人自体表皮细胞培养及移植研究

目的为提供烧伤、创伤大面积皮肤缺损修复时所需的表皮细胞。方法用少量的自体表皮细胞体外培养后移植于创面。结果移植后表皮细胞成活增殖,皮肤表皮获得重建。结论为皮源严重不足的烧伤、创伤患者的皮肤修复提供了一种方法。

成体表皮干细胞的分离培养与鉴定

目的 探讨成体表皮干细胞体外分离、培养和鉴定的技术方法。为组织工程皮肤的构建提供种子细胞。方法 通过中性蛋白酶消化成人包皮获得表皮细胞，再通过胰蛋白酶与乙二胺四乙酸（EDTA）消化并制成单个表皮细胞悬液，接种至人胎盘Ⅳ型胶原包被的培养瓶内．以Dulbecco改良Eagle培养基／F12（DMEM／F12，1：1）作为表皮干细胞培养基置培养箱内培养，37℃静置10～l5min，留用快速贴壁细胞继续培养，所得细胞分别以能否呈克隆状生长、流式细胞仪测细胞周期、透射电镜观察其超微结构及β1-整合素、角蛋白19（K19）免疫细胞化学染色进行鉴定。结果 人胎盘Ⅳ型胶原包被的培养瓶内快速贴壁细胞继续培养24h后细胞呈克隆状生长；电镜观察其超微结构示非成熟细胞特征；细胞周期分析示，第2代中静息期／DNA合成前期（G0／G1期）细胞占86．83％。β1-整合素、K19免疫细胞化学染色呈阳性。结论 成体表皮干细胞在体外得到成功分离与培养。

人表皮干细胞的快速分离培养及鉴定

目的探讨人表皮干细胞的体外快速分离和培养方法。方法运用DispaseⅡ酶和胰蛋白酶两步法从手术切除的人包皮组织中分离获得表皮干细胞。分离的表皮片经表皮干细胞培养基(ESCM)悬浮,接种于IV型胶原包被的培养板中,37℃、5%CO2饱和湿度的细胞培养箱内静置培养10min,留用贴壁细胞;Ⅳ型胶原黏附、分离并富集后继续培养。倒置显微镜下观察培养细胞的生长状况;检测细胞克隆形成率及克隆维持时间;免疫组化染色观察表皮干细胞标志物β1整合素和角蛋白19(K19)的表达。以角质形成细胞作为对照。结果组织学观察显示,培养24h后细胞呈克隆状生长;所分离、培养细胞的克隆形成率高于对照角质形成细胞,且克隆维持时间较长;免疫组化染色显示,培养细胞β1整合素及Kl9均呈阳性表达。结论运用Ⅳ型胶原黏附结合ESCM培养可以实现人成体表皮干细胞的快速分离和培养。

自体组织工程皮肤作为永久性移植物的研究现状及前景

迄今,能够永久性封闭创面的皮肤替代物仍是以自体皮肤细胞作为种子细胞的自体组织工程皮肤。培养的自体表皮移植物的发展经历了漫长而曲折的历程;自体组织工程复合皮肤在结构、功能与疗效上更接近自体断层皮片,成为近年来研究的热点。本文从组织工程皮肤应用研究的实际现状出发,就自体组织工程皮肤作为永久性移植物的主要研究进展、存在的主要问题、研究开发与临床应用前景进行综述,以期为自体组织工程皮肤改进及应用提供参考。

