维拉帕米对培养的人视网膜色素上皮细胞增殖和DNA合成的影响

目的:观察钙通道阻滞剂维拉帕米(verapamil)对培养的人视网膜色素上皮细胞(human retinalpig-ment epithelium,hRPE)增殖和DNA合成的影响。方法:含不同浓度维拉帕米的条件培养液作用于培养的hRPE细胞后,利用细胞计数和MTT比色试验观察维拉帕米对培养的hRPE细胞的作用,同时采用氚标胸腺嘧啶核苷(3H-thymidine,3H-TdR)掺入试验测定维拉帕米对培养的hRPE细胞DNA合成的影响。结果:维拉帕米在实验所设的浓度范围均能抑制培养的hRPE细胞的增殖和DNA合成,在浓度为10,50,100,200μm ol/L时其细胞增殖抑制率分别为:26.72%,37.25%,58.21%,79.54%(P<0.01);cpm值分别为对照组的0.81,0.61,0.52,0.44倍(P<0.01)。结论:维拉帕米对培养的hRPE细胞增殖和DNA合成具有抑制作用。

YVAD-cmK及DEVD-CHO对培养的人视网膜色素上皮细胞光损伤的影响

目的 观察半胱天冬酶(caspase-3)选择性抑制剂天冬氨酸-谷氨酸-缬氨酸-天冬氨酰胺醛(Asp-Glu-Val-Asp-CHO,DEVD-CHO),及caspase-1选择性抑制剂酪氨酸-缬氨酸-丙氨酸-天冬氨酰胺(Tyr-Val-Ala-Asp-cmK,YVAD-cmK)对可见光诱导的培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的影响。方法 用(2000±500)lx的白色荧光灯光源,照射培养的人RPE细胞。在培养液中加入YVAD-cmK和DEVD-CHO,利用荧光素标记的连接素V/碘化丙锭双染色流式细胞测定观察RPE细胞的凋亡情况。结果 本研究模型下,DEVD-CHO预处理组的细胞凋亡及坏死与无光照组相比,差异无显著性(P>0.05),与光照组及YVAD-cmK预处理组相比,细胞存活数增高,差异有显著性(P<0.05)。而YVAD-cmK组与无光照组比较,其结果与单纯光照组一样,表现出细胞的明显损伤(P<0.05)。结论 可见光诱导培养的人RPE细胞凋亡的发生机制中,可能不涉及casrpase-1的作用。外源性的caspase-3抑制剂(DEVD-CHO)对RPE细胞光性损伤有一定的保护作用。

微波辐射对培养的人视网膜色素上皮细胞基因转录的影响

目的 研究微波辐射与未辐射人视网膜色素上皮细胞 (h TERT- RPE1)应激和凋亡相关基因转录的差异 .方法 应用基因芯片技术对 2 4 5 0 MHz微波辐射、未辐射的视网膜色素上皮细胞的 m RNA进行检测 .结果 在 10 1条有关应激和凋亡的目的基因中发现有 3条基因转录增加 ,有 2条基因转录降低 .

高浓度葡萄糖对培养的人视网膜色素上皮细胞细胞表面黏附分子-1的影响

目的:研究高浓度葡萄糖对体外培养人视网膜色素上皮(RPE)细胞细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法:用免疫荧光法检测5.6mmol/L和30.0mmol/L葡萄糖作用1,2,3d后hRPE细胞表面ICAM-1表达量,MTT方法检测两种浓度葡萄糖作用下48hhRPE表面黏附白细胞的数量。结果:30.0mmol/L葡萄糖作用1,2,3d后hRPE细胞表面荧光着色密度分别为5.6mmol/L葡萄糖作用下荧光着色的2.4,3.8,4.0倍。30.0mmol/L葡萄糖作用48h后hRPE细胞表面黏附的白细胞数量是5.6mmol/L葡萄糖组的2.34倍,有统计学显著性差异(P<0.05)。结论:高糖可以促进体外培养hRPE细胞的ICAM-1表达,提示RPE细胞在高糖作用下可能参与了糖尿病视网膜病变的早期病理反应。

