响应面法优化芽孢杆菌(Bacillussp.)A4的培养参数

为了提高芽孢杆菌(Bacillus sp.)A4的菌浓度,采用响应面法对其培养参数进行优化。以单因素实验为基础,筛选适合A4菌生长的碳源和氮源,采用Plackett-Burman实验方法确定影响菌浓度的显著因子;通过最陡爬坡实验逼近菌浓度最大值响应稳定区域;最后根据Box-Behnken实验确定显著因子的最佳水平,建立相关参数的回归方程,得到优化培养参数,并以摇瓶培养实验验证理论参数及方程的科学性。结果显示,最适碳源、氮源分别为玉米浆、大豆蛋白,且它们与温度均为显著影响A4菌浓度的因子,其最适水平分别为20.06 g·L^(-1)、13.29 g·L^(-1)、30.26℃。采用优化后的参数进行摇瓶培养(24 h),A4菌浓度达1.19×109CFU·mL^(-1),与理论计算值(1.24×109CFU·mL^(-1))无显著差异(P>0.05),但显著高于未优化菌株培养浓度(2.69×107CFU·mL^(-1))(P<0.01)。可见,运用响应面法优化芽孢杆菌A4的培养参数,能显著提高A4菌的菌浓度。

昆虫病原线虫固体培养系统中主要培养参数的优化

本文根据系统分析方法，利用正交旋转组合设计于固体培养系统中测定培养基的装样量、细菌培养时间、接线虫量和线虫培养时间对Ｓｔｅｉｎｅｒｎｅｍａｃａｒｐｏｃａｐｓａｅ和Ｈｅｔｅｒｏｒｈａｂｄｉｔｉｓｂａｃｔｅｒｉｏｐｈｏｒａ产量的综合影响，确定线虫的优化培养参数。在设计组合范围内，接线虫量对Ａ２４线虫产量的影响显著；培养基的量和细菌培养时间对线虫产量的影响不显著。对Ｈ０６线虫产量，接线虫量、培养时间呈显著的正影响；细菌培养时间则呈显著的负影响。此外，接线虫量与培养时间对两种线虫均产生明显的负交互效应。培养基的装样量对线虫产量无显著影响。通过频数分析，分别得到了Ａ２４和Ｈ０６线虫的培养参数的优化组合。即每克培养基的Ａ２４线虫产量大于５０×１０４时，培养参数的优化组合是培养基的量为每瓶５３．６～５８．８克，细菌培养时间２天左右，接线虫量约每克培养基４．６×１０３，培养时间为１６～１８天。同理，每克培养基的Ｈ０６线虫产量大于２５×１０４时，培养参数的优化组合分别为每瓶培养基的量６７．８～７４．２克，细菌培养时间１～２天，接线虫量为每克培养基５．５×１０２～２．２×１０３之间，培养时间２２～２４天。根据这些培养参数的优化?

红发夫酵母产虾青素培养参数的优化

在摇瓶中应用二次正交旋转组合设计 ,研究了不同培养时间、接种量、种子液培养时间和装液量对红发夫酵母PhaffiarhodozymaAs2 15 5 7培养生产虾青素的影响 ,并对培养参数进行了优化。结果表明 ,接种量、培养时间和装液量对P rhodozymaAs2 15 5 7虾青素的合成有显著影响 ,最佳虾青素合成参数为 :装液量每瓶 2 5mL( 2 5 0mL摇瓶 ) ,摇瓶培养时间84h ,接种量 12 % ,种子培养时间 5 4h。

光合细菌PS3培养参数的研究

为有效提高光合细菌PS3在工厂化生产中的生物量,对其主要培养参数进行了系统的研究。所涉及的培养参数包括：光源、光照度、溶解氧、培养基pH、盐度、接种浓度等。结果表明：PS3在厌氧条件下生长较好,而其最适接种浓度、光照度、光源、pH及盐度分别为10%、4 000 lx(钨丝灯)、6．5～7．0、5。