发泡法与自体表皮细胞移植治疗面颈部白癜风美学效果的比较研究

目的探讨发泡法移植技术与非培养自体表皮细胞移植再生技术在面颈部稳定期白癜风外科治疗的差异与美学意义。方法2016年5月至2020年5月,北京协和医院整形美容外科与南京华厦白癜风医院治疗面颈部稳定期白癜风患者64例,男25例、女39例;年龄10~46岁,平均25岁。随机数字表法分为发泡法移植组和自体表皮移植组,每组32例;分别于术后3个月和6个月计算两组患者的治疗有效率、色素沉着、拼缝畸形出现情况。结果发泡法移植组:治疗后3个月有效22例(68.75%),6个月有效29例(90.63%);自体表皮移植组:治疗后3个月有效19例(59.37%),6个月有效28例(87.50%);两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。自体表皮移植组在术后3个月及6个月未出现色素沉着及拼缝畸形患者,效果优于发泡法移植组。结论非培养自体表皮细胞移植再生技术治疗白癜风更符合患者的美学需求。

发疱法移植测试提高自体表皮细胞移植技术治疗白癜风疗效的临床意义

目的探讨发疱法移植技术在提高自体表皮细胞移植(ReCell)技术治疗白癜风疗效的临床意义。方法2015年1月至2018年12月,北京协和医院整形外科将白癜风患者90例(男59例,女31例;年龄17~51岁,平均27岁)分为3个组,每组30例,分别为无发疱法治疗史白癜风患者组(对照组),发疱法无效患者组(治疗1组)、发疱法有效患者组(治疗2组)。均接受标准流程的ReCell技术治疗。观察术后3、6个月患者白斑的复色效果,同时观察并发症的发生情况。结果术后3、6个月白癜风患者复色有效率>50.0%,无发疱法治疗史白癜风患者组分别是53.3%、63.3%;发疱法无效患者组分别是43.3%、50.0%;发疱法有效患者组分别是76.7%、90.0%。3个组均无明显手术并发症。结论ReCell技术治疗稳定期白癜风,发疱法是筛选患者的一种简单有效的方法。

自体异体表皮细胞与自体淋巴细胞混合培养的免疫反应

目的 探讨嵌入式混合植皮后排异反应受抑的免疫学机制。 方法 按不同比例 ,将烧伤患者表皮细胞、淋巴细胞与异体表皮细胞混合培养 ,模拟混合植皮时自体皮岛的局部免疫微环境 ,另将正常人相应细胞混合培养 (对照 )。采用3 H TdR法检测淋巴细胞cpm值 ,采用免疫组化技术检测HLA分子和T细胞亚群。 结果 (1)烧伤患者表皮细胞能有效抑制淋巴细胞增殖反应 ,而正常人无此现象 ;(2 )烧伤患者表皮细胞中HLA DQ分子不介导自体淋巴细胞增殖受抑 ;(3)烧伤患者表皮细胞中HLA DR表达阳性率明显高于正常人 (P <0 .0 5 ) ,两者淋巴细胞中HLA DR分子表达相比较 ,差异无显著性意义 (P >0 .0 5 ) ;(4)烧伤患者淋巴细胞中CD8表达明显高于正常人 (P <0 0 1) ,CD4表达明显低于正常人 (P <0 .0 1) ,CD3表达与正常人相比差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。 结论 大面积烧伤患者混合植皮时 ,自体表皮细胞可明显抑制淋巴细胞的增殖反应 。

代谢障碍性皮肤病

9843017 寻常性白斑的不合常规的PUVA疗法[日]/泷胁弘嗣//皮科临.-1997,39(10).-1491～1494 冀医情 9843018 用培养的自体表皮细胞治疗广泛的色素脱失/Kumagai N//Ann PlastSurg.-1997,39(1).-68～73

浅谈表皮干细胞传代于脱细胞真皮基质所形成的复合皮的体会

20世纪70年代发明了自体表皮干细胞培养技术,逐渐应用于临床,但是由于自体表皮细胞缺乏真皮结构,收缩性大,不易转移和固定,移植后很脆弱,抗感染能力差,导致其移植成功率很不稳定,成活以后易产生严重的瘢痕,因此单纯的角质细胞培养和移植临床很少应用。将表皮干细胞传代于脱细胞真皮基质形成的复合皮移植效果较单纯的角质细胞明显提高,为烧伤患者的皮肤再生提供新的方法。