药物对牛晶体上皮细胞生长的抑制作用

目的：研究双氯灭痛钠及环孢霉素Ａ在体外对牛晶体上皮细胞（ＢＬＥＣ）增殖的影响。方法：牛晶体上皮细胞原代培养。用第四代晶体上皮细胞种入２４ 孔板，分别加入不同浓度的双氯灭痛钠及环孢霉素Ａ，２４ ｈ 及７２ ｈ 后用Ｇｉｅｍ ｓａ 法检测细胞增殖抑制率。结果：双氯灭痛钠（≥７５ μｇ／ｍ ｌ）及环孢霉素Ａ（≥２５ μｇ／ｍ ｌ）在体外有抑制晶体上皮细胞增殖的作用。

蜘蛛毒素对食管癌细胞株作用机制的初步研究

目的探讨雷氏大疣蛛毒素对人食管癌细胞株作用机制。方法采用不同浓度的雷氏大疣蛛毒素处理食管癌细胞株TE-1,经MTT法测定蜘蛛毒素对人食管癌细胞株TE-1增殖的影响,透射电镜观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞增殖周期的分布,免疫组化法与ELISA法检测经蜘蛛毒素作用食管癌细胞株TE-1的VEGF表达情况。结果雷氏大疣蛛毒素能够抑制人食管癌细胞株TE-1的增殖,形态学观察到凋亡现象,流式细胞仪检测显示蜘蛛毒素作用后凋亡峰明显,出现G2/M期阻滞,对VEGF表达有抑制作用。结论雷氏大疣蛛毒素可抑制食管癌细胞株TE-1的增殖和VEGF表达,诱导凋亡,有可能是一种具有抗肿瘤作用的天然药物,其抗肿瘤作用的机制有待进一步研究。

5-氮胞苷对EBV阳性胃癌细胞系特异性去甲基作用的体外实验探讨

目的:探讨去甲基化试剂5-氮胞苷对EBV阳性胃癌细胞系的特异性去甲基作用。方法:用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和PCR-southern检测不同剂量5-氮胞苷处理前后EBV启动子的活性,并用Westernblot检测EBV相关基因的表达。结果:5-氮胞苷处理后EBV阳性胃癌细胞系中被甲基化失活的C启动子重新活化,并表达LMP1(潜伏性膜蛋白1),且呈剂量依赖性。结论:5-氮胞苷可能对EBV阳性胃癌的特异性治疗有帮助。

替尼泊甙和顺铂对胃癌BGC-823细胞抑制作用

目的：探讨顺铂和替尼泊甙联合对胃癌细胞BGC-823的体外抑制和诱导细胞凋亡的作用。方法：MTT法测定DDP，VM-26单药及联合用药对BGC-823的体外抑制作用；利用流式细胞仪测定细胞的凋亡。结果：1.250-20.000μg／ml VM-26抑制率为15.99％-80.83％，经1.250μg／ml VM-26处理后凋亡率在0、12、24、48h分别为3.90％、4.42％、7.60％、17.70％；从1.563-25.000μg／ml DDP抑制率为11.71％-82.65％；经1.563μg／ml DDP处理后凋亡率0、12、24、48h分别为3.90％、6.13%、14.48％、15.3%；联合用药时抑制率为49.37％-91.12％，凋亡率为3.90%、11.01％、14.75％、46.11％。联合用药指数（Combination Index，CI）为0.430。结论：DDP与VM-26单药可抑制胃癌细胞BGC-823的生长，诱导细胞凋亡；DDP与VM-26联合同时应用在胃癌细胞上产生协同作用。