营养和培养参数对深层培养灵芝生产多糖的影响

研究了各种营养成分和培养参数（pH,温度,氮源可利用性,C∶N,搅拌速度,接种量）对在生物反应器可控条件下利用合成培养基深层培养灵芝生产多糖的影响。所生产的多糖大部分（通常80%以上）为胞外多糖（EPS）,分泌到培养液中,菌丝多糖（MAP）只占不到20%。在pH5.0条件下,总多糖（EPS和MAP）生产量和菌丝生长量最高。在28~34℃范围内,多糖产量在34℃培养条件下最高,并随着温度降低而下降。低氮条件下,菌丝生长较弱,多糖产量较低。多糖生产量（主要是胞外多糖）随着接种量的增加而提高,菌丝多糖的生产则相反。利用高效液相色谱（HPLC）凝胶层析法分离出两个胞外多糖组分,其洗脱时间为26.5和36.5 min,分子量分别为137和4.7 kDa;菌丝多糖有一个大的峰（40 min）和一个很小的峰（28 min）,其分子量分别为1.57和76.6 kDa。菌丝多糖的HPLC凝胶层析色谱和从灵芝子实体中提取的多糖相似。本研究所采用的各种培养条件下生产的多糖（EPS和MAP）具有可重复性的HPLC色谱。

响应面法优化赤红球菌HDRR2Y发酵培养参数

通过响应面法对硝化菌——赤红球菌(Rhodococcus ruber)HDRR2Y的发酵培养参数进行优化,以提高其活菌数。首先通过单因素实验筛选出赤红球菌HDRR2Y的最优碳、氮源,并采用Plackett-Burman实验得到影响活菌数的显著因素,然后进行响应面实验,经最陡爬坡及回归分析得出最佳培养参数,最后以摇瓶实验检验其合理性。结果显示,赤红球菌HDRR2Y的最优碳、氮源分别为乙酸钠和酵母膏+蛋白胨+氯化铵(1:1:1,质量比),显著影响活菌数的因素有碳、氮源及温度,经回归分析得到的最优培养参数为乙酸钠5.48 g/L、酵母膏+蛋白胨+氯化铵4.96 g/L、温度29.24℃、pH 7.0、转速200 r/min、MgSO_(4)0.2 g/L、KH_(2)PO_(4)0.5 g/L、NaCl 9 g/L、CaCl_(2)0.5 g/L、MnSO_(4)0.025 g/L、FeSO_(4)0.05 g/L、C_(5)H_(9)NO_(4)0.002 g/L、接种活菌数1×10^(4)cfu/mL、装液量40%(体积分数)、培养时间36 h。优化后的实际活菌数为1.54×10^(9)cfu/mL,远高于优化前的活菌数(1.8×10^(8)cfu/mL)(P<0.01)。因此,采用响应面法优化赤红球菌HDRR2Y的发酵培养参数能大幅提高其发酵活菌数,为硝化菌剂的工业化生产提供数据参考。

控制培养参数生产高唾液酸含量EPO

在细胞生物反应器中，采用含有5％FBS的α—MEM培养基对CHO—EPO细胞进行培养10～12天后，转为无血清CHO专用培养基．继续培养30～40天。在整个培养过程中，采用流加的方式连续培养，通过控制转数、容氧、pH值、温度、收获液中葡萄糖含量等培养参数，对收获液进行纯化后得到重组人红细胞生成素(rhEPO)原液，测定其唾液酸含量高达11mol／molEPO。

解磷菌PSBHY-3的发酵培养工艺参数优化

【目的】优化解磷菌PSBHY-3的培养参数,为水产养殖专用解磷菌的工业化发酵生产提供技术支持。【方法】通过单因素试验筛选适合解磷菌菌株PSBHY-3生长的发酵培养基碳氮源及其含量;采用Plackett-Burman试验筛选获得对菌量影响最显著的3个因子;通过最陡爬坡试验和Box-Behnken试验确定显著因子的最佳水平,建立主要培养参数的回归方程,得出优化后显著因子的最佳值及预测菌量;通过摇瓶试验验证,检验模型方程的准确性。【结果】菌株PSBHY-3的最佳碳源、氮源分别为可溶性淀粉和蛋白胨—酵母膏(1∶1)。以温度(A)、蛋白胨—酵母膏(B)和转速(C)为因素变量,菌株PSBHY-3的菌量为响应值,拟合得到二次多元回归方程Y=17.10-0.88A+0.55B+1.27C+0.24AB+0.34AC-0.24BC-3.57A^(2)-2.78B^(2)-6.13C^(2)。优化得到的解磷菌菌株PSBHY-3最佳发酵培养参数为:可溶性淀粉10.0 g/L,蛋白胨10.18 g/L,酵母膏10.18 g/L,氯化钠3.0 g/L,硫酸镁1.0 g/L,pH 7,培养温度35.54℃,转速164 r/min,接种量1%,装液量60%(V/V)。在最佳发酵培养条件下,菌量实际值为1.81×10^(9) CFU/mL,与理论菌量(1.72×10^(9) CFU/mL)间无显著差异(P>0.05),但显著高于优化前采用营养肉汤培养的菌量(1.90×10^(8) CFU/mL)(P<0.05)。【结论】通过单因素试验、Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和Box-Behnken试验等优化了菌株PSBHY-3的发酵参数,显著提高了目的菌量,回归方程预测准确,优化后的发酵参数可用于水产养殖专用解磷菌的工业化发酵生产。

