马来甜龙竹种胚培养增殖芽芽尖再生体系建立

为建立马来甜龙竹高效稳定的再生体系,本研究以马来甜龙竹种胚培养增殖芽的芽尖为试验材料,研究不同植物激素、有机添加物以及弱光处理对其再生体系建立的影响。结果表明,马来甜龙竹芽尖愈伤组织诱导较适宜培养基为添加0.5~1.0 mg·L-1 NAA和3 mg·L-1 2,4-D的MS培养基,致密颗粒状愈伤组织诱导率达61.7%;较适宜的分化培养基为添加1 mg·L-1 6-BA、1 mg·L-1 KT和0.25 mg·L-1 NAA的MS培养基,10μmol·m-2·s-1弱光处理6 d,分化率达46.67%,再生苗伸长生长良好;较适宜的生根培养基为添加3 mg·L-1 IBA的1/2 MS培养基,生根率为55%,根较粗,其中部分根长有侧根。试管苗移植到混合基质中,成活率为83.33%。本研究初步建立了马来甜龙竹种胚培养增殖芽芽尖再生体系,为马来甜龙竹遗传转化体系的研究和应用奠定了基础。

低温乳酸菌混菌培养增殖培养基的优化

以低温乳酸菌为研究对象,研究不同碳源、氮源和外加营养因子对混菌培养的增殖效果,并采用正交设计对营养因子进行优化。结果表明:低温乳酸菌混菌培养的最佳增殖培养基成分为:蛋白胨1%,牛肉膏1%,胰蛋白胨0.5%,K2HPO4.3H2O 0.2%,葡萄糖2.3%,乙酸钠0.5%,柠檬酸钠0.2%,MgSO4.7H2O 0.058%,MnSO4.4H2O 0.025%,吐温-80 0.1%,土豆汁4%,胡萝卜汁6%,番茄汁8%。在此优化培养基中25℃培养14h后活菌数对数值可达(10.18±0.03)lg(cfu/mL),与优化前相比,对数值提高了9.18%。

白城山新1号杨增殖培养试验

为筛选出白城山新1号杨最佳增殖培养基配方,本试验采用正交试验法经组织培养对其进行繁育,以MS培养基为基础配方,将6-BA质量浓度、NAA质量浓度、大量元素含量、蔗糖质量浓度分别设置5个水平进行试验。经回归分析,确定MS+6-BA 0.30 mg·L^(-1)+NAA 0.05 mg·L^(-1)+蔗糖20.00 g·L^(-1)为白城山新1号杨组培增殖培养基优化配方。

‘京枣39’离体多倍体诱导及其增殖、生根培养体系优化

【目的】研究秋水仙素溶液质量浓度、处理时间和预培养时间对‘京枣39’离体多倍体诱导的影响,优化枣树良种‘京枣39’的增殖和生根培养基,建立‘京枣39’的离体多倍体诱导体系,获得多倍体植株。【方法】采用完全随机区组试验设计,探索不同秋水仙素溶液质量浓度和处理时间组合对‘京枣39’不定芽再生的影响,不同预培养时间对‘京枣39’离体多倍体诱导的影响,不同生长调节剂组合对‘京枣39’增殖培养的影响,不同基本培养基和生长调节剂组合对‘京枣39’组培苗生根培养的影响。【结果】(1)当秋水仙素溶液质量浓度为80 mg/L、处理48 h时‘京枣39’刻伤叶片存活率为(50.00±7.07)%,分化系数为(2.06±0.17)。(2)最佳预培养时间为6 d,并施以80 mg/L秋水仙素浓度处理48 h,获得了纯合四倍体‘京枣39’。(3)最佳增殖培养基为MS+0.8 mg/L 6-BA+0.4 mg/L IBA+30 g/L麦芽糖,pH=5.8,平均增殖系数为(4.22±0.22)。(4)最佳生根培养基为改良1/2MS+0.8 mg/L IBA+30 g/L麦芽糖,pH=5.8,平均根长为(5.22±0.19) cm;平均生根数为(3.20±0.22)。【结论】初步建立了‘京枣39’的离体多倍体诱导体系,获得了‘京枣39’的多倍体植株,并优化了其增殖培养及生根培养方法。本研究为优良枣树品种‘京枣39’的种质创新提供了切实可行的技术方法,为多倍体诱导在枣树以及其他果树中的应用奠定了试验基础。