高糖对体外培养的人视网膜色素上皮细胞HSP47表达的影响

目的探讨高浓度葡萄糖对体外培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞热休克蛋白47(HSP47)表达的影响。方法RPE细胞分别在5.56mmol/L葡萄糖(对照组)以及25mmol/L葡萄糖(高糖组)的培养条件下,通过RT-PCR检测HSP47mRNA的表达,使用Western blot检测其蛋白水平。结果高糖条件下,HSP47mRNA表达水平显著增加(P<0.05),蛋白水平亦显著增加(P<0.05)。结论HSP47作为一种胶原特异的分子伴侣,在高糖条件下RPE细胞内表达的增加可能是导致增生型糖尿病视网膜病变(PDR)发展的重要因素之一。

金丝桃素对培养的人视网膜色素上皮细胞钙离子内流的抑制(英文)

目的 研究蛋白激酶 C(PKC)抑制剂金丝桃素对视网膜色素上皮细胞 (RPE cells)钙离子信号共聚成像的影响 .方法 使用钙荧光指示剂 fluo- 3AM和激光扫描共聚焦显微镜 (L SCM) ,分析在 10 0 nmol·L- 1佛波酯 (PMA)和 (或 )5个浓度的金丝桃素 (1,2 ,3,4和 5μmol· L- 1 )刺激时培养的人 RPE细胞的钙离子信号的变化 .结果 RPE细胞荧光着色很强 ,遍布整个细胞 ,其中细胞核比细胞质更强 .只用PMA或金丝桃素刺激时 ,可以观察到荧光强度迅速下降 ,并且 5个浓度金丝桃素之间的下降曲线无明显差异 .用 PMA预先处理细胞 2 4h后 ,再给予金丝桃素刺激发现荧光强度并没有进一步下降 .结论 fluo- 3AM是人 RPE细胞钙离子良好的指示剂 ,金丝桃素能强力抑制钙离子内流 ,它作为治疗增殖性玻璃体视网膜病变的潜在药物可能是因为能抑制 PKC活性和钙离子内流 .

高糖联合低氧对体外培养的人视网膜色素上皮细胞HIF-1ɑ及VEGF表达的影响

目的探讨高糖及高糖联合低氧对体外培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-lα,HIF-1α)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法通过使用化学低氧诱导剂CoCl2模拟RPE细胞低氧环境,研究RPE细胞分别在5.56 mmol/L葡萄糖(对照组)5、.56 mmol/L葡萄糖+150μmol/L CoCl2(低氧组)、25 mmol/L葡萄糖(高糖组)以及25 mmol/L葡萄糖+150μmol/L CoCl2(联合组)的培养条件下,通过反转录PCR检测HIF-1α及VEGF mRNA的表达,Western blot分析检测HIF-1α及VEGF蛋白水平。结果与对照组比较,高糖组RPE细胞HIF-1αmRNA表达无显著性差异,而高糖组可检测出微量的HIF-1α蛋白,对照组未能检测出HIF-1α蛋白;且高糖组VEGF mRNA表达和蛋白合成均增加(均P<0.05)。与低氧组比较,联合组RPE细胞HIF-1αmRNA表达无显著性差异,但HIF-1α蛋白水平明显高于低氧组(P<0.05);同时VEGF mRNA表达和蛋白合成也均明显增加(均P<0.05)。结论高糖对体外培养的人RPE细胞HIF-1α的影响是促进蛋白的合成,且对HIF-1α蛋白有一定的稳定作用,在联合低氧条件下高糖促进合成的HIF-1α蛋白更加稳定,同时也促进VEGF的表达增加。