体外批次培养法研究棉籽对培养液参数的影响

在体外批次培养试验中,在培养底物中添加棉籽使脂肪含量达4%～8%时有增加培养液中乙酸、丙酸、丁酸及总挥发性脂肪酸(VFA)浓度的趋势,但与对照组间差异不显著(P>0.05),使乙酸丙酸比值显著降低(P<0.05);有降低纤毛虫数量的趋势,其中8%棉籽组的纤毛虫数量显著降低(P<0.05);对培养液中pH值和NH3-N的影响无明显规律。

体外批次培养法研究棉籽对培养液参数的影响

在体外批次培养试验中,在培养底物中添加棉籽使脂肪含量达4%～8%时有增加培养液中乙酸、丙酸、丁酸及总挥发性脂肪酸浓度的趋势,但与对照组间差异不显著(P>0.05),使乙∶丙比值显著降低(P<0.05);有降低纤毛虫数量的趋势,其中8%脂肪组的纤毛虫数量显著降低(P<0.05);对培养液中pH值和NH3-N的影响无明显规律。

体外批次培养法研究胡麻籽对培养液参数的影响

在体外批次培养试验中,在培养底物中添加胡麻籽使脂肪含量达4%～8%时有增加培养液中乙酸、丙酸、丁酸及总VFA(挥发性脂肪酸)浓度的趋势,但与对照组间差异不显著(P>0.05),使乙酸与丙酸比值显著降低(P<0.05);有降低纤毛虫数量的趋势;对培养液中pH值和氨氮(NH3-N)浓度的影响无明显规律。

响应面法优化蓝藻溶藻菌CZBC1发酵培养工艺

【目的】优化蓝藻溶藻菌——蜡样芽孢杆菌CZBC1的发酵培养工艺,为蓝藻溶藻菌制剂的工业化发酵生产提供技术支持。【方法】通过单因素试验筛选适合蜡样芽孢杆菌CZBC1生长的最适碳源和氮源,在单因素试验的基础上,采用中心组合试验设计(CCD)确定关键因子的最佳数量水平,并以Desig-Expert 8.0.5进行回归分析,通过响应面分析获得CZBC1的最佳发酵培养工艺参数。【结果】蜡样芽孢杆菌CZBC1的最佳碳源、氮源分别为麸皮+糖蜜(1∶1)和酵母膏。以麸皮+糖蜜用量(A)、酵母膏用量(B)、pH(C)、培养时间(D)为因素变量,CZBC1芽孢数(lgN)为响应值,拟合得到二次多元回归方程为lgN=8.5019-0.2222A+0.0998B-0.1292C+0.3801D+0.2194AB-0.1133AC+0.1350AD+0.2049BC-0.0651BD+0.0638CD-0.1260A^2-0.3152B^2-0.0380C^2-0.2533D^2,其中,碳源(麸皮+糖蜜)用量与氮源(酵母膏)用量的交互作用、碳源用量与pH的交互作用、碳源用量与培养时间的交互作用、氮源用量与pH的交互作用对CZBC1芽孢数的影响均达极显著水平(P<0.01,下同)。响应面分析优化得到的蜡样芽孢杆菌CZBC1最佳发酵培养参数:麸皮+糖蜜6.84 g/L,酵母膏3.36 g/L,pH 6.50,培养时间42 h。此条件下,CZBC1芽孢数的实际值为5.75×10~8CFU/mL,与理论值(5.90×10~8CFU/mL)间无显著差异(P>0.05),但极显著高于优化前采用营养肉汤发酵培养的芽孢数(1.28×10~7CFU/mL)。【结论】采用响应面法优化得出蜡样芽孢杆菌CZBC1最佳发酵培养工艺能有效提高菌株的芽孢数量,且模型拟合效果较好,可用于指导蓝藻溶藻菌制剂的工业化发酵生产。