嗜热链球菌937增殖培养基及发酵条件的优化

该研究以化学限定培养基为基础,通过单因素实验、响应面实验和正交优化实验对嗜热链球菌937的培养基、培养条件进行优化。通过实验确定嗜热链球菌937最适培养基:乳糖20 g/L,酶解脱脂乳16.60%,大豆低聚肽18.88 g/L,乳清蛋白粉1.69%,10 mmol/L组氨酸、10 mmol/L异亮氨酸、5 mmol/L酪氨酸、1 mmol/L半胱氨酸和1 mmol/L谷氨酸、2 mg/L烟酸、0.5 g/L抗坏血酸、40 mg/L氯化镁、2 mg/L泛酸钙、4 mg/L盐酸硫胺素、0.4 g/L氯化钙。初始pH值6.5,接种量2%,39℃发酵,嗜热链球菌937活菌数高达1.75×10^(9)CFU/mL。由此可见,该研究实现嗜热链球菌937低成本、高效率的培养技术,为高活菌数的嗜热链球菌商业产品的开发生产奠定基础。

响应面法优化欧洲冬青‘Ferox Argentea’增殖培养基大量元素配方

利用响应面法探究了培养基大量元素组分和配比对‘Ferox Argentea’试管苗增殖的影响,并构建了该品种专用的增殖培养基,采用Design-Expert响应面最佳优化试验设计,以WPM培养基中5种大量元素无机盐K_(2)SO_(4)、MgSO_(4)·7H_(2)O、KH_(2)PO_(4)、NH_(4)NO_(3)、Ca(NO_(3))_(2)·4H_(2)O为自变量,接种50 d后的增殖率、株高、芽质量等级为因变量,建立数学模型分析并预测大量元素无机盐最佳优化配方。通过单因子效应分析表明,大量元素无机盐中NH_(4)NO_(3)对欧洲冬青‘Ferox Argentea’增殖率影响显著,对株高和芽质量影响极显著,Ca(NO_(3))_(2)·4H_(2)O对株高影响显著,对芽质量影响极显著,K_(2)SO_(4)、MgSO_(4)·7H_(2)O、KH_(2)PO_(4)对各指标影响均不显著。交互效应分析表明,K_(2)SO_(4)和KH_(2)PO_(4)、K_(2)SO_(4)和Ca(NO_(3))_(2)·4H_(2)O的交互作用对增殖率具有显著影响;KH_(2)PO_(4)和Ca(NO_(3))_(2)·4H_(2)O的交互作用对株高具有显著影响;K_(2)SO_(4)和MgSO_(4)·7H_(2)O、K_(2)SO_(4)和NH_(4)NO_(3)、KH_(2)PO_(4)和Ca(NO_(3))_(2)·4H_(2)O的交互作用对芽质量具有显著影响。因此,WPM培养基的大量元素无机盐含量影响欧洲冬青‘Ferox Argentea’的增殖率、株高、芽质量等级,NH_(4)NO_(3)与Ca(NO_(3))_(2)·4H_(2)O是主要影响单因素。响应面软件预测的大量元素无机盐优化配方为:K_(2)SO_(4)495.00 mg·L^(-1)、NH_(4)NO_(3)1200.00 mg·L^(-1)、MgSO_(4)·7H_(2)O 529.10 mg·L^(-1)、KH_(2)PO_(4)362.27 mg·L^(-1)与Ca(NO_(3))_(2)·4H_(2)O 1279.92 mg·L^(-1),进一步对该优化配方进行试验验证,发现验证组试管苗增殖率2.91,株高3.14 cm,芽质量等级2.76,与理论预测无显著差异,且显著优于对照组(1.76、2.44 cm、1.78)。综上,基于响应面法构建了欧洲冬青‘Ferox Argentea’专用的增殖培养基,研究结果不仅解决了该品种的试管苗增殖困难问题,也为其他冬青属植物增殖培养体系构建提供了重要的技术参考。