羊膜对培养的人视网膜色素上皮细胞增殖影响的实验研究

目的 观察羊膜是否对视网膜色素上皮细胞 (Retinalpigmentepithelial ,RPE)的生长有影响 ,探讨羊膜用于治疗增殖性玻璃体视网膜病变 (Proliferativevitreoretinopathy ,PVR)的潜在可能性。方法 运用MTT比色法 ,观察羊膜匀浆在不同浓度 (4 0、80、160 μg ml)及不同作用时相点 (2 4、48、96h)对人RPE增殖的影响。 结果 ①在第 2 4小时 ,3个浓度羊膜匀浆均对人RPE增殖起抑制作用 ,而且随浓度增加抑制作用减弱 ,抑制率 (5 0 774%、2 7 3 87%、14 80 2 % )间相差显著 (P <0 0 5 ) ;在第 48、96小时 ,羊膜匀浆在低浓度时 ,对人RPE增殖起抑制作用 ,而在中、高浓度为促增殖作用 ,其中在第 48小时抑制率 (4 494%、-0 944 %、-3 693 % )间相差不显著 (P >0 0 5 ) ,在第 96小时时抑制率 (8 3 88%、-9 42 5 %、-17 65 1% )间相差显著 (P <0 0 5 )。②羊膜匀浆浓度为 40 μg ml ,各时相点对人RPE均为抑制增殖 ,抑制率间相差非常显著 (P <0 0 1) ;在浓度为 80 μg ml、160 μg ml时 ,随着作用时间延长 ,羊膜匀浆对人RPE增殖的作用逐渐由抑制变为促进作用 ,抑制率间相差显著 (P <0 0 5 )。结论 羊膜匀浆在低浓度 ,短时间内对人RPE增殖有抑制作用 ,而在高浓度、长时间则对RPE增殖有促进作用。羊膜匀浆用?

阿霉素、5-Fu、三尖杉酯碱及去炎松对体外培养的人视网膜色素上皮细胞的抑制

应用3H-胸腺嘧啶核苷（3H－TdR）掺入及液体闪烁测量技术，观察不同浓度的阿霉素，5-氟尿嘧啶（5－Fu）、三尖杉酯碱及去炎松对体外培养的人视网膜色素上皮细胞（RPE）增殖的抑制作用。结果；阿霉素在2～32ng／ml时，对RPE细胞抑制率为85～77.2％，ID50为12ng／ml；5－Fu在0.2～3．2μg／ml时，对RPE细胞抑制率为14．5～81．7％，ID50为0．6μg／ml；三尖杉酯碱在2．5～40ng／ml时，抑制率为18．5～94．1％，ID50为4.5ng／ml；去炎松在200～350μg／ml时对RPE细胞抑制率为37．9～53．5％，ID50为340μg／ml。结论：阿霉素、5－Fu、三尖杉酯碱及去炎松能有效地抑制RPE细胞的增殖。

曲安奈德对培养的人视网膜色素上皮细胞的毒性作用

目的探讨曲安奈德(triamcinolone acetonide,TA)对视网膜色素上皮细胞可能潜在的毒性作用。方法质量浓度0mg·L-1、10mg·L-1、30mg·L-1、300mg·L-1TA分别作用ARPE19细胞24h和72h后通过TUNEL和电镜观察2种方法从形态和功能方面观察TA对ARPE19细胞生长的影响。结果(1)TUNEL法:质量浓度10mg·L-1TA不影响ARPE19细胞的生长,但是随着质量浓度增大,细胞凋亡程度逐渐增强(t=2.921,P<0.01),随着时间延长,ARPE19细胞的凋亡指数逐渐增大(t=2.306,P<0.01);(2)电镜:质量浓度10mg·L-1TA作用后ARPE19细胞状态良好,但是随着质量浓度增加,细胞走向凋亡的形态越明显,微绒毛消失,核染色质边集,凋亡小体形成。结论一定浓度的TA能够诱导视网膜色素上皮细胞的凋亡,而且这种凋亡效应呈浓度和时间依赖关系。因此,TA对视网膜色素上皮细胞可能有潜在毒性。

