体外培育牛黄的基础和临床研究进展

牛黄是我国传统名贵中药材,药用历史已超过两千年。但是,牛黄产量低,价格昂贵。体外培育牛黄是天然牛黄的理想代用品,其性状、成分、临床疗效等方面与天然牛黄几乎相同。研究体外培育牛黄的基础和临床研究有助于更好的运用,挖掘其临床价值。通过分析结果显示,体外培育牛黄对人体的消化系统、中枢神经系统、免疫系统、内分泌系统等多个系统的疾病具有作用,新的研究发现其可以调控胆汁酸,有助于在临床上精准调控牛黄的用药剂量,治疗肝胆疾病。体外培育牛黄还具有抗肿瘤、抗衰老的作用,可以为治疗癌症、延长人的寿命领域提供重要的研究内容和参考价值,临床应用价值大。由于纳入的研究较少,今后还需要更多的文献进一步验证体外培育牛黄的价值。

基于超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱对天然牛黄和体外培育牛黄胆汁酸类成分的差异性分析

采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-QE-Orbitrap MS)对天然牛黄和体外培育牛黄共18批样品进行分析,使用Compound Discoverer软件对胆汁酸类成分进行鉴定,结合化学统计学分析筛选不同类型牛黄的差异性成分。根据一级质谱精确质荷比和二级化合物碎片信息,鉴定了30个共有的胆汁酸类成分。聚类分析结果表明体外培育牛黄与产地呈现一致趋势,而天然牛黄的聚类趋势与产地无关。主成分分析载荷图显示胆酸、去氧胆酸等成分对主成分1的贡献较大,而甘氨鹅去氧胆酸、甘氨去氧胆酸、牛磺去氧胆酸等成分对主成分2的贡献较大。通过建立正交偏最小二乘法判别(OPLS-DA)模型,共筛选出11个胆汁酸类差异成分(VIP>1,P<0.05),其中胆酸在两组之间的含量差异最大。除了去氢胆酸和甘氨去氢胆酸,其余9个差异成分在体外培育牛黄中的相对含量均较高。研究结果可为天然牛黄和体外培育牛黄的物质基础、质量控制和资源开发应用提供理论参考。

体外培育牛黄配伍冰片对脑缺血再灌注模型大鼠脑血管及神经元的保护作用

目的考察体外培育牛黄、冰片及两药配伍对脑缺血再灌注模型大鼠的脑保护作用,并探讨其机制。方法采用改良线栓法制备短暂大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,缺血90min后再灌注,MCAO后3d采用Zea-Longa及mNSS评分法评价大鼠神经功能,TTC染色后计算其脑梗死率;ELISA法检测大鼠血清中VEGF、Ang-1及bFGF水平与缺血侧脑组织中GDNF、NGF及BDNF的水平;免疫荧光双染观察其对神经元及血管新生的影响;透射电镜观察其对神经元及脑微血管超微结构的影响。结果与溶剂模型组相比,体外培育牛黄、冰片及两药配伍可不同程度地降低大鼠神经功能评分、降低脑梗死率;升高血清VEGF、Ang-1水平,增强缺血侧脑组织中GDNF、NGF及BDNF的表达水平;还可增加缺血侧皮层区神经元数量及新生血管密度;改善缺血侧神经元及脑微血管的超微结构。结论体外培育牛黄、冰片及两药配伍通过促进MCAO模型大鼠血管新生和神经元保护,表现出“开窍醒神”功效,并体现“相使”增效的配伍关系,为临床合理用药提供参考。

体外培育牛黄对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用

目的观察体外培育牛黄对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用。方法采用改良线栓法制备短暂大脑中动脉阻塞(tMCAO)模型,大鼠随机分为假手术组、模型组、溶剂组、尼莫地平组及体外培育牛黄0.20、0.10、0.05 g/kg组,每组12只。术后72 h,评价神经功能和脑梗死体积,HE染色观察脑组织病理损伤情况,ELISA法检测大鼠血清VEGF、Ang-1、bFGF水平,分子对接预测其可能机制,Western blot、免疫组化(IHC)法检测p-PI3K、p-Akt、caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达,RT-qPCR法检测PI3K、Akt、caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA表达。结果与溶剂组比较,体外培育牛黄各剂量组大鼠神经功能评分、脑梗死率降低(P<0.05,P<0.01),海马区神经元与皮层的病理损伤改善,血清VEGF、Ang-1水平升高(P<0.05,P<0.01)。牛黄主要成分与PI3K、Akt、caspase-3的对接得分大于100分,契合良好。体外培育牛黄能升高p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白及mRNA表达(P<0.05,P<0.01),降低caspase-3、Bax蛋白及mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。结论体外培育牛黄可能通过激活PI3K/Akt通路对脑缺血再灌注损伤大鼠起到神经保护作用。