肉桂醛对肝癌HepG2细胞p21和CDK4蛋白的影响

目的检测肉桂醛对肝癌HepG2细胞p21和细胞周期依赖性蛋白激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)蛋白表达的影响。方法肉桂醛(3.13、1.56、0.78、0.39、0.20、0.10 g/L)作用肝癌HepG2细胞后,MTT比色法检测HepG2细胞增殖活性和半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))。流式细胞术检测肉桂醛对HepG2细胞凋亡影响。免疫荧光法检测HepG2细胞p21和CDK4蛋白的表达。结果肉桂醛能抑制HepG2细胞增殖,且呈剂量和时间依赖性,24小时、48小时和72小时IC_(50)值分别为0.68、0.45、0.35 g/L(P<0.01)。肉桂醛组(0.900、0.450、0.225 g/L)肝癌HepG2细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。肉桂醛能增加p21蛋白和降低CDK4蛋白在HepG2细胞中的表达,各浓度肉桂醛组的p21、CDK4蛋白表达与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论肉桂醛可抑制人肝癌细胞HepG2的增殖,可能与调节p21和CDK4的蛋白表达有关。

肿瘤患者外周血淋巴细胞与肿瘤细胞体外化疗药敏研究

目的 :研究肿瘤患者外周血淋巴细胞 ( peripheralbloodlymphocytes ,PBL )的体外化疗药物敏感性 ,以及与肿瘤细胞化疗药敏的相关性。方法 :采用MTT法测定了 14 2例肿瘤患者PBL及其肿瘤细胞对 17种临床常用化疗药物的敏感性。结果 :神经胶质瘤患者PBL与肿瘤细胞对15种化疗药的敏感性相关性好 ,差异无统计学意义 ,P >0 0 5 ;骨肉瘤患者PBL与肿瘤细胞对 13种化疗药的敏感性相关性好 ,差异无统计学意义 ,P >0 0 5 ;乳腺癌患者PBL和肿瘤细胞对 12种化疗药物的敏感性差异有统计学意义 ,P <0 0 5或P<0 0 1。结论 :神经胶质瘤和骨肉瘤患者PBL对化疗药物的敏感性具有良好的正相关性 。

As_2S_2诱导肺腺癌细胞凋亡的实验研究

目的 观察中药雄黄的主要成分二硫化二砷 (As2 S2 )诱导肺腺癌细胞 SPC- A- 1的促凋亡作用及增殖抑制作用。方法 采用四氮唑盐 (MTT)法检测 As2 S2 对肺腺癌细胞 SPC- A- 1的增殖抑制作用 ,As2 S2 选取 0 .12 5mm ol/ L～ 2 .0 0 0 mm ol/ L 五个浓度 ,分 12～ 4 8小时四个时间点干预细胞 ;透射电镜观察细胞的形态变化和凋亡情况 ;琼脂糖凝胶电泳观察是否出现凋亡的梯形条带 ;流式细胞仪定量检测细胞凋亡率和细胞周期。结果 (1) MTT结果证实 As2 S2 可抑制 SPC- A- 1细胞的生长 ,且在一定范围内抑制率有浓度和时间依赖性 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ;(2 )取 As2 S2 0 .5 0 0 mm ol/ L、1.0 0 0 m mol/ L 和 2 .0 0 0 mm ol/ L 作用 SPC- A- 1细胞 ,电镜下细胞体积缩小 ,细胞皱缩 ,染色体凝集 ,核碎裂 ,核固缩等。 (3)不同浓度 As2 S2 作用 SPC- A- 1细胞后 ,低浓度短时间未出现凋亡特征性的梯形条带 ,随着浓度升高 ,时间延长 (在一定范围内 )可以看到凋亡特征性的梯形电泳带。 (4)流式细胞仪测定 :1.0 0 0 m mol/ L 和 2 .0 0 0 mm ol/ L 浓度干预 2 4小时 ,可看到凋亡细胞群 ,即 DNA含量明显低于 G1 期细胞峰 ,凋亡量分别为 (5 .3± 0 .8) %和 (13.3± 0 .9) % (P<0 .0 1) ,呈一定的量效关系 ;

