薄膜反注培养基法监测加温后的碘伏消毒效果

目的 探讨碘伏加温前后用于术前皮肤消毒效果的差异,及薄膜反注培养基法的实际使用效果。方法设计薄膜计数培养器,采用薄膜反注培养基法对室温碘伏(2 5±1℃)及加温碘伏(37±1℃)手术消毒范围采样培养,观察其消毒效果的差异,并进行方法验证。结果 加温碘伏术前消毒效果优于室温碘伏,两者差异有显著性(t =6 .39,P <0 .0 1) ;薄膜反注培养基法与倾注法的相对误差率为9.1%。结论 对用于术前皮肤消毒的碘伏加温不会降低其消毒效果;薄膜反注培养基法用于含菌量少的样本检验有明显的优点。

薄膜过滤反注培养基法检查抑菌药品微生物限度

目的:探讨薄膜过滤反注培养基法(反注法)在抑菌药品微生物限度检查中应用的可行性。方法:采用活菌培养计数实验,以倾注法回收率按100%计,考查反注法与贴膜法的差异,并作实际样品检查结果对照。结果:金黄色葡萄球菌:反注法回收率为5.4%,贴膜法回收率为96.0%,P>0.05;大肠杆菌回收率分别为95.5%和93.2%,P>0.05;白色念珠菌回收率分别为91.6%和4.6%,P>0.05。实际样品检查结果一致。结论:对标准菌株培养计数回收率检验,反注法与贴膜法二者差异无显著性,但反注法能简化实验操作,减少操作污染。

基于16S rDNA测序及培养基法探究虹鳟鱼贮藏优势腐败菌

为探究虹鳟鱼腐败机制,选取新鲜虹鳟鱼鱼片在0 ℃条件下进行贮藏。根据鱼肉样品的菌落总数和挥发性盐基氮(TVB-N)含量,确定虹鳟鱼鱼片的贮藏终点。利用传统培养基分离手段及16S rDNA高通量测序技术相结合的方法鉴定贮藏过程中的优势腐败菌。采用16S rDNA测序技术,对虹鳟鱼贮藏初期、中期及末期的腐败菌组成进行鉴定。16S rDNA高通量测序结果显示,贮藏末期的优势腐败菌属种类丰富,包括不动杆菌属(Acinetobacter)、假单胞菌属(Pseudomonas)和希瓦氏菌属(Shewanella)等多个菌属。利用培养基法分离的腐败菌为假单胞菌属及希瓦氏菌属,两者均包含在高通量测序菌属内。将分离到的这两个菌属接种到无菌虹鳟鱼鱼汁中进行贮藏,在贮藏过程中监测菌落总数及挥发性盐基氮含量,通过挥发性盐基氮产量因子评价优势腐败菌的致腐能力。腐败菌致腐能力结果显示,希瓦氏菌株S2的致腐能力最强。研究结果可为深入认识虹鳟鱼贮藏过程优势腐败菌提供依据,为进一步开发虹鳟鱼保鲜剂提供参考。

基于培养基法和高通量测序法分析冷藏小龙虾优势腐败菌

为揭示4℃冷藏小龙虾贮藏期间微生物菌群多样性及优势腐败菌种类,以传统培养基法作为对照,采用高通量测序技术分别鉴定小龙虾样品在鲜样期、腐败中期、腐败末期的腐败菌属,探究贮藏期间微生物菌群变化趋势。2种测序方法对比发现,高通量法检测到的菌属更具多样性,培养基法提取的腐败菌均包含在高通量测序菌属内。结果表明,培养基法提取优势腐败菌共11株,其中气单胞菌(Aeromonas jandaei)致腐能力最强,弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)致腐能力最弱;此外,高通量测序法显示希瓦氏菌(Shewanella sp.)、肉杆菌属(Carnobacterium sp.)、环丝菌属(Brochothrix sp.)、嗜冷菌属(Psychrobacter sp.)、漫游球菌属(Vagococcus sp.)、不动杆菌属(Acinetobacter sp.)等在腐败末期时的物种丰度为90.57%。2种方法比对可以确定,小龙虾的优势腐败菌有希瓦氏菌、肉食杆菌、环丝菌属、嗜冷菌属、漫游球菌属、不动杆菌属、气单胞菌、束毛球菌属(Trichococcus sp.)等。