体外培育牛黄联合静脉溶栓治疗对急性缺血性脑卒中伴意识障碍患者预后的影响

目的观察体外培育牛黄(CBS)联合重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)静脉溶栓治疗对急性缺血性脑卒中伴意识障碍患者预后的影响。方法急性缺血性脑卒中患者98例随机分为CBS组和对照组49例,对照组使用rt-PA溶栓治疗,CBS组使用rt-PA溶栓与CBS口服联合治疗。通过Wilcox检验比较两组治疗后24 h、7 d、14 d格拉斯哥昏迷(GCS)评分和美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分的差异,评估患者意识恢复程度和神经功能恢复情况;比较两组治疗后90 d预后良好(mRS评分0~2分)比例的差异。结果两组治疗前基线情况均衡,治疗后14 d CBS组Glasgow评分明显高于对照组(P=0.022)。CBS组90 d预后良好比例明显高于对照组(χ^(2)=4.939,P=0.026)。结论对于合并意识障碍急性缺血性脑卒中患者,CBS联合rt-PA治疗可促进患者意识恢复,改善预后。

牛黄上清片(体外培育牛黄)含服治疗咽喉炎疗效的多中心、随机对照研究

目的基于多中心、随机对照研究探讨牛黄上清片(体外培育牛黄)含服治疗咽喉炎的疗效。方法选取2021年4月-2022年4月北京市中西医结合医院、广州市红十字会医院、广州市第一人民医院、青岛市即墨中医医院收治的咽喉炎患者88例作为研究对象,采用随机数字表法分为用药组与安慰剂组,各44例。2组患者均予以阿莫西林克拉维酸钾分散片治疗,在此基础上,用药组44例予以牛黄上清片(体外培育牛黄)含服,安慰剂组44例则予以牛黄上清片模拟剂含服,2组均连续用药5 d。比较2组临床疗效、症状改善时间,治疗前及治疗2、5 d后视觉模拟评分法(VAS)评分,治疗前及治疗5 d后炎性指标,不良反应。结果用药组治疗总有效率为90.91%,高于安慰剂组的70.45%(χ^(2)=5.906,P=0.015)。用药组咽喉部黏膜充血水肿、干燥、异物感改善时间短于安慰剂组(P<0.01)。治疗2、5 d后,2组VAS评分较治疗前降低,且用药组低于安慰剂组(P<0.05或P<0.01)。治疗5 d后,2组血清白介素-6、白介素-10、肿瘤坏死因子-α及γ干扰素水平均较治疗前明显降低,且用药组低于安慰剂组(P<0.05或P<0.01)。用药组与安慰剂组不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(2.27%vs.0,P=1.000)。结论牛黄上清片(体外培育牛黄)含服治疗咽喉炎的疗效显著,可快速改善患者的临床症状,减轻疼痛及炎性反应,且安全性较高。

体外培育牛黄配伍冰片激活PI3K/Akt通路抑制脑缺血再灌注模型大鼠神经元凋亡

目的从抗凋亡角度探讨体外培育牛黄(ICCB)、冰片及其配伍对脑缺血再灌注模型大鼠脑保护作用的分子机制。方法采用改良线栓法制备短暂大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,缺血90 min后再灌注,苏木精-伊红(HE)染色观察缺血侧脑组织病理损伤情况;Tunel染色观察缺血侧大脑皮层神经元凋亡;RT-PCR检测相关蛋白mRNA的表达;Western blot及免疫组织化学方法检测PI3K/Akt通路相关蛋白的表达。结果与溶剂模型组比较,体外培育牛黄、冰片及两药配伍可不同程度地降低MCAO模型大鼠缺血侧脑组织病理损伤,抑制缺血侧皮层神经元凋亡,升高缺血侧脑组织中p-PI3K、p-Akt及Bcl-2蛋白表达,降低Caspase-3、Bax蛋白表达以及Bax/Bcl-2比值。结论体外培育牛黄、冰片及二者配伍的脑神经保护作用与激活PI3K/Akt通路,抑制脑缺血再灌注后神经元凋亡有关,进而发挥“开窍醒神”功效。

体外培育牛黄对出血性脑卒中神经功能恢复的临床研究

研究体外培育牛黄对出血性脑卒中神经功能恢复的临床效果。方法 选择2022年7月至2023年4月收治的100例出血性脑卒中患者,按照随机数字表法分组,比较两组患者的血流变学指标等指标。结果 观察组患者的治疗指标均优于对照组患者(P<0.05)。结论 出血性脑卒中患者通过体外培育牛黄治疗,可促进神经功能恢复,安全性高,值得推广。