抗p185^(erbB2)单抗的制备及其生物学活性

目的 :制备抗 p185 erbB2 单克隆抗体 ,并研究其对表达 p185 erbB2 肿瘤细胞的结合及生长抑制作用。为后续工作奠定基础。方法 :用NIH3T3 erbB2细胞免疫BALB/c小鼠 ,制备抗p185 erbB2 单克隆抗体。经ELISA、免疫沉淀、Westernblot及免疫组化检测单抗的结合特异性。并用MTT比色法检测所获抗体对表达 p185 erbB2 肿瘤细胞的生长抑制作用。结果 :经筛选获得 1株对表达 p185 erbB2 细胞反应阳性 ,不表达 p185 erbB2 细胞反应阴性的单克隆抗体1H3 ;免疫沉淀、Westernblot均表明 1H3可与p185 erbB2 分子特异性结合 ;免疫组化结果显示 1H3对c erbB2阳性的乳癌组织呈特异性着染 ;MTT比色法检测表明 1H3对不同的 p185 erbB2 阳性肿瘤细胞均有不同程度的生长抑制作用。结论 :单克隆抗体 1H3能与p185 erbB2 特异结合 ,并可不同程度地抑制NIH3T3 erbB2或SKBR3细胞的生长 ,除可应用于临床对 p185 erbB2 的检测外 ,尚具有肿瘤生物治疗的潜在应用开发价值。

Genistein靶向多肽偶联物的制备及体外抑瘤活性研究

目的:制备Genistein靶向多肽偶联物(GEN-P),增强Genistein的抑瘤活性。方法:采用固相法设计、合成能够与组织因子(TF)特异性结合的配体分子-FHS001,凝血酶原时间(PT)法测定其凝血活性,荧光显微镜直接检测其与高表达TF的人乳腺癌细胞株MCF-7的结合。通过异型双功能交联剂Sul-fo-SANPAH将FHS001与Genistein交联,制备偶联物GEN-P;MTT法检测其对MCF-7的杀伤作用。结果:合成的FHS001多肽能够与高表达TF的MCF-7细胞特异性结合且无明显的凝血活性。GEN-P偶联物在0.2～200.0μmol/L的浓度范围内对MCF-7细胞均有不同程度的增殖抑制作用,作用6h后抑制率为16.3%～83.1%,且呈一定的剂量依赖性。GEN-P和Genistein对MCF-7细胞的IC50分别为2.0和120μmol/L,GEN-P效果明显优于游离药物Genistein。结论:与FHS001偶联后Genistein的抑瘤活性明显增强,有希望进一步应用于癌症的治疗。

改良莪桃汤抗BALB/C裸鼠人肺腺癌机理的研究

目的 :探讨改良莪桃汤抗人肺腺癌的作用机理。方法 :采用 BAL B/ C裸鼠人肺腺癌模型 ,将 32只裸鼠随机分成模型组 ,改良莪桃汤低、中、高剂量组。采用免疫组化 SP法检测 VEGF、TSP- 1、Bcl- 2、P5 3基因的表达。观察改良莪桃汤对人肺腺癌细胞凋亡的影响及对血管生成的抑制作用。结果 :改良莪桃汤各组均可见肿瘤组织大片或多灶性坏死。模型组 VEGF呈强阳性表达 ,TSP- 1呈弱阳性表达 ;改服良莪桃汤各组 VEGF阳性表达明显降低 ,TSP- 1有所升高 ;而模型组 Bcl- 2、P5 3蛋白表达明显升高 ,服药各组 Bcl- 2、P5 3蛋白表达明显下降。结论 :改良莪桃汤可通过诱导肿瘤细胞凋亡及抑制肿瘤血管生成 ,发挥其抗肿瘤作用。

非甾体类消炎药抑制结肠癌细胞株细胞生长的实验研究

目的研究非甾体类消炎药(NASIDs)通过产生一氧化氮的亚硝基谷胱甘肽(GSNO)对结肠癌细胞生长的影响及其机制。方法采用细胞生长曲线和流式细胞仪方法研究细胞凋亡,竞争酶联免疫分析测定细胞培养上清PGE2的环氧化酶2(PGE2)表达水平,W estern B lot法检测COX-1/COX-2蛋白表达。结果在不同时间和浓度梯度中,GSNO处理可增加PGE2的产量。用5 0 0μmol/L处理4 8 h后,COX-1和COX-2的蛋白表达水平增加。NASIDs可以阻断PGE2的产生,但对于GSNO诱导的细胞生长抑制无影响。结论GSNO可促进细胞产生PGE2增加,并诱导COX-1和COX-2蛋白呈时间依赖和剂量依赖性表达;高浓度的GSNO可抑制细胞生长,并诱导3种细胞株凋亡,而不受COX-2表达及其活性的影响。NAD Is能阻断PEG2产生,但对于GSNO诱导的结肠癌细胞株生长抑制并无协同作用。