用TTC培养基法对食品进行微生物检验的效果分析

目的:探讨用TTC培养基法对食品进行微生物检验的效果。方法:对我中心所辖区域内食品加工企业生产的100个食品样品的检验数据进行回顾性研究。我中心先对这100个食品样品进行TTC培养基检验和平板菌落计数检验,然后对其进行实验室综合检验,并将其进行实验室综合检验的结果作为最终的检验结果。所有检验结束后,比较用TTC培养基法和平板菌落计数法对食品进行微生物检验的准确率。结果:经实验室综合检验证实,用TTC培养基法进行微生物检验的准确率为100%(18/18),用平板菌落计数法进行微生物检验的准确率为61.11%(11/18)。与使用平板菌落计数法相比,使用TTC培养基法进行微生物检验的准确率更高。结论:用TTC培养基法进行微生物检验的准确率较高。此检验方法可作为对食品进行微生物检验的优选方法。

响应面法优化纤维堆囊菌SoF5-76产埃博霉素B发酵培养基

以纤维堆囊菌SOF5-76为试验菌株,用响应面分析法对其产埃博霉素B的培养基进行优化,以提高埃博霉素B的产量。在单因素试验的基础上,利用Plackett-Burman筛选出对埃博霉素B产量有显著影响的3个因素为马铃薯淀粉、脱脂奶粉和无水氯化钙,在此基础上通过最陡爬坡试验逼近最佳响应面区域;再运用Box-Behnken试验设计和响应面分析法进行回归分析,确定重要因素的最优浓度。得到最佳发酵培养基为:马铃薯淀粉3.9 g/L、脱脂奶粉2.2 g/L、无水氯化钙1.3 g/L、葡萄糖1 g/L,豆饼粉1.5g/L,七水硫酸镁2.5 g/L,EDTA-Fe3+3 mL/L,微量元素(TE)0.5 mL/L,VB121 mL/L。在此最优条件下发酵埃博霉素B的产量为29.95 mg/L,与模型预测值接近,发酵产量比优化前提高了1.1倍。

对无菌试验培养基灵敏度试验法准确性的初步研究

目的:研究《中国生物制品规程》(2000年版)(简称《规程》)中需氧菌和厌氧菌无菌试验培养基灵敏度试验法及真菌无菌试验培养基灵敏度试验法的准确性。方法:按照《规程》中需氧菌和厌氧菌无菌试验培养基灵敏度试验法及真菌无菌试验培养基灵敏度试验法,同时采用平皿[乙型溶血性链球菌采用血琼脂平皿,短芽孢杆菌采用营养琼脂平皿,生孢子梭状芽孢杆菌(简称生孢梭菌)采用硫乙醇酸盐软固体琼脂平皿(厌氧培养),白色念珠菌采用真菌培养基琼脂平皿]计数法,在相同稀释度及培养温度条件下平行进行1mL菌液的菌落形成单位(Colony Forming Units,CFU)计数。将菌液稀释至与标准比浊管相同之浓度,然后作10倍系列稀释。将稀释度为10-6～10-8的短芽孢杆菌、10-6-10-8的生孢梭菌,10-7～10-9的乙型溶血性链球菌菌液各1 mL,分别接种到9 mL硫乙醇酸盐培养基中;将稀释度为10-5～10-7的白色念珠菌菌液各1 mL,分别接种到9mL真菌培养基。每个稀释度至少接种3管,用未接种培养基作对照。将接种短芽孢杆菌的培养基,置35℃培养5 d,接种生孢梭菌或乙型溶血性链球菌的培养基,置35℃培养3 d,接种白色念珠菌的培养基,置25℃培养5 d,同时重复3次试验,记录结果。用每个菌种,按照需氧菌和厌氧菌无菌试验培养基灵敏度试验法及真菌无菌试验培养基灵敏度试验法重复进行3次灵敏度试验。结果:按照《规程》中需氧菌和厌氧菌无菌试验培养基灵敏度试验法及真菌无菌试验培养基灵敏度试验法,同一种培养基,用同一质控菌种重复3次灵敏度试验,结果往往不同,尤其是用乙型溶血性链球菌进行质控时,更为明显。平皿CFU计数与比浊菌数常有显著差异。结论:《规程》中需氧菌和厌氧菌无菌试验培养基灵敏度试验法及真菌无菌试验培养基灵敏度试验法准确性欠佳。

用培养基稀释法和离心薄膜过滤法检查蒲地蓝消炎颗粒微生物限度

目的:观察蒲地蓝消炎颗粒的微生物限度。方法:采用培养基稀释法(0.2 ml/皿)和离心薄膜过滤法,消除蒲地蓝消炎颗粒中抑菌成分,对样品中的微生物进行检测。结果:大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌的回收率均达到70%以上。结论:所建立方法检查蒲地蓝消炎颗粒的微生物限度可行。