牛黄上清片(体外培育牛黄)治疗复发性口腔溃疡的多中心、随机对照研究

目的对比牛黄上清片(体外培育牛黄)治疗复发性口腔溃疡的临床疗效。方法选取2020年4月至2022年4月期间浙江萧山医院、杭州市萧山区中医院、南京市溧水区人民医院收治的复发性口腔溃疡患者93例为研究对象,依据随机数字表法分为西药组、牛黄上清片组和联合组,每组31例。西药组口服维生素B 2片并配合锡类散外用;牛黄上清片组口服牛黄上清片,4片/次,2次/天;联合组在西药基础上加服牛黄上清片,4片/次,2次/天,3组均连续治疗4周。比较3组的溃疡愈合速度、复发率,比较两组治疗前后视觉模拟疼痛(VAS)评分、焦虑自评量表(SAS)评分、体温变化、炎症因子[白细胞介素(IL)-10、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(INF-γ)]、免疫功能指标(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))水平;对比两组的临床疗效及安全性。结果联合组的平均溃疡期及复发率显著低于西药组及牛黄上清片组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,3组的VAS、SAS评分及体温均较治疗前明显降低,且联合组的VAS、SAS评分及体温均显著低于西药组和牛黄上清片组,差异有统计学意义(P<0.05),牛黄上清片组与西药组比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后3组IL-10、IL-6、TNF-α、INF-γ水平均较治疗前降低,其中联合组各水平降低幅度显著低于西药组和牛黄上清片组,差异有统计学意义(P<0.05),牛黄上清片组各水平高于西药组,但两组比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后3组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)均升高,CD8^(+)均降低,其中联合组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)高于另外两组,CD8^(+)低于另外两组,差异有统计学意义(P<0.05);但牛黄上清片组各水平与西药组比较差异无统计学意义(P>0.05)。联合组的治疗总有效率分别为96.77%,均高于西药组、牛黄上清片组的77.42%、70.97%(P<0.05),西药组、牛黄上清片组组间比较差异无统计学意义(P>0.05);3组不良反应情况均较轻,总发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论牛黄上清片对比牛黄上清片(体外培育牛黄)联合西药治疗复发性口腔溃疡疗效显著,安全性高,可促进溃疡愈合,减轻疼痛,改善机体炎症反应,并增强机体免疫功能,值得临床推广应用。

体外培育牛黄与天然牛黄指纹图谱的比较研究

目的 :研究、比较体外培育牛黄与天然牛黄的指纹图谱。方法 :利用TOFMS、HPLC/MS技术研究、比较体外培育牛黄与天然牛黄中肽类、胆汁酸类和胆红素类 3类成分的指纹图谱。结果 :体外培育牛黄与天然牛黄 3类成分的指纹基本一致 ,但各成分间的相对含量有差异。结论 :10批体外培育牛黄的指纹图谱有较好的一致性 ,说明体外培育牛黄的质量稳定。 4批天然牛黄的指纹图谱 ,尤其是胆汁酸类成分的指纹图谱差异明显 ,说明天然牛黄由于来源不同 ,导致质量不够稳定。

体外培育牛黄镇痛作用的电生理机制

目的探讨体外培育牛黄（calculus bovis sativus,CBS）镇痛作用的电生理机制。方法在蟾蜍坐骨神经干和培养大鼠三叉神经节（TRG）细胞上,分别记录复合动作电位和电压依赖性钠通道电流。结果CBS（〉0.4g.L-1）可以抑制复合神经动作电位,4g.L-1CBS对其抑制率为（42.5±17.6）%。CBS（0.2-20mg·L-1）可以剂量依赖性的抑制大鼠TRG细胞电压依赖性总钠通道电流（INa-T）和TTX不敏感型钠通道电流（INa-TTX-r）,20mg.L-1CBS对INa-T和INa-TTX-r的抑制率分别为（55.8±7.8）%和（39.3±5.7）%。结论CBS对钠电流的阻滞作用可能是其镇痛作用机制之一。

体外培育牛黄诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

目的研究体外培育牛黄诱导人肝母细胞瘤HepG2细胞凋亡的作用及机制。方法用单层培养法培养HepG2细胞,用不同剂量的体外培育牛黄作用于HepG2细胞不同时间,用荧光显微镜、透射电镜观察细胞形态的改变及细胞凋亡,用流式细胞仪检测HepG2细胞的亚G1峰细胞(凋亡)率的变化。结果体外培育牛黄100～800μg/ml作用于HepG2细胞48h后,HepG2细胞表现为细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂、细胞起泡以及凋亡小体形成等凋亡特征性形态学改变;流式细胞直方图上可见亚二倍体峰,不同浓度作用于HepG2细胞24、36、48、72h后的细胞凋亡率均显著高于空白对照组(P<0.01),400μg/ml浓度组与阳性对照FT207(100μg/ml)组比较无明显差异。结论体外培育牛黄能诱导人肝母细胞瘤HepG2细胞凋亡。