仔猪副伤寒活疫苗生产用菌株生长曲线的建立及合成培养基初步应用

建立了仔猪副伤寒活疫苗生产用菌株生长曲线,获取菌株培养参数,从而实现合成培养基初步应用。将猪霍乱沙门氏菌（CVCC79500株）运用试管和三角瓶分别静置和振荡培养30 h,期间取4、8、12、18、24、30 h等6个点进行活菌计数并建立生长曲线,确定37℃静置培养18-24 h,37℃、200 r/min振荡培养8-24 h为培养稳定期。不同接菌量比较结果表明,37℃静置培养24 h,37℃、200 r/min振荡培养12 h均可达到菌体稳定期。在稳定期参数条件下,比较合成培养基与常规普通肉汤培养基对该菌的增殖效果,结果表明,37℃静置培养24 h,试管及三角瓶培养菌数分别为27×108-31×108、33×108-41×108CFU/m L;37℃、200 r/min振荡培养12 h,试管及三角瓶培养菌数分别为58×108-66×108、78×108-88×108CFU/m L。而同条件3批普通肉汤培养菌数均低于合成培养基,且批次间稳定性较合成培养基差。将合成培养基振荡培养12 h的菌液接种小鼠均10/10存活;免疫后攻毒家兔达4/5-5/5保护,与普通肉汤基本一致。合成培养基保存期试验表明,25℃避光保存28 d与当天配制的液体合成培养基,振荡培养菌数基本一致。获取的培养参数适合用于合成培养基的初步评价,研制的合成培养基培养菌数优于普通肉汤,且不影响菌体安全性及免疫原性,室温保存期可达28 d。

根霉液态发酵产生纤溶酶的培养条件优化

目的:目前临床使用的溶栓药物疗效肯定,但还存在许多缺陷,而且价格昂贵,因此研制新型溶栓药物的需求迫切。方法:研究了根霉Rhizopus chinensisYY-15液体摇瓶发酵产生纤溶酶的工艺条件。采用单因素试验对液体发酵培养基的碳源、氮源、碳氮比、初始pH进行了优化;采用正交试验对发酵时间、接种量进行了研究。结果:实验范围内菌株液体发酵产纤溶酶的适宜培养基组成为:麸皮水浓度3%(w/v),豆粕浓度5%(w/v),初始培养基pH5.0。适宜培养条件为接种量6%,培养时间72h。优化条件下的摇瓶液体发酵纤溶酶产量平均达98.31 U/ml。

昆虫病原线虫液体培养研究概况

综述昆虫病原线虫液体培养的研究概况。包括液体培养的研究历史,不同培养基组分对昆虫病原线虫产量的影响,营养源的选择,培养参数在昆虫病原线虫液体培养过程中的作用,感染期昆虫病原线虫脂肪酸含量,以及昆虫病原线虫应用前景等。

高铁营养酵母的摇瓶培养

采用实验室筛选的高铁营养酵母菌为实验菌株(Candidautilis),根据酵母对铁的耐受量,研究培养条件对酵母细胞铁的富集、蛋白质含量及生物量的影响,探讨摇瓶培养工艺参数。

绣球菌菌丝营养生理特性研究

研究了绣球菌C2004菌株菌丝营养生理特性。结果表明,实验范围内绣球菌C2004菌丝生长最适碳源为糯米淀粉,适宜氮源为蛋白胨、酵母膏和豆饼粉;菌丝生长的最佳温度、抑制温度和最高致死温度分别为20 .2 ℃、35 ℃和40 ℃,最适pH为5 .25 ,培养料最适含水量为62 .5 %。

绿僵菌无纺布菌条制作工艺

在接种优良液体种子的基础上，以单位面积的产孢量为指标，筛选了制作多种蛀干害虫的病原——绿僵菌无纺布菌条的最佳营养组合及培养条件。结果表明，最佳营养条件为（g／L）：白砂糖20g、黄豆粉40g、蛋白胨6g；琼脂含量对产孢量无显著影响；最佳培养条件为：25℃下，相对湿度（RH）95％，产孢量可达3．6×10^8～3．7×10^8孢子／cm^2。

根霉12号固体发酵产生纤溶酶工艺条件的研究

研究了根霉12号固体发酵产生纤溶酶的工艺条件。采用单因素试验、均匀设计方法对固体发酵培养基的碳源、氮源、碳氮比、初始pH、加水量、无机盐加量进行了优化;采用正交试验对发酵时间、接种量进行了研究。结果表明,实验范围内根霉12固体发酵产纤溶酶的适宜培养基组成为:麸皮∶豆粕=1∶2,初始pH5.0,加水量0.75ml/g物料, MnSO4H2O和 (NH4)2SO4加量分别为0.25%和 1.42%(对物料)。适宜培养条件为接种量107个孢子/g物料,培养时间72h。优化条件下的纤溶酶产量平均达791.81u/g物料。