又可在不同的地区流行,具有明显的时间和地域流行特点。

四川省德阳市埃柯病毒6型的基因特征分析

目的了解四川省德阳市埃柯病毒6型(echovirus 6,E6)的基因特征。方法对2013年德阳市手足口病咽拭子标本的病毒分离阳性株进行核苷酸测序,获取的E6毒株序列与世界各地的E6参考株序列构建进化树并分析基因特征。结果4株E6分离株中,3株VP1区核苷酸序列一致,与另1株仅有1个核苷酸差异。同E6原型株(D'Amori)比较,核苷酸一致性≥77.0%。进化树分析显示,德阳市E6分离株为C2基因亚型,与部分山东分离株聚集在同一进化分支上。结论德阳市E6为C2基因亚型。其中3份标本来自同一地区的不同月份,提示E6在此地持续传播。

西藏自治区1999~2002年儿童埃柯病毒7型分子流行病学分析

目的研究西藏自治区1999-2002年≤5岁儿童埃柯病毒7型（ECHO7）VP1区编码基因特征及其分子流行病学特点。方法选取1999-2002年从西藏自治区〈15岁急性弛缓性麻庳（AFP）病例和≤5岁到儿童医院就诊儿童及部分健康儿童的659份粪便标本中分离的16株ECHO，病毒，进行核糖核酸（RNA）提取，VP1编码区逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR），PCR产物的核苷酸序列测定和分析。结果1999年的标本分离到9株，2000年分离到7株，VP1区核苷酸序列测定结果证实，此16株经血清中和试验定型的病毒全部为ECHO7病毒。其它年份未分离到ECHO7病毒。16株ECHO7病毒VP1区基因全长都是876bp，翻译的氨基酸全长292aa。所测16株ECHO7病毒序列之间同源性为86．73～100．00％。所测序列和ECHO，原型株——Wallace株相比，同源性为77．85％～78．99％；和引起致死性脑脊髓炎的ECHO7变异株——UMMC株相比，同源性为81．67％～83．79％。所构建的ECHO7病毒遗传进化树将已知的ECHO7病毒划分为4个基因型，西藏自治区分离的ECHO7病毒独自形成1个基因型（D基因型）。结论首次报告的西藏自治区1999、2000年儿童中流行的ECHO，病毒为一个新的基因型（D基因型）。16株D基因型病毒划分为2个基因亚型D1、D2。1999年流行的为D1；2000年流行的为D2。西藏自治区1999、2000年ECHO7流行为不同的病毒亚型引起。2001-2002年未发现ECHO7的持续流行。

无菌性脑膜炎暴发中病原学检测及埃柯30型肠道病毒的基因特征和分子进化分析

目的了解引起福建省泉州地区2011年无菌性脑膜炎暴发疫情的埃柯30型肠道病毒(echovirus 30,ECHO30)病原及基因特征,分析基因变异情况及进化来源。方法对泉州市2011年无菌性脑膜炎暴发疫情中的临床样本采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)方法进行肠道病毒通用型、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)核酸检测,随机选5份阳性样本进行肠道病毒VP1区核苷酸序列测定,将测序所得VP1序列用BLAST程序在GenBank上序列搜寻比对,确定其基因型,并通过构建进化树分析其遗传进化规律。结果 47份样本经rRT-PCR检测,有39份非EV71和Cox A16的其他肠道病毒核酸阳性,5份阳性样本的肠道病毒VP1区核苷酸序列均为876 bp,且同源性最高,均大于98.9%,最高仅相差一个核苷酸,与它们具有较高同源性的均是ECHO30。与本次分离株亲缘关系最近的一组ECHO30分别是2008年河南省和浙江省的分离株,与中国台湾2001年无菌性脑炎分离株以及印度2011年分离株则距离较远;原型株Bastianni和20世纪90年代美国分离株和本次分离到的ECHO30毒株距离最远。结论 2011年ECHO30在泉州地区发生一定程度的传播流行,并导致无菌性脑膜炎疫情的局部暴发流行,进化树分析表明本次分离株与国内近年ECHO30分离株亲缘关系较近,而与国外分离株则相对较远。