ATP-TCA技术指导表浅性膀胱癌灌注化疗的可行性研究

目的:探讨ATP生物荧光体外肿瘤药敏检测技术(ATP-TCA)指导膀胱癌术后灌注化疗的可行性。方法:对46例新鲜膀胱癌标本进行肿瘤细胞分离,原代培养;应用ATP-TCA技术检测肿瘤标本对三种常用化疗药物[吡柔比星(THP)、丝裂霉素(MMC)、表阿霉素(EPI)]的敏感率和耐药率。结果:46例标本中,THP、MMC和EPI的敏感率分别为82·46%、63·04%和39·13%,肿瘤细胞对三种化疗药物的敏感率和耐药率差异有统计学意义,P<0·01;26例相同组织学类型和分化程度(T1G2)的膀胱癌中,THP、MMC和EPI的敏感率分别是88·61%、61·54%和24·62%,敏感率和耐药率差异仍有统计学意义,P<0·01。膀胱肿瘤对化疗药物的敏感性存在个体差异。结论:应用ATP-TCA技术测出的药敏结果能够反映个体对化疗药物的敏感性,可以作为选择灌注化疗用药的理论基础,指导临床用药,进行个体化治疗。

丹参酮ⅡA对人胃癌细胞SGC7901增殖凋亡的影响及其与COX-2表达的关系

【目的】观察丹参酮ⅡA对胃癌细胞增殖的影响及其与环氧合酶-2（COX-2）表达的关系。【方法】体外培养胃癌细胞株SGC7901，经丹参酮ⅡA作用后，采用四唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡，免疫细胞化学sABC法检测COX-2蛋白表达，放射免疫法检测前列腺素E2（PGE2）含量。【结果】丹参酮ⅡA对胃癌细胞的生长有明显的抑制作用，并呈剂量依赖性。以0．5mg／L作用终浓度抑制作用最明显，其48h的抑制率为71．1％，与对照组相比差异有显著性（P〈0．01）；5mg／L丹参酮ⅡA作用后，随时间的延长，凋亡率逐渐升高，48h达到高峰，随后逐渐下降，与对照组比较，各处理组都有显著性差异（P〈0．05）；丹参酮作用组胃癌细胞COX-2表达明显减少，其培养液中PGE2的产生量下降，与对照组相比差异均有显著性（P〈0．01）。【结论】丹参酮ⅡA可能是通过下调COX-2mRNA的表达水平发挥其对胃癌细胞生长抑制及促进凋亡作用。

氟硼二吡咯类光敏剂的制备及对肿瘤细胞的光动力学影响

目的:设计合成两种不同极性取代基的氟硼二吡咯类光敏剂,观察其理化特性和在不同极性条件下的光动力学效应。方法:通过苯甲醛与吡咯活泼氢的缩合反应以及亲电取代反应制备氟硼二吡咯类光敏剂碘代羟基氟硼二吡咯(BPOI)和碘代甲酸甲酯氟硼二吡咯(BPCI)。通过核磁共振氢谱、傅里叶红外光谱和紫外可见吸收光谱、荧光发射光谱对该光敏剂进行理化性质表征。通过1,3-二苯基异苯并呋喃与2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐检测该光敏剂活性氧产生能力,并采用MTT法检测其对肿瘤细胞的光动力学效应。结果:核磁共振氢谱和傅里叶红外光谱证实成功合成了两种不同取代基的氟硼二吡咯类光敏剂BPOI和BPCI。两种材料具有低毒性,且易被细胞摄取。meso位为给电子取代基的氟硼二吡咯类光敏剂BPOI产生活性氧的能力受溶剂极性影响大,而weso位为吸电子取代基的氟硼二吡咯类光敏剂BPCI则不受溶剂极性影响。结论:给电子取代基的氟硼二吡咯类光敏剂BPOI在高极性环境中产生活性氧速率慢,而在低极性环境中产生活性氧的能力大大增强,有望用于肿瘤细胞内的环境选择性光动力治疗。