曲安奈德对体外培养的人视网膜色素上皮细胞HSP47表达的影响

目的探讨曲安奈德(TA)对体外培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞热休克蛋白47(HSP47)表达的影响。方法研究RPE细胞分别在0、50、200μg/mLTA的培养条件下,通过RT-PCR检测HSP47 mRNA的表达,使用Western blot检测其蛋白水平。结果与0μg/mLTA组比较,50μg/mL及200μg/mLTA组HSP47 mRNA和蛋白的表达量明显下降(P<0.05),蛋白水平亦明显下降(P<0.05)。结论HSP47对胶原的成熟起着重要作用,TA能有效抑制人RPE细胞HSP47的表达,可能是其防治增生性玻璃体视网膜病变(PVR)及增生型糖尿病视网膜病变(PDR)的一个重要机制。

苏拉明对体外培养的人视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的 观察苏拉明(suramin)对体外培养的人视网膜色素上皮细胞(retinalpigment epithelial cells)生长、增殖的影响。方法 以300mg·L^(-1)苏拉明作用于培养的视网膜色素上皮细胞,于不同的时间点行细胞计数,绘制生长曲线,台盼蓝染色判定细胞的活性;将不同浓度的苏拉明(0、100、200、300、400mg·L^(-1))加入RPE细胞培养液,72h后用四甲基唑盐(MTT)比色法测吸光值A,并计算不同浓度条件下的细胞增殖抑制率;流式细胞技术检测细胞周期变化。结果 苏拉明在所设浓度内均抑制RPE细胞增殖,并存在时间-效应及剂量-效应关系,最大增殖抑制率约78％,72h时IC_(50)为272mg·L^(-1)。FCM示suramin使G_2/M期细胞增加了14.2％。结论 苏拉明能抑制体外培养的人视网膜色素上皮细胞增殖,可作为防治增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的候选药物作进一步研究。

Rac1在缺氧条件下培养的人视网膜色素上皮细胞的表达

目的观察Rac1在缺氧条件下培养的视网膜色素上皮(retinal pigment epitheli-um,RPE)细胞的表达,以探讨其在脉络膜新生血管形成中可能的作用。方法将人RPE细胞在含有200μmol·L-1CoCl2的培养液内分别培养0.5h、1h、2h、4h、8h、12h和24h。运用免疫细胞化学方法及Western-blot技术检测缺氧条件下RPE细胞Rac1的表达及时相变化。常氧状态下培养的RPE细胞作为对照。结果缺氧条件下RPE细胞早期即有Rac1的表达,主要位于胞浆,随着缺氧时间的延长,阳性表达量上调,在8h达到高峰,12h开始下降。与常氧组对照,差异有统计学意义(P<0.05)。Western-blot分析结果与免疫细胞化学染色结果一致。结论Rac1在缺氧早期的RPE细胞中呈瞬时高表达,可能与脉络膜新生血管形成有关。

缺氧对体外培养的人视网膜色素上皮细胞热休克蛋白47表达的影响

目的:探讨缺氧对体外培养的人视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium,RPE)细胞热休克蛋白47(heatshockprotein47,HSP47)表达的影响。方法:培养的人RPE细胞分为两组:缺氧组使用化学缺氧诱导剂CoCl2模拟RPE细胞缺氧环境来培养人RPE细胞,对照组置入正常环境中培养。采用半定量RT-PCR检测人RPE细胞中HSP47mRNA的表达,Westernblot蛋白印迹分析检测人RPE细胞中蛋白水平。结果:缺氧组AHSP47/Aβ-actin比值为1.46±0.15与对照组比值0.94±0.13比较,差异有显著意义(P<0.05)。同时缺氧组HSP47蛋白含量平均A值为728.03±38.15显著高于正常对照组平均A值571.47±26.95,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HSP47在缺氧状态下异常高表达。