2002年云南非脊灰病毒测序定型和ECHO13病毒基因特征分析

目的对云南省2002年急性弛缓性麻痹(acute flaccid paralysis,AFP)病例中非脊灰病毒(non-polio,NPV)的带毒情况及埃柯病毒13型(echovirus 13,E13)的基因特征进行描述。方法按Obster等介绍的方法,对2002年云南省脊灰实验室分离到的21株NPV进行基因测序定型。结果 2002年云南省共报告267例AFP病例,共采集到<15岁AFP病例的合格粪便标本257份,257份便标本中共检测到NPV43株(带毒率为16.7%),其中脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)22株(阳性率8.6%),均为疫苗株,未发现脊灰野病毒;检测到非脊灰病毒(NPV)21株(阳性率8.2%)。21株EV中,12株为人类肠道病毒B组(HEV-B,11个血清型,其中3株为E13),3株为人类肠道病毒C组(HEV-C,1个血清型),未分离到HEV-A和HEV-D组病毒。结论 2002年云南省AFP病例中非脊灰病毒携带率不高。对3株常见的E13进行基因进化分析,表明E13病毒存在基因多样性特点(即存在不同的基因型)。

一起疑似病毒性脑膜炎暴发病原学检测分析

目的 2014年10月浙江省金华市荣光小学发生疑似病毒性脑膜炎暴发疫情,为及时查明病因,分析病原的分子特征并进行病原溯源。方法开展流行病学调查,采集患者脑脊液和咽拭子样本6份,检测人类肠道病毒(HEV)核酸和分离病毒,对HEV分离株VP1基因测序,进行同源性与进化分析。结果在全校328名学生中,发病7例,罹患率2.13%。患者年龄7~8岁;临床症状为发热、头痛、呕吐等;从5例患者6份样本中均检测到HEV核酸,其中3份脑脊液中分离到3株肠道病毒埃可30型(echovirus 30,E30);新分离株与E30原型株之间VP1区核苷酸和氨基酸同源性分别为81.8%和91.8%~92.1%;进化分析显示:新分离株位于E30 G基因亚型分支上,与2013年浙江省CHN/ZJ/RA-72/13株亲缘关系最近。结论引起2014年10月浙江省金华市荣光小学聚集性病毒性脑膜炎暴发疫情的病原为E30 G基因亚型病毒。

2003年云南省AFP病例中非脊灰病毒的测序定型和ECHO7病毒的基因特征分析

目的分析云南省2003年急性弛缓性麻痹(acute flaccid paralysis,AFP)病例中非脊灰病毒(non-polio,NPV)的带毒状况和埃柯病毒7型(echovirus 7,E7)的基因特征。方法按Obster等介绍的方法,对2003年云南省脊灰实验室分离到的18株NPV进行基因测序定型并对埃柯7病毒的基因特征进行分析。结果 2003年共采集到<15岁AFP病例粪便标本215份,在34株阳性标本(带毒率为15.8%)中,脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)16株(阳性率4.7%),均为疫苗株,未发现脊灰野病毒;非脊灰病毒(NPV)18株(阳性率8.4%),其中1株为人类肠道病毒A组(human enterovirus A,HEV-A,1个血清型),14株为人类肠道病毒B组(HEV-B,9个血清型,其中3株为埃柯病毒7型,echovirus7,E7),3株为人类肠道病毒C组(HEV-C,2个血清型),未分离到HEV-D组病毒。结论 2003年云南省AFP病例中非脊灰病毒携带率(8.4%)与往年持平,3株E7病毒存在基因多样性特点(即存在不同的基因型)。

