FTY720对体外混合培养淋巴细胞增殖和凋亡的影响

目的观察FTY720对体外混合培养小鼠脾脏淋巴细胞的增殖、分化和凋亡的影响。方法将C57BL/6J小鼠与BALB/c小鼠的脾脏淋巴细胞体外混合培养5 d,培养液中加入不同浓度的FTY720。分别运用MTT法和流式细胞仪检测在不同浓度FTY720作用下,混合培养淋巴细胞的增殖状况、细胞表型和凋亡率。结果当FTY720为400 ng/mL时,体外混合培养淋巴细胞的增殖即受到明显抑制,抑制率为47.6%(P<0.05);当FTY720为3 200 ng/mL时,其抑制率达到为51.6%,呈剂量依赖性。FTY720为1 600 ng/mL时,混合培养淋巴细胞中的CD4+CD25+T细胞比例显著增加(P<0.05)。FTY720在200 ng/mL时,混合培养淋巴细胞的细胞凋亡率即显著增加(P<0.05)。结论在小鼠混合淋巴细胞培养体系中加入高浓度的FTY720,能显著抑制淋巴细胞增殖能力,增加调节性细胞的比例并促进细胞凋亡。

大黄素促进人混合培养淋巴细胞凋亡的实验研究

目的:探讨大黄素是否可通过影响淋巴细胞内活性氧的产生,促进淋巴细胞的凋亡来发挥其免疫抑制作用。方法:分别提取健康成年人外周静脉血中淋巴细胞,建立混合淋巴细胞培养(MLC)模型,给予不同浓度的大黄素,并进行不同时间点干预,利用流式细胞技术检测淋巴细胞内活性氧的产生水平及淋巴细胞凋亡情况,并给予还原性谷胱甘肽清除细胞内活性氧,流式细胞技术再次观察细胞内活性氧水平及淋巴细胞凋亡情况。结果:在高、中、低浓度组,大黄素与混合培养淋巴细胞共培养24h、48h、72h后,淋巴细胞内活性氧产生水平增高,在1μmol/ml-100μmol/ml的浓度范围内,不同浓度大黄素组淋巴细胞凋亡率与对照组相比均有不同程度的升高(P<0.05),并呈现浓度和时间依赖性。结论:大黄素可能通过提高淋巴细胞内活性氧产生水平,进而促进淋巴细胞凋亡来发挥其免疫抑制作用。

淋巴细胞培养后免疫治疗原发性习惯性流产的研究

目的 探讨淋巴细胞培养后免疫治疗原发性习惯性流产 (UHA)的可行性。方法 采用白细胞介素 2 (IL 2 )刺激淋巴细胞 ,体外培养后主动免疫治疗UHA患者并检测其机体免疫反应状态。结果 (1)免疫治疗组比对照组妊娠成功率明显提高 (P <0 .0 5 )。 (2 )免疫治疗后CD4/CD8比值和血清肿瘤坏死因子α(TNFα)变化与常规淋巴细胞免疫治疗相似。结论 (1)淋巴细胞培养后可增加免疫原活性 ,减少用量 ,提高妊娠成功率。 (2 )临床观测无胎儿宫内生长迟缓及畸形儿出生。

构建体外联合培养条件下抗原诱导淋巴细胞反应的抑制模型

目的:观察在体外混合培养条件下,抗原能否诱导外周淋巴细胞反应抑制,建立体外淋巴细胞反应抑制模型。方法:实验于2003-10/2004-04在解放军第四军医大学西京医院心脏外科研究所实验室进行。取健康自愿者新鲜血液用于分离外周淋巴细胞。在体外条件下,以同种异体外周淋巴细胞分作供体和受体进行混合培养,采用四甲基偶氮唑盐比色法、电镜、姬姆萨-瑞氏染色、流式细胞仪检测对照组D组:首次混合培养淋巴细胞(PMLC),即受体淋巴细胞(R)+用丝裂霉素处理过的供体淋巴细胞(DBm)混合培养72h所得,A组(PMLC+DBm)、B组(PMLC+白细胞介素2中和单抗)、C组(PMLC+DBm+白细胞介素2中和单抗)等4组淋巴细胞的活性变化、活性变化的原因及其数量的变化。结果:①4组混合培养淋巴细胞在电镜、显微镜下变化:均可见细胞质染色浓集、核固缩裂解、凋亡小体形成。②四甲基偶氮唑盐比色法检测4组细胞活性即刺激指数:B组和C组比A、D组明显减弱(3.152±0.322,1.802±0.115,4.293±0.269,3.709±0.278,P<0.05);C组细胞活性比B组也明显减弱(P<0.05)。③流式细胞仪检测淋巴细胞凋亡率:单向混合淋巴细胞培养后的T淋巴细胞的凋亡率Bf组和Cf组高于Df对照组和Af组(11.25±0.78)%,(31.65±1.33)%,(5.95±0.24)%,(2.15±0.04)%,P<0.01;