改良琼脂培养基稀释法在抗真菌药物体外敏感性试验中的应用研究

目的:初步观测改良琼脂培养基稀释法和微量液体培养基稀释法在测定白色念珠菌对伊曲康唑体外敏感性上的差异。方法:采用CLSI M27-A2推荐的微量液体培养基稀释法和改良琼脂培养基稀释法同时测定20株临床近期分离无重复白色念珠菌对伊曲康唑的体外敏感性。结果:两种方法对检测的20株真菌的体外最小抑菌浓度一致。结论:改良琼脂培养基稀释法有可能成为一种评价抗真菌药物体外敏感性的一种直观、简单、快速的方法。

应用培养基稀释法测定正露丸等4个品种的细菌总数的考察

“药品卫生标准”规定,非规定灭菌的药品制剂需测定活细菌的数量,以表示药品受到细菌污染情况.但如正露丸等品种由于含有抑菌成分,造成测得结果无法依“菌数报告规则”发报告.本文应用简单的培养基稀释法,消除抑菌成分对细菌生长影响,使测得结果符合“菌数报告规则”,可依法发出结果报告,其结果能真实反映样品污染细菌的程度.

水体微生物群落结构的系列选择性培养基扫描法的初步研究

利用选定的系 列选择性培 养基可以较 好地扫描水 体的微生物群 落组成和 群落结 构，我们称之为系列选择性培养基扫描法。该方法可以一次检出 水体常见的微生物菌株， 根据需要鉴定到属或种甚至株系； 可以准确 反映不同株系微生物的数 量， 便于进行 群落结构的分析和研究。利用该方法对一个小水体进行了研究， 系列选择性培养基检出微生物４８ 个菌株， 数量是普通营养肉汤数量的１０ 倍左右， 两者间有较好的相关性。

用TTC培养基法对食品进行菌落总数测定的效果探讨

目的:分析在对食品进行菌落总数测定的过程中,使用TTC培养法的检测效果。方法:收集100份我县食品加工点的食品样品,对其分别实施平板计数菌落琼脂培养基和TTC培养基两种方法进行菌落总数测定,对比两种方法的检验结果。结果:实验室采用两种方法进行菌落总数测定,超标样品为16份;其中TTC培养基法超标16份,超标率100%,采用国标中的平板计数菌落琼脂培养基进行菌落总数测定,超标10份,检出率62.5%。TTC培养基法检出率明显高于平板菌落计数法,差异显著(P<0.05)。结论:使用TTC培养基法对食品进行菌落总数测定,其检出率高于板计数菌落琼脂培养基法,并且操作方法亦相似。

15种医院口腔抑菌制剂微生物限度检查方法的建立

目的建立15种医院口腔抑菌制剂的微生物限度检查方法。方法以醋酸氯己定口崩片、醋酸氯己定洗剂、复方替硝唑溶液、碘甘油、甲醛甲酚涂剂、硼酸甘油涂剂、人工唾液、脱敏糊剂、干髓糊剂、锌麝酚醛糊剂、牙周塞糊剂、甲硝唑膜、复方克林霉素膜、多聚甲醛新失活剂、多聚甲醛牙髓失活剂为样品(制剂1-15),按2020年版《中国药典(四部)》通则1105,1106,1107项下方法,采用平皿法、薄膜过滤法和培养基稀释法,对5种常见菌(金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉)进行回收试验,并进行控制菌(金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希菌)检查方法适用性试验。结果制剂1-5、9-11、14-15需氧菌总数检查均采用薄膜过滤法,其余制剂均采用平皿法;制剂1-3、6-8、12-13霉菌和酵母菌检查均采用平皿法,其余制剂均采用薄膜过滤法,试验菌回收比均在0.5~2.0范围内;控制菌检查,制剂1-3、5、9-11、14-15均采用薄膜过滤法,其余制剂均采用培养基稀释法,试验组相应阳性菌均能正常检出。结论所建立的方法适用于此15种医院口腔抑菌制剂的微生物限度检查。

微量液体培养基最低抑菌浓度法与罗氏比例法在结核分枝杆菌药敏试验中的价值比较

目的比较微量液体培养基最低抑菌浓度(MIC)法与罗氏比例法在结核分枝杆菌药敏试验中的临床价值。方法以100株结核分枝杆菌菌株(由辽宁省结核实验室提供)为研究样本,分别采用罗氏比例法与微量液体培养基MIC法检测结核分枝杆菌的药物敏感性。结果微量液体培养基MIC法与罗氏比例法检测结核分枝杆菌对乙胺丁醇、二卡那霉素、利福平、异烟肼、氧氟沙星、卷曲霉素药物的敏感性比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论微量液体培养基MIC法应用于结核分枝杆菌药敏试验中与罗氏比例法有着良好的一致性,且检测速度快,经济适用性好,能够为临床指导结核病用药提供帮助。