浙江省临海市2004年病毒性脑膜炎暴发疫情的病原学及其分子特征研究

目的为确证2004年浙江省临海市病毒性脑膜炎暴发疫情的病因，分析病原的遗传变异及进化关系。方法采集患者脑脊液样本60份，采用RD和Hep-2细胞同时分离病毒，中和试验法鉴定病毒型别；对分离株VP1和VP4／VP2基因测序，进行同源性与进化分析。结果从60份脑脊液样本中分离到埃柯病毒30型（E30）19株，分离率为31．7％；对4株E30分离株VP1区核苷酸序列测定，其长度均为876个核苷酸（nt），编码292个氨基酸（aa）。临海分离株与E30原型株Bastianni在VP1区的nt和0n同源性分别为82．4％～84．1％和93．5％-94．2％；4株临海E30株之间nt和n。的同源性分别为87．1％。99．9％和97．9％～100．0％。临海分离株分成两类，同类病毒株间的差异很小，而两类病毒株间的差异很大，nt和aa的最大差异率分别为12．9％和2．1％。与临海E30株同源性最高的为2002--2003年浙江E30株。在VP1基因进化树上，临海E30株分别位于G和H基因亚型分支上，其中临海G基因株与2003年浙江、江苏和山东E30株位于同一进化分支，临海H基因株与2002年浙江诸暨株位于同一进化分支。VP4／VP2区进化分析结果与VPl区相似。结论2004年临海市病毒性脑膜炎暴发疫情由E30G和H不同基因亚型的E30流行株引起；临海E30株与2002—2003年浙江、江苏和山东E30株具有密切的亲缘关系；H基因亚型株推测为新的E30变异株，首先分离于2002年浙江省。

中西医结合治疗病毒性心肌炎40例

病毒性心肌炎为各种病毒引起的急性或慢性心肌炎症。其中以柯萨奇B组病毒和埃柯病毒最常见。病毒可直接亦可通过毒素作用侵犯心肌，细胞免疫与体液免疫在发病中起着重要作用。目前尚无特殊治疗措施。笔者自2000年以来运用中医结合治疗40例，取得了满意疗效，现报告如下：

2002～2004年浙江省无菌性脑膜炎暴发疫情的病原学研究

2002～2004年浙江省发生了无菌性脑膜炎暴发疫情,为了及时查明病因,分析病原的分子特征并进行病原溯源,我们采集患者脑脊液和粪便样本271份,用RD和Hep-2细胞同时分离病毒,对分离株VP1和VP4/VP2基因测序,进行同源性与进化分析。结果从271份样本中分离到埃柯病毒30型(E30)78株;对31株分离株VP1区核苷酸(nt)序列测定,其长度均为876nt,推导编码292个氨基酸(aa)。浙江E30株与原型株Bastianni在VP1区的nt和aa同源性分别为84.7%～86.3%和92.1%～94.2%;浙江E30株之间nt和aa的同源性分别为87.1%～99.4%和96.2%～100%。在VP1基因进化树上浙江E30株分别位于G和H基因亚型分支上,与浙江E30G亚型株亲缘关系最近的国内外毒株分别为2003年江苏、山东株和1999年乌克兰株;与浙江E30H亚型株亲缘关系最近的毒株为2008年韩国株。VP4/VP2区同源性与进化分析结果与VP1相似。结果表明2002～2004年浙江省无菌性脑膜炎暴发疫情由E30G和H二类不同基因亚型流行株引起;H基因亚型株推测为新的E30变异株,首先分离于2002年浙江省。

手足口病67例临床观察

手足口病,是由柯萨奇病毒A16型、肠道埃柯病毒71型等为病原,以手、足、口腔粘膜疱疹为主要临床特征,以儿童为主要发病人群的传染病。国外1957年首次报告,我国在1981年首次由上海报告。 1 临床资料 本组病例主要来自于门诊。在近23250例次病例中,手足口病67例,占门诊病例2.88％。发病时间集中于5～9月（即夏季中、下期及整个秋季为发病高峰）。发病年龄:【3岁33例,3～6岁26例,】