体外混合淋巴细胞培养对心脏移植急性排斥反应的监测作用

目的:研究体外单向混合淋巴细胞培养作为无创的心脏移植排斥反应监测方法的可行性.方法:通过改良的单向混合淋巴细胞培养与心肌内膜活检(EMB)相对照,测定淋巴细胞活性与心肌活检病理等级的相关性.结果:改良的体外单向混合淋巴细胞培养方法与心肌内膜活检病理等级有很好的相似性.结论:改良的体外单向混合淋巴细胞培养方法可作为无创监测心脏移植排斥反应的有效手段之一.

曲古抑菌素A对小鼠混合淋巴细胞培养中淋巴细胞增殖和IL-2表达的影响

目的研究曲古抑菌素A(TSA)对小鼠体外混合淋巴细胞培养中淋巴细胞增殖及IL-2表达的影响,探讨TSA对T细胞免疫功能的影响。方法采用0.16、0.8、4、20、100、500nmol/L倍比浓度TSA作用于BALB/c及C57BL小鼠混合淋巴细胞培养体系,根据不同的OD值测定12、24、48h各浓度TSA对T淋巴细胞增殖的抑制率;相同浓度梯度TSA再作用于经丝裂霉素处理过的BALB/c淋巴细胞与C57BL淋巴细胞单向混合淋巴细胞培养体系,以环磷酰胺作对照,应用流式细胞技术观察其对IL-2表达的影响。结果TSA可以抑制小鼠混合淋巴细胞培养中T淋巴细胞的增殖,这种抑制能力表现出明显的量效及时效依赖性;TSA也显著抑制经刺激激活的小鼠T淋巴细胞的IL-2的表达,并且随着TSA浓度的升高,IL-2表达逐步下降,但与CTX比较有显著性差异(P<0.01)。结论TSA能抑制混合淋巴细胞培养中淋巴细胞的增殖,减少激活T淋巴细胞IL-2的表达,降低T细胞的免疫活性,能够减弱对外来抗原刺激的免疫应答。

siRNA干扰ADAR1表达对小鼠混合淋巴细胞培养的影响

目的:研究靶向ADAR1基因的siRNA在小鼠双向混合淋巴细胞培养中所扮演的角色.方法:将化学合成的靶向ADAR1基因的siRNA在Lipofectamine 2000介导下转染处于双向混合淋巴细胞培养试验中的小鼠淋巴细胞,观察转染组与未转染组细胞表型的变化;通过RT-PCR检测两组细胞中ADAR1 mRNA的变化;细胞计数和台盼蓝拒染法检测靶向ADAR1基因的siRNA对小鼠淋巴细胞增殖的抑制作用;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法评价转染化学合成的靶向ADAR1基因的siRNA后对小鼠淋巴细胞增殖的抑制作用.结果:在经典淋巴细胞混合培养试验中,转染靶向ADAR1基因的siRNA可以明显降低小鼠淋巴细胞内ADAR1的表达,同时ADAR1-siRNA对小鼠淋巴细胞的增殖有抑制作用.结论:在经典淋巴细胞混合培养试验中,化学合成的靶向ADAR1基因的siRNA能有效抑制ADAR1基因在小鼠淋巴细胞中的表达,并对小鼠淋巴细胞增殖有抑制作用.

猪与人致敏的淋巴细胞混合培养及其细胞因子检测

目的 :探讨临床应用异种无细胞真皮基质 (Xeno ADM)的免疫反应机理。方法 :分离正常猪、正常人和接受Xeno -ADM复合移植的临床大面积烧伤患者的外周血单个核细胞 (PBMC) ,以前两种细胞为刺激细胞、后者为反应细胞 ,通过异种混合淋巴细胞培养 (Xeno -MLC)和同种异体混合淋巴细胞培养 (Allo -MLC)、3 H TdR掺入和酶联免疫吸附分析 (ELISA)方法 ,检测不同抗原对反应细胞增殖的刺激作用及其IL - 2 (IU·ml-1)、IL - 4 (IU·ml-1)和IFN - (ng·L-1)的动态变化。结果 :Xeno MLC组淋巴细胞增殖反应和培养 4d后的IL - 2、IL - 4、IFN - 的分泌水平均明显高于Allo -MLC组和空白对照组 (P <0 .0 5～ 0 .0 1)。结论 :有辅助性T淋巴细胞 - 1(Th1)和Th2参与的细胞免疫和IL - 4诱导的体液免疫可能是异种移植物 (Xeno -ADM)免疫排异反应的特征 ;用预先致敏的淋巴细胞进行MLC 。