徐香猕猴桃开放式组培增殖培养基的优化

为了降低徐香猕猴桃工厂化育苗生产的成本,提高经济效益,探究徐香猕猴桃开放式组培的最适抑菌剂浓度及增殖培养基配方,以现有的无菌材料,采用单因素试验确定增殖培养基因素的添加范围,并利用响应面法试验进行优化分析。结果表明,徐香猕猴桃开放式组培最优的增殖培养基为MS+琼脂3 g/L+蔗糖20 g/L+代森锰锌0.1 g/L+NAA 0.2 mg/L+6-BA 1.5 mg/L,此配方下的增殖系数为6.539,成活率为93.33%。这可为徐香猕猴桃开放式组培增殖培养提供参考。

培养基组分对大花蕙兰类原球茎增殖培养的影响

以大花蕙兰“华尔兹”的茎尖培养诱导出的类原球茎团用作接种材料,探究了不同植物生长调节剂浓度组合、类原球茎团块大小以及不同蔗糖浓度处理对类原球茎增殖培养的影响。结果表明:6-BA1.0 mg/L+NAA0.25 mg/L为类原球茎增殖培养适宜的植物生长调节剂浓度组合,能够在一定程度上抑制芽或根的分化;接种0.85 g类原球茎团更有利于类原球茎增殖培养;类原球茎增殖培养适宜的蔗糖浓度为1.5%。

红松愈伤组织增殖阶段生长与蔗糖代谢的关系

针对增殖培养中不同类型的红松(Pinus koraiensis)愈伤组织,采用形态学观察、生长曲线绘制、糖代谢的测定,对具有成胚能力差异的两类愈伤组织(胚性愈伤组织、非胚性愈伤组织)进行比较。结果表明:形态学上,胚性愈伤组织半透明,浅白或白色,结构疏松,表面有大量半透明突起,湿润有黏性,可稳定继代增殖培养;非胚性愈伤组织表面致密,白色逐渐转变成黄褐色。在体视显微镜下观察,胚性愈伤组织由许多胚细胞和单个胚柄细胞组成;而非胚性愈伤组织由核质浓密的圆形细胞单一或聚集组成。增殖培养过程中,红松胚性愈伤组织与非胚性愈伤组织的细胞生长曲线基本呈“S”形,胚性愈伤组织、非胚性愈伤组织生长率在15、20 d时开始下降;胚性愈伤组织与非胚性愈伤组织中可溶性糖(果糖、葡萄糖、蔗糖)质量分数差异极显著,蔗糖质量分数基本维持不变,葡萄糖和果糖质量分数变化明显,呈现先升高再降低的走向;参与蔗糖合成的蔗糖磷酸合酶活性变化与两种转化酶活性变化规律相似,而蔗糖合成酶活性基本维持不变;增殖阶段,胚性愈伤组织的可溶性糖质量分数、蔗糖代谢酶活性始终高于非胚性愈伤组织。

紫菀组织培养技术优化研究

为建立完善的紫菀组织培养与快速繁殖体系,解决种苗退化问题,以采自亳州的紫菀为试验材料,开展植物组织培养技术研究,筛选出紫菀外植体最佳消毒时间和紫菀最佳增殖培养基、生根培养基,并观察紫菀组培苗炼苗移栽后的生长状况。结果表明:用0.1%升汞处理8 min,紫菀外植体污染与褐化水平较低,成活率为46.67%;最佳继代增殖培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L,增殖系数为4.56;最佳生根培养基为MS+IBA 0.3 mg/L+NAA 0.5 mg/L,生根率为96.67%;紫菀组培苗移栽60 d的生长状况优于移栽1、30 d,叶片数较多,叶片宽较宽,叶片长和叶柄长均较长。

美国红枫‘秋火焰’组培初代筛选及增殖培养技术优化

为促进耐寒美国红枫工厂化繁殖,试验采用引种驯化10年的耐寒美国红枫“秋火焰”(Acer rubrum‘Autumn Blaze’),探索植物生长调节剂配比、抑菌剂处理、培养基pH、采集时间对初代培养过程腋芽诱导的影响,以及茎段接种方式及不同光照强度对增殖培养的影响,并利用腋芽茎段外植体进行初代和继代增殖培养。结果表明,适宜初代培养的培养基为改良MS+6-BA 1.0 mg·L^(-1)+IBA 0.2 mg·L^(-1);在浓度为20 mg·L^(-1)的益培灵处理下,腋芽茎节生长更为适宜。以改良后的MS培养基在pH为6.0时最适宜;在6月初进行外植体的采集时美国红枫增殖系数最大,长势较好;在继代增殖时采用切茎段接种方式处理最佳,美国红枫在1600 lx光照强度下的LED光增殖效果最佳,生长速度快。