TGF-β介导间充质干细胞对肝癌干细胞的调控

目的观察间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对SMMC-7721肝癌细胞中肿瘤干细胞的调控作用及其相关机制。方法将MSCs与肝癌细胞混合注入裸鼠体内,观察种植瘤生成情况。用MSCs条件培养上清体外培养肝癌细胞,流式细胞仪检测其CD133+细胞比例改变情况。ELISA检测MSCs条件培养上清中TGF-β的浓度。TGF-β处理肝癌细胞,流式细胞仪检测其CD133+细胞比例改变情况。结果裸鼠种植瘤实验显示MSCs在体内可以促进肝癌生成。体外用MSCs条件培养上清培养SMMC-7721肝癌细胞株可上调其中CD133+细胞比例,呈时间依赖性。MSCs分泌TGF-β至培养上清,TGF-β处理肝癌细胞可上调其中CD133+细胞的比例,并亦呈时间依赖性。结论 MSCs对肝癌干细胞具有调控作用,TGF-β参与介导MSCs的这一作用。

阿比特龙联合恩度对人激素敏感性前列腺癌细胞增殖及VEGF-A和PSA水平的影响

目的探讨阿比特龙联合恩度对前列腺癌LNCaP细胞增殖及培养液上清中血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGF-A)及前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)水平的影响。方法将体外培养的LNCaP细胞分为无药物干预的对照组及不同浓度阿比特龙(0.1、1、10和100μmol/L)、恩度(0.1、1、10及100μL/mL)单药和10μmol/L阿比特龙联合10μL/mL恩度组。应用噻唑蓝比色法检测药物对LNCaP细胞的增殖抑制情况,酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测阿比特龙、恩度单药及联合组LNCaP细胞培养液上清中VEGF-A及PSA的水平。结果与对照组比较,作用48 h后10、100μmol/L阿比特龙与10、100μL/mL恩度单药对LNCaP细胞的增殖均具有抑制作用(均P<0.05),呈浓度依赖性;10μmol/L阿比特龙联合10μL/mL恩度组较10μmol/L阿比特龙组及10μL/mL恩度组对LNCaP细胞的增殖抑制作用更强(均P<0.05);与对照组比较,作用48 h后10、100μmol/L阿比特龙与10、100μL/mL恩度单药干预LNCaP细胞后,培养液上清中VEGF-A水平均降低(均P<0.05);与对照组比较,作用48 h后1、10、100μmol/L阿比特龙与10、100μL/mL恩度单药干预LNCaP细胞后,培养液上清中PSA水平均降低(均P<0.05),其抑制效应均呈浓度依赖性。结论阿比特龙及恩度对LNCaP细胞增殖具有抑制作用,呈浓度依赖性,且两药联合对细胞增殖抑制作用更强。阿比特龙及恩度对LNCaP细胞分泌VEGF-A及PSA均具有抑制作用,呈浓度依赖性。

