大鼠心脏细胞条件培养基对小鼠ES细胞特性的维持

以C1 9- 2和MESPU - 1 3为供试细胞 ,用克隆测试、传代培养等方法对 1 7种细胞的条件培养基进行了筛选 ,结果表明 ,大鼠心脏细胞的条件培养基 (RH -CM)具有显著抑制小鼠ES细胞分化、维持其二倍体核型、促进ES细胞贴壁生长的作用。经RH -CM培养 1 0代和 2 0代的小鼠ES细胞在体内外分化能力上仍保留了原ES细胞的多方向分化潜能和特征 ;RH -CM也可作为小鼠ES细胞培养基的添加物 ,用含 70 %RH -CM的ES细胞培养基和小鼠胚胎原代成纤维细胞饲养层 (PMEF)培养ES细胞 ,可长期有效地维持其未分化状态和二倍体核型。RT

酸性普鲁兰芽孢杆菌普鲁兰酶在大肠杆菌中分泌表达研究

来自于酸性普鲁兰芽孢杆菌的普鲁兰酶,由于分子量较大,在大肠杆菌中难以实现高效分泌表达。为研究其在E.coli中高效分泌表达策略,构建了带信号肽的p ET-28a(+)-pel B-pul13A质粒,通过发酵过程控制及向发酵培养基中添加促分泌物质,系统地优化了分泌表达策略。通过分子改造,带信号肽的表达系统实现了低水平的分泌性表达;进一步通过优化培养基、诱导温度、IPTG浓度、诱导时机及11种培养基添加物,促进普鲁兰酶最大限度的分泌到周质空间。实验结果显示,连上pel B信号肽的pull3A在TB/SB培养基中,通过优化的诱导条件(IPTG浓度0.1 mmol/L,诱导温度20℃,诱导时机为接种后5 h),在诱导20 h时加入0.03%SDS,周质空间酶活达到最大值102.5 U/m L。在此基础上,探究了化学添加剂对大肠杆菌细胞膜及膜通透性的影响,并应用优化后的系统实现了乙酰胆碱酯酶和单域抗体的分泌表达。为大分子蛋白在大肠杆菌中分泌表达提供参考。