淋巴细胞培养法检测血中分枝杆菌及其L型的初步研究

目的建立一种快速诊断外周血分枝杆菌及其L型的培养方法,并对其进行初步评价.方法取肺癌病人和牛型分枝杆菌L型感染小鼠的血液注入1640培养基内,常规进行淋巴细胞培养,7 d后制备滴片并进行抗酸和免疫组化染色,其结果与溶血离心培养法和滴片法比较.结果7例肺癌病人外周血细胞培养法有2例查见分枝杆菌或其L型,感染小鼠心脏血检测均阳性.结论在进行淋巴细胞转化试验和染色体检查的同时,淋巴细胞培养法可用于检测血中分枝杆菌及其L型,可缩短培养时间,方法简便.

氧化锌纳米材料对小鼠混合培养的脾淋巴细胞的影响

目的评价氧化锌(ZnO)纳米材料对不同品系小鼠脾淋巴细胞混合培养的影响。方法提取BALB/C和C57BL/6小鼠脾细胞进行混合淋巴细胞培养,通过对细胞增殖率、IL-2水平的检测及电镜观察来研究氧化锌纳米材料对混合淋巴细胞培养的影响。结果氧化锌纳米材料的加入提高了淋巴细胞增殖率及上清液IL-2水平,电镜下可见纳米材料吸附于淋巴细胞表面并促进淋巴细胞间的接触。结论氧化锌纳米材料促进混合淋巴细胞培养中淋巴细胞的增殖,增强了免疫应答的强度。

人外周血淋巴细胞培养 染色体制备及影响因素

目的熟悉人外周血淋巴细胞的短期培养方法,掌握染色体的制备技术。方法以人外周血为材料,采用RPMI 1640全培养基进行体外淋巴细胞培养,对采血后细胞培养时间、秋水仙碱浓度、固定液的配制时间、滴片距离及烤片温度等影响因素进行分析。结果建立了较成熟的淋巴细胞体外培养方法及染色体制作技术。结论该方法具有取材便利、用血量少、培养简单等优点,故在临床上得到广泛应用。

人外周血淋巴细胞培养上清液中IgG、IgA、IgM的ELISA测定方法

医学基础与临床研究中,常遇到检测人外周血淋巴细胞培养上清液中IgG、IgA、IgM的问题 国外已有多种方法,国内有关方面的报道目前较少。我们用国内现有市售材料为主,依标准ELISA法改良,成功地建立了本测定方法,现报道如下。

商陆水煎剂对PNS患者外周血淋巴细胞培养TNF-α和IL-6的影响

目的 通过检测TNF α和IL 6 ,观察贵州产垂序商陆水煎剂对原发性肾病综合征 (PNS)患者外周血淋巴细胞培养的影响。方法 取PNS患者外周血分离血清和淋巴细胞 ,后者于含商陆水煎剂 (终浓度 10mg/ml)的培养液中培养 72h ,测定血清和培养上清的TNF α和IL 6。结果 PNS患者血清及培养上清中IL 6、TNF α含量均较正常人显著升高 (P <0 .0 0 1) ;加商陆水煎剂培养后上清中IL 6、TNF α含量显著下降 (P <0 .0 0 1)。结论 PNS患者血清TNF α和IL 6升高 ,贵州产垂序商陆水煎剂能使其淋巴细胞TNF α和IL 6产量明显下降。