FK866对非小细胞肺癌细胞迁移的影响

目的:探讨低浓度烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)抑制剂FK866对人非小细胞肺癌细胞株(A549细胞)迁移的影响及作用机制。方法:MTT法检测不同浓度FK866对A549细胞增殖的影响;划痕实验检测1.0 nmol/L和10.0 nmol/L FK866对A549细胞迁移的影响;实时定量RT-PCR检测上皮间质转化相关蛋白上皮钙黏素和波形蛋白mRNA的表达量;蛋白质印迹法检测细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)和磷酸化ERK1/2蛋白的表达量。结果:FK866作用时间越长、浓度越高,对A549细胞增殖的抑制作用越明显。FK866作用72 h时的半抑制浓度(IC50)为9.55 nmol/L。以1.0、10.0 nmol/L的FK866预处理细胞48 h,划痕后继续给药48 h,两种浓度的FK866均能抑制A549细胞迁移;如不进行预处理,仅10.0 nmol/L浓度的FK866对划痕愈合有一定的抑制作用;1.0 nmol/L的FK866处理细胞72 h可上调上皮钙黏素和波形蛋白mRNA表达,并激活ERK1/2;以1.0 mmol/L的烟酰胺单核苷酸(NMN)或10.0μmol/L的ERK1/2抑制剂U0126预处理,能够逆转FK866引起的上皮钙黏素和波形蛋白表达上调。结论:低浓度FK866能够通过减少细胞内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和激活ERK1/2,增加上皮钙黏素表达,进而抑制细胞迁移,对肿瘤转移可能有一定的抑制作用;但其同时促进了波形蛋白的表达,不利于肿瘤的治疗。

姜黄素对人胆囊癌细胞株QBC939增殖和凋亡的影响

目的探讨姜黄素对人胆囊癌细胞株QBC939增殖及凋亡的影响,为胆囊癌的临床治疗提供新的思路。方法姜黄素与QBC939共同孵育后,采用MTT方法测定QBC939的增殖情况并计算抑制率,用流式细胞仪评估凋亡率,同时以蛋白免疫印迹(Western blot)方法检测姜黄素对凋亡相关蛋白Caspase 3表达水平的影响。数据比较采用t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果姜黄素处理组细胞生长明显受抑并存在显著凋亡,Western blot结果显示Cas-pase 3表达量远大于对照组。结论姜黄素可显著抑制胆囊癌细胞株QBC939的增殖,这种变化可能与其诱导的Cas-pase 3的高表达及促进凋亡有关。

微囊化人内皮抑素／293细胞生物学性状及其对人脐静脉内皮细胞增生的抑制作用

目的观察不同细胞密度的微囊化人内皮抑素／293（hES／293）细胞生物学性状及其对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增生的抑制作用。方法采用聚电解质络合法制作不同密度微囊化hES／293细胞，分为1×10^4个／ml组（A组）、1×10^6个／ml组（B组）、1×10^8个／ml组（C组）；同时将微囊内不包裹hES／293细胞者设为对照组（D组）；每组6个样本。培养后1、3、7、14、35d，锥虫蓝染色计数微囊囊内细胞总数、活细胞数和存活率；噻唑蓝（MTT）比色法检测各组微囊化hES／293细胞的生长情况；酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测微囊化hES／293细胞囊外内皮抑素（ES）蛋白释放量。取生长状态良好的HUVEC分别与A、B、C、D组微囊化hES／293细胞共同培养。于共同培养后24、72、120h，MTT比色法检测微囊化hES／293细胞对HUVEC增生的抑制作用。结果A、B、C组微囊囊内hES／293细胞总数和活细胞数均随时间延长而增多，囊内细胞存活率于培养后3d最高。A、B、C组微囊化hES／293细胞生长速率比较，培养后1d时组间差异无统计学意义（P〉0．05）；培养后3d，A组较B、C组高，差异有统计学意义（P〈0．05）；培养后7、14、35d，B组较A、C组高，差异有统计学意义（P〈0．05）。A、B、C组微囊化hES／293细胞囊外ES蛋白释放量比较，培养后1、14d时组间差异无统计学意义（P〉0．05）；培养后3d，A组较B、C组高，差异有统计学意义（P〈0．05）；培养后7、35d，B组较A组高，差异有统计学意义（P〈0．05）。共同培养后24h，A、B、C组对HUVEC均未表现出抑制作用（P〉0．05）；共同培养后72、120h，A、B、C组均明显抑制HUVEC增生，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论细胞密度为1×10^6个／ml的微囊化hES／293细胞生长稳定、存活率较高，可持续稳定的释放ES蛋白。不同密度的微囊化hES／293细胞均可抑制HUVEC增生。