龙牙百合大叶种组织培养再生体系研究

为了保护和繁殖地方百合优势变种,以龙牙百合大叶种的鳞片为研究对象,采用植物组织培养技术,研究外植体不同取材部位和HgCl2处理时间的灭菌效果以及不定芽诱导培养、不定芽增殖培养、小鳞茎生根培养的适宜培养基,探讨并建立植株再生体系。结果表明:龙牙百合大叶种进行组织培养时,外植体取材以鳞茎中层鳞片为宜,适宜的灭菌方法为75%乙醇浸泡30 s+30%NaClO处理10 min+0.1%HgCl2浸泡12 min,污染率为12.83%,成活率为85.50%;不定芽诱导适宜培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L时,诱导率为81.17%,分化系数为6.34;不定芽增殖适宜培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L,增殖系数为6.11;小鳞茎生根适宜培养基为1/2 MS+IBA 0.5 mg/L,生根数为11.3条,生根率达到100.00%。

金线莲腋芽增殖培养条件的优化

为筛选出金线莲腋芽增殖的最适培养基,以MS为基本培养基,利用正交试验设计探讨6-苄氨基嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)、玉米素(ZT)和激动素(KT)对金线莲腋芽增殖的影响。结果表明,金线莲腋芽增殖的最适培养基为MS+3.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+0.6 mg/L ZT+0.5 mg/L KT,外加30 g/L蔗糖8、g/L琼脂(pH 6.0),培养35 d后腋芽增殖6.7倍。经方差分析表明,植物生长调节剂ZT对金线莲腋芽的分化和增殖具有显著的促进作用,当ZT浓度为0.6 mg/L时,腋芽生长正常,叶绿,健壮。

益生菌Lactobacillus casei Zhang增殖培养基的优化

Lactobacillus casei Zhang是一株分离自传统酸马奶中的益生菌。本文研究了不同碳源、氮源、碳氮比例、微量元素及缓冲盐对Lactobacillus casei Zhang增殖培养的效果,并采用响应面法对优选的碳源、氮源和缓冲盐类的组成含量进行优化,得到Lactobacillus casei Zhang的增殖培养基为:葡萄糖20.9g/L、大豆蛋白胨10.45g/L、酵母粉10.45g/L、K2HPO43.5g/L、醋酸钠14.6g/L、柠檬酸钠2.3g/L、MgSO4·7H2O1g/L、MnSO4·5H2O54mg/L、CuSO4·5H2O10mg/L、吐温80为1g/L。LactobacilluscaseiZhang在此增殖培养基中经37℃18h培养活菌数可达到4.78×109CFU/mL,比在MRS中(4.8×108CFU/mL)提高近10倍。

不同培养基对蓝莓“康威尔”组培增殖生长的影响

为了加快蓝莓品种"康威尔"组培苗快繁速度,以"康威尔"茎段为外植体,研究基本培养基种类对其组培苗增殖的影响。结果表明,LM培养基相比MS,DPD,DKW,RNS,1/2MS,MS,1/4MS,White,N6,WPM,B5培养基更适于"康威尔"不定芽增殖培养,其总增殖系数、有效增殖系数、苗高、植株鲜重和干重显著高于其他培养基。LM+1 mg/L ZT的有效增殖系数达到15.03。利用DPS软件对各生长指标进行相关性分析,结果表明,有效增殖系数与总增殖系数、苗高、植株鲜重和干重呈极显著正相关。

木薯外植体表面灭菌与增殖培养的研究

[目的]筛选出适合木薯组织培养的灭菌体系,为加快木薯组织快繁提供科学依据。[方法]以木薯品种GR891的腋芽为外植体,研究经甲基托布津杀菌剂处理和无处理外植体分别采用不同组合、不同处理时间对其表面灭菌的效果,同时研究6-BA和6-BA与NAA组合对丛芽诱导培养效果的影响。[结果]经甲基托布津杀菌剂处理后用体积分数75%乙醇消毒10 s+质量分数0.1%升汞处理8 min效果最好,外植体存活率为61.3%;以MS+6-BA 1.5 mg/L+糖30 g/L+琼脂6.5 g/L培养基诱导培养芽效果最好,有的丛芽能达到7～9株,丛芽生长速度快,健壮。[结论]建立了木薯GR891组织培养外植体灭菌与增殖培养体系。