活化的人淋巴细胞与不同猪真皮共同培养的免疫反应特征

目的探讨临床应用异种无细胞真皮基质(Xeno-ADM)的免疫反应。方法用网状Xeno-ADM与超薄自体皮片复合移植于3例大面积Ⅲ度烧伤患者,成活后4～8周分离外周血单个核细胞(PBMC),以同期单纯自体皮移植的大面积烧伤患者PBMC为对照,用新鲜小猪整张真皮片(wholexenodermis)、微粒真皮(mincedxenodermis)和MincedXeno-ADM作抗原刺激物,通过不同的猪真皮→人淋巴细胞共同培养(DLCC)、3H-TdR掺入、免疫组织化学技术,检测反应细胞增殖水平和细胞类型。结果DLCC后,新鲜小猪微粒真皮组对活化和未被活化人淋巴细胞增殖刺激作用均明显强于猪整张真皮组和Xeno-ADM组(P<0.05～0.01),增殖和浸润到真皮内的细胞以CD3+CD4+/CD45RO+T淋巴细胞为主、单核细胞和B细胞次之。结论以CD3+-CD4+/CD45RO+为主的T淋巴细胞参与可能是异种真皮移植后的免疫反应特征;真皮微血管内皮细胞ICAM-1的表达可能与诱导淋巴细胞浸润和增殖有关,与未活化的淋巴细胞相比,采用活化的淋巴细胞进行DLCC,可更真实地反映宿主对Xeno-ADM的免疫反应状况。

单次高剂量率辐射和持续低剂量率辐射对外周血淋巴细胞培养的对比研究

目的:通过外周血淋巴细胞培养,对比研究单次高剂量率外放射和持续低剂量率内放射的辐射生物效应。方法:应用直线加速器对外周血淋巴细胞分别进行1、2、4、8、16、32Gy的单次辐射;应用P-32胶体0.01、0.1、0.5、2.7MBq,分别进行持续的外周血淋巴细胞辐射,培养3d后进行制片染色,对比分析研究细胞核的形态大小和染色体形成率。结果:单次1、2、4、8、16、32Gy的外放射后,外周血淋巴细胞染色体形成率分别为4.7%、5.5%、3.6%、1.7%、0.1%、0.02%;P-32胶体0.01、0.1、0.5、2.7MBq,连续3d的内辐射后,染色体形成率分别为3.3%、2.6%、1.7%、0.004%,未辐射对照组淋巴细胞形成率为3.5%。结论:单次小剂量(1、2、4Gy)辐射对外周血淋巴细胞培养可能有促进作用,单次高剂量(8、16、32Gy)辐射有明显抑制作用,高活度的P-32胶体(0.5、2.7MBq)对外周血淋巴细胞生长有明显抑制作用,对比认为,P-32胶体0.5MBq持续3d辐射的生物效应近似单次8Gy的外放射生物效应。

正常人外伤脾多向混合淋巴细胞培养产生较高效价γ干扰素

三例正常人外伤猝死者,取其全脾细胞加无血清培养基作多向混合淋巴细胞培养,不加任何干扰素诱生剂,37℃5％CO_2中培育72h后,产生出γ干扰素(1FN-γ)的效价达10240IU/ml,比用一般诱生剂的产量高。这种多向混合淋巴细胞反应的转化率>48％。文中讨论了MLC产生IFN-Y的机理,多向MLC产生较高效价IFN-γ的原因以及与所谓混合淋巴细胸肿瘤细胞培养(MLTC)产生IFN的类型和过程的不同特点。

去除影响淋巴细胞培养生长因素的方法探讨

目的探讨影响淋巴细胞培养生长因素及去除方法。方法在正常淋巴细胞培养中去掉原培养液,加入灭菌生理水(内含有青霉素钠100 IU/mL)洗涤后再加入培养基继续培养,常规收获细胞及常规G显带油镜观察分析。结果用上述方法洗涤后收获的细胞较正常培养收获的细胞转化率、有丝分裂指数、分裂相质量均提高非常显著(P<0.01)。结论该方法可去除影响淋巴细胞培养生长的因素,保证收获细胞数量和质量,从而提高分析诊断水平,且易于推广应用。

硼替佐米对混合淋巴细胞培养体系细胞活性影响的研究

目的:探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米对混合淋巴细胞(MLC)培养体系细胞活性、细胞凋亡率的影响。方法:体外建立单向混合淋巴细胞培养体系,分别用0、2、4、8nmol/L的硼替佐米干预培养体系,在不同的时间点收集细胞,采用CCK-8法检测细胞活性、流式细胞术检测细胞凋亡率、Western印迹法检测胞内NF-κBP65表达。结果:(1)硼替佐米可明显抑制MLC体系细胞增殖(P<0.05),对MLC体系细胞活性的抑制作用表现为剂量依赖关系,8nmol/L硼替佐米作用24h后细胞活性抑制率为41.35%。(2)硼替佐米作用于细胞后细胞凋亡率增加(P<0.05),8nmol/L硼替佐米作用36h细胞凋亡率为(61.67±3.21)%。(3)硼替佐米作用后胞内NF-κBP65的表达下降(P<0.05)。结论:硼替佐米能通过阻断NF-κB的活化而抑制MLC体系细胞活性,诱导细胞凋亡。