转化生长因子β_1调节培养的人视网膜色素上皮细胞分泌基质金属蛋白酶-2

目的研究转化生长因子β1(TGF-β1)对培养的人视网膜色素上皮(HRPE)细胞分泌基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的调节作用.方法 3～4代培养的人视网膜色素上皮细胞,经不同浓度的TGF-β1(0.01、0.1、1、10 ng/ml)处理,36 h后收集条件培养基,或经TGF-β1作用不同时间(24、36、48 h)后收集条件培养基,采用明胶酶谱分析方法定量检测HRPE细胞上清液中MMP-2的活性水平.结果培养的HRPE细胞上清液中可检测到MMP-2,经TGF-β1处理后,能显著上调培养基中MMP-2的分泌.TGF-β1的浓度从0.01～10 ng/ml,MMP-2的分泌活性有明显的剂量依赖性,同时MMP-2的分泌活性随TGF-β1作用时间延长而增强. 结论培养的HRPE细胞能分泌MMP-2,TGF-β1能上调HRPE细胞中MMP-2的分泌.MMP-2分泌增加,可能在玻璃体视网膜的疾病中有利于HRPE细胞的迁移.

IL-1β和TNF_(-α)对培养的人视网膜色素上皮细胞的影响

目的观察白介素１ β （ＩＬ－１ β）和α肿瘤坏死因子(ＴＮＦ－α）对培养的人视网膜色素上皮细胞(ＲＰＥ）生长的影响，了解在增生性玻璃体视网膜病变（ＰＶＲ）中炎前因子的调控机制。方法通过ＭＴＴ比色实验和３Ｈ－ＴｄＲ掺入实验，检测ＩＬ－１ β和／或ＴＮＦ－α对培养的人视网膜色素上皮细胞增殖的影响。结果ＩＬ－１ β和／或ＴＮＦ－α(0．02～２０ ｎｇ／ｍｌ)可促进培养的ＲＰＥ增殖，呈剂量和时间依赖性，ＤＮＡ合成也明显增加。结论炎前因子ＩＬ－１ β和／或ＴＮＦ－α可能促进ＰＶＲ中细胞的增殖。

舒拉明对培养的人视网膜色素上皮细胞移行的影响

目的 观察舒拉明 (suramin)对培养的人视网膜色素上皮细胞 (retinalpigmentepithelium ,RPE)移行的影响。 方法 在体外培养的RPE细胞的损伤模型中 ,加入不同浓度的舒拉明 (1 5 ,15 ,15 0mg/L) ,观察 12h、2 4h和 48h 3个时间点RPE细胞移行率。结果 无血清培养液中的RPE细胞有较弱的移行能力 ,含有 10 0ml/L新生小牛血清的培养液可以显著刺激RPE细胞移行 (P <0 0 1) ,3种浓度舒拉明可以显著抑制 10 0ml/L血清条件下的RPE细胞的移行 ,12h移行率分别为对照组的 82 %、74%和 46 % ,2 4h为 92 %、83%和 5 2 % ,48h为 92 % ,84%和 5 5 % ,这种作用呈剂量依赖性。结论 血清中的某些成分可以刺激RPE细胞的移行 ,舒拉明可以抑制血清的这种作用 ,为临床预防和治疗增殖性玻璃体视网膜病变 (proliferativevit reoretinopathy ,PVR)提供了新的用药思路。

IL-1β和TNF-α对培养的人视网膜色素上皮细胞波形蛋白表达的影响

目的 观察IL 1β和TNF α对培养的人视网膜色素上皮 (RPE)细胞波形蛋白表达的影响。 方法 采用免疫组织化学和彩色图像分析技术检测IL 1β和 /或TNF α( 2 0ng/mL)对RPE细胞波形蛋白表达的影响。 结果 波形蛋白表达的灰度值分别为 :IL 1β +TNF α处理组 76 9± 8 1,IL 1β处理组 78 4± 8 1,TNF α处理组 90 2± 6 7。与对照组 110 2±10 7比较均有显著性差异 (P <0 0 1)。结论 IL 1β和 /或TNF α可上调波形蛋白的表达 ,在增生性玻璃体视网膜病变(PVR)中可能参与RPE细胞增殖过程中中间丝的改变。