杜鹃兰原球茎增殖培养条件

以杜鹃兰种子萌发的原球茎为试材,研究不同培养基、不同植物生长调节物质(6-BA、NAA和IBA)、活性炭、温度及光照强度对杜鹃兰原球茎增殖的影响。结果表明:1/2MS培养基为适于原球茎增殖的基本培养基;添加一定浓度的6-BA、NAA和IBA均有利于原球茎的增殖,IBA的浓度为1.0mg·L^(-1)时,原球茎增殖率较高,40d可达170.07%;适量添加活性炭对原球茎增殖有促进作用;温度及光照强度的控制对原球茎增殖是必需的。杜鹃兰原球茎增殖的适宜培养条件为1/2MS+1.0mg·L^(-1) 6-BA+1.0mg·L^(-1) IBA+0.5g·L^(-1)活性炭,温度为15℃,光照强度为2 000lx。

黑老虎带芽茎段的组织培养及快速增殖

【目的】为黑老虎的工厂化育苗及遗传转化研究提供参考。【方法】以大田培养和温室盆栽的黑老虎带芽茎段为外植体,比较不同消毒方式对黑老虎带芽茎段消毒效果的影响,研究不同植物生长调节剂浓度配比下外植体的腋芽诱导和增殖效果,找到适合培养黑老虎带芽茎段的最佳培养基。【结果】各处理中大田黑老虎带芽茎段的消毒效果均较差,腋芽成活率均为0。剪掉大田黑老虎地上部分的茎段,然后移栽到花盆中,放在温室内培养,待新梢长出后,取半木质化的带芽茎段作为组织培养的外植体,这样可以解决黑老虎外植体消毒难的问题。适宜的黑老虎带芽茎段消毒方法为75%酒精浸泡2 min+0.1%HgCl_(2)浸泡处理45 min,采用该方法消毒后污染率可以控制在18.5%之内,腋芽诱导率可达59.8%。适宜的黑老虎带芽茎段初代培养基配方为1/2 MS+2.0 mg/L6-BA+0.2 mg/L IAA,在该培养基上腋芽诱导率可达46.2%;最佳继代增殖的培养基配方为1/2 MS+3.0 mg/L6-BA+0.1 mg/L 3-IBA,在该培养基上腋芽增殖系数可达8.5。【结论】以温室盆栽植株的带芽茎段作为外植体,可显著降低污染率,提高腋芽萌发率;消毒后的带芽茎段经过初代培养及继代增殖培养后,可以得到生长健壮的黑老虎无菌苗。

铁皮石斛丛生芽增殖培养条件的优化

为筛选出铁皮石斛从生芽继代增殖的最适培养基和培养条件,以MS为基本培养基,研究比较了活性炭、植物激素、有机添加物以及温度和光照等因素对铁皮石斛生长状况的影响。结果表明:丛生芽继代增殖的最佳配方为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L+香蕉100g/L+活性炭0.5g/L+蔗糖30g/L,丛生芽长势好,60d增殖系数达到7.16;最适培养温度为25℃,最佳的光照强度为2 000lx。

火百合花器的鳞茎诱导和增殖培养研究

采用4.5 ～6.5cm长、花苞青色未开放的火百合花蕾作材料,切取其子房、花柱、花丝为外植体进行鳞茎诱导,结果表明:花丝的鳞茎诱导率最高,其次是花柱,子房的诱导率最低。以子房和花柱为外植体诱导出的鳞茎个体大小不一(1～7mm) ,以花丝为外植体诱导出的鳞茎则普遍偏小,但较整齐一致(3～4mm) ;小鳞茎诱导的最佳6-BA浓度是1.0mg/L。研究了基本培养基、6-BA浓度、NAA浓度对小鳞茎增殖的效应及不同蔗糖浓度对小鳞茎增重的影响,结果表明:小鳞茎增殖的最佳培养基是:MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.2 mg/L,4 %蔗糖对鳞茎增重效果最好。