科玛嘉念珠菌显色培养基与常规手工法鉴定念珠菌的比较

目的:探讨科玛嘉念珠菌显色培养基鉴定念珠菌的可靠性。方法:对临床分离的225株似酵母样真菌分别用科玛嘉念珠菌显色培养基和常规手工法进行鉴定。结果:科玛嘉念珠菌显色培养基和常规手工法鉴定白色念珠菌的符合率达到95%以上,热带念珠菌为95%,克柔念珠菌为82%,光滑球拟酵母菌为33.3%。结论:科玛嘉念珠菌显色培养基能快速可靠地鉴定临床常见念珠菌。

培养基稀释法和常规法检验养血通络胶囊微生物种类等效性研究

[目的]观测培养基稀释法和常规法检验养血通络胶囊微生物种类效果。[方法]采用常规法和培养基稀释法对养血通络胶囊金进行黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉回收率试验,判断抑菌成分。[结果]两种方法回收率均>70.00%,组间无明显差异(P>0.05)。两种方法均未检出含有细菌和霉菌。[结论]培养基稀释法和常规法检测养血通络胶囊微生物种类具有等效性,均可获得良好效果,可根据实际情况推广应用。

神经干细胞提取与培养方法的比较研究

目的探讨神经干细胞(neural stem cells,NSCs)提取、培养的最佳方法,为NSCs的基础研究提供技术参考。方法对NSCs的不同提取、培养方法进行比较:提取胎鼠与乳鼠的大脑皮质、采用不同类型培养基、不同接种密度、不同培养方法、不同换液方法、不同传代方法,观察NSCs的成球率和NSCs未分化状态的稳定性。用多功能微孔板读数仪检测NSCs活性。结果 (1)胎龄14 d胎鼠较新生24 h内乳鼠的大脑皮质提取NSCs的比例高,杂细胞少,形成的神经球数量多。(2)采用无血清培养基,NSCs可以稳定在未分化状态;而采用含血清培养基,NSCs多数分化为神经元和胶质细胞。(3)以1.0×109·L^(-1)密度接种的NSCs,培养形成的神经球数量多,且状态良好。(4)悬浮培养法较贴壁培养法,可以形成稳定的神经球,有利于保持NSCs处于未分化的状态。(5)半量换液法和只加液不弃液法培养形成的神经球的状态优于全量换液法。(6)原代和1代的神经球用机械吹打法传代后,NSCs的活细胞比例高,再次形成的神经球状态好,且较其他两种方法简便;2代及以后的神经球用Accutase酶传代后,NSCs的活细胞比例高,再次形成的神经球状态好。(7)14 d胎鼠Accutase酶消化组的NSCs活性高于另外3组,差异均具有显著性(P<0.05)。结论提取胎龄14 d胎鼠的大脑皮质,采用无血清培养基,以1.0×10~9·L^(-1)1的密度接种于25 cm^2培养瓶,采取悬浮培养法,每2~3 d加液1~1.5m L,每6~7 d传代1次,所得到的NSCs增殖分裂旺盛,成球率高,神经球状态良好,可以保持稳定的未分化状态。

痰直接厚涂片法和改良罗氏培养法检查结果的比较

目的探讨结核菌细菌学检查方法对肺结核的诊断价值。方法收集荆门市疾病预防控制中心结核病防治所2008年1-5月的30例临床肺结核患者的合格痰标本,对其采用直接厚涂片法(即在薄涂片法的基础上把痰液体积增加1.5-2.0倍量进行涂片),同时将标本接种到改良罗氏培养基上进行分支杆菌分离培养,并对涂片与培养结果进行比较与分析。结果30例肺结核患者的痰标本细菌学报告为:直接厚涂片法15例阳性,15例阴性;改良罗氏培养基法28例阳性,2例阴性。其中15例属涂片阳性培养阳性,13例属涂片阴性培养阳性,2例属涂片阴性培养阴性。结论痰涂片简便、快捷、成本低,是可以直接发现病原菌的检查方法,但其敏感性低;而传统的改良罗氏培养基法敏感性明显高于涂片法,精确可靠且特异性高,不仅能了解分枝结核杆菌有无生长繁殖能力,还为进一步试验(药敏、菌型鉴定)提供了基础。

两种结核分枝杆菌培养检测方法的比较

目的比较小川培养基和BacT/ALERT3D系统培养检测结核分枝杆菌结果的差异。方法对100份结核患者痰标本进行前处理后,分别用上述两种方法进行培养。结果两种方法的阳性率分别为28%、38%;阳性平均报告时间分别为28.3天、14.6天;污染率分别为3%、5%。结论3D系统培养法较小川培养法有更高的灵敏度和更快的检出时间,在加强无菌操作的情况下,3D系统可以取代小川培养法,作为结核杆菌培养检测的常规方法。