缺氧对培养的人视网膜色素上皮细胞中NOX4表达的影响

目的:观察缺氧对培养的人视网膜色素上皮细胞中NADPH氧化酶4(NOX4)表达的影响,探讨NADPH氧化酶与脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)形成的关系。方法:人视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epithelium,h RPE)体外常规培养和传代,取3~6代细胞用于实验。将培养的人RPE细胞分为常氧对照组和缺氧处理组,常氧对照组用DMEM完全培养液培养细胞,缺氧处理组培养液中含有终质量浓度为200μmol/L CoC l2,分别观察缺氧后4、6、8、12、24h后终止。采用细胞免疫荧光染色技术及Western-blot方法鉴定人RPE细胞中NOX4的表达以及缺氧不同时间对NOX4表达的影响。结果:常氧对照组及缺氧处理组人RPE细胞生长良好,形态呈梭形。缺氧处理组细胞的形态及排列方式与空白对照组相比无明显改变。免疫荧光染色显示,常氧对照组RPE细胞内有少量的NOX4表达,细胞质呈绿色荧光,细胞核呈蓝色荧光;缺氧处理后NOX4的表达量增加,一直持续到缺氧后期;Western-bolt显示缺氧条件下人RPE细胞中NOX4的表达明显增加,与缺氧时间呈正比,与常氧对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);结论:NADPH氧化酶在人RPE细胞中有表达,缺氧条件下NOX4的表达显著提高,且与时间呈正比。提示NADPH氧化酶可能在脉络膜新生血管形成中发挥重要调节作用。

全反视黄酸对培养的人视网膜色素上皮细胞的影响

目的观察全反视黄酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对培养的视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epitheli-um,RPE)的形态、增殖以及对RPE细胞中转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)表达的影响,并探讨ATRA与近视的关系。方法RPE传代至第3代后以1×105/孔的密度接种于96孔板或以1×106的浓度接种于250ml培养瓶,以10%FBS的F12培养液培养48h后转为0.5%FBS的F12培养液,12h后培养液转换为F12和1nM/ml、5nM/ml、10nM/ml、20nM/ml、30nM/ml的ATRA。以未加ATRA组作对照。48h后观察RPE细胞形态,并以MTT法测定其增殖情况,以流式细胞技术检测其细胞凋亡情况,以免疫组化方法检测RPE细胞TGF-β2表达,并以酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)方法测定其上清液的TGF-β2浓度。结果不同浓度的ATRA对RPE细胞的形态、增殖有不同的影响。<10nM/ml的ATRA对RPE细胞的增殖无影响,细胞形态正常,MTT法显示在这些浓度下ATRA对RPE的增殖影响差异无显著性(P>0.05);10nM/ml、20nM/ml、30nM/ml的ATRA抑制RPE的增殖,MTT法显示ATRA对RPE有明显的抑制作用(P值分别为P<0.05,P<0.01,P<0.001),该效应呈剂量依赖性反应。RPE细胞增大变平,突起减少,部分裂解,活力减弱。流式细胞技术检测提示,10nM/ml、20nM/ml、30nM/ml浓度下细胞凋亡率分别为14.58%、19.95%和21.69%。免疫组化方法检测提示,当RPE的ATRA浓度大于10nM/ml时,TGF-β2的表达随浓度增高而增加。ELISA结果显示,ATRA浓度>10nM/ml时,RPE分泌TGF-β2的浓度增加。结论1nM/ml、5nM/ml的ATRA可维持培养的人RPE的生长,≥10nM/ml引起RPE的增殖抑制,并可诱导RPE的凋亡。10nM/ml及以上的ATRA引起的RPE病理性改变为理解近视眼的RPE改变提供了一条思路,≥10nM/ml的ATRA诱导RPE的TGF-β2表达增加可能导致TGF-β2拮抗碱性成纤维细胞生长因子的作用增强,使后者抑制近视发生的作用减弱而促进近视的发展。