牛黄及体外培育牛黄的药理作用研究进展

牛黄作为传统名贵中药,用途广泛,是多种常见中西成药的主要原料。现代药理研究显示,牛黄具有抗炎、抗氧化、保肝、抗肿瘤等作用。体外培育牛黄药效与之相似。本文检索国内外公开发表的涉及牛黄及体外培育牛黄药理作用、临床应用的专著、论文,进行归纳总结,为今后深入开展牛黄及体外培育牛黄的基础研究以及扩大临床应用提供参考。

体外培育牛黄抗炎作用的实验研究

体外培育牛黄２００～８００ｍｇ／ｋｇ，ｉｇ５～７天，可显著抑制小鼠巴豆油性耳廓水肿，大鼠角叉菜胶性足肿胀，大鼠巴豆油肉芽囊肿的渗出和组织增生，抑制白细胞游走反应，对抗ＰＧＥ２致毛细血管通透性增加，但不影响肾上腺中ＶｉｔＣ含量，本品抗炎作用强度与牛黄相似。

体外培育牛黄耐缺氧和清除自由基作用的研究

目的 :探讨体外培育牛黄耐缺氧和清除自由基的作用。方法 :用密闭缺氧实验观察小鼠在缺氧条件下的生存时间 ;小鼠经密闭缺氧后 ,取脑、心、肝组织匀浆及血清作SOD活性、MDA含量测定及电镜观察脑组织超微病理改变。结果 :体外培育牛黄能明显延长缺氧小鼠的生存时间 ,提高缺氧小鼠的脑、肝、心组织及血清SOD活性 ,降低MDA含量 ,并能明显减轻脑组织的病理损伤。结论 :体外培育牛黄具有耐缺氧作用 ,此作用与其提高SOD活性和降低MDA含量、提高机体清除自由基的能力、减轻脂质过氧化作用对脑、心、组织的损害 ,保护心、脑细胞有关。

体外培育牛黄合并氟哌啶醇治疗精神分裂症的随机双盲对照研究

牛黄为名贵中药材,《本草纲目》记载,牛黄＂益肝胆,定精神,除热,止惊痫,发狂谵语者可用＂。精神分裂症从中医角度大多数观点认为属于癫狂症范畴。既往也有临床应用牛黄的复方制剂治疗精神分裂症,有一定疗效。

体外培育牛黄治疗中风的临床研究

目的评价单味体外培育牛黄治疗中风(痰热闭窍证)的临床疗效及安全性。方法采用随机单盲对照法,与单味天然牛黄对照研究,共治疗中风患者127例,其中体外培育牛黄治疗组95例,天然牛黄对照组32例。结果治疗组与对照组愈显率分别为37.90%和32.25%,总有效率分别为86.3%和80.6%,两种牛黄均有较好的疗效,治疗组与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:体外培育牛黄治疗中风有良好的疗效,两种牛黄在治疗过程中均未见明显的不良反应。

含体外培育牛黄的安宫牛黄丸治疗流行性乙型脑炎的临床研究

目的观察含体外培育牛黄的安宫牛黄丸治疗暑温风痰闭窍证(流行性乙型脑炎)的临床疗效及安全性。方法采用随机双盲和单盲对照法,与含天然牛黄的安宫牛黄丸对照研究,共治疗乙脑患者260例,其中含体外培育牛黄的安宫牛黄丸治疗组182例,对照组78例。结果治疗组与对照组的愈显率分别为94.50%,88.46%,总有效率分别为99.45%,97.44%。两种牛黄的安宫牛黄丸均有较好的疗效,两组比较差异无显著性意义(P>0.05)。ECG及实验室各项检查表明,两种牛黄的安宫牛黄丸对病人均无明显毒副作用。结论含体外培育牛黄的安宫牛黄丸治疗流行性乙型脑炎疗效显著。

体外培育牛黄治疗流行性乙型脑炎的临床研究

目的 观察体外培育牛黄治疗暑温风痰闭窍证 [流行性乙型脑炎 (乙脑 ) ]的临床疗效及安全性。方法 采用随机单盲对照法 ,与单味天然牛黄对照研究 ,共治疗乙脑患者 165例 ,其中体外培育牛黄治疗组 12 4例 ,天然牛黄对照组 41例。结果 治疗组与对照组的痊愈率、显效率分别为 3 8 7%、 54 0 %和 3 1 7%、 43 9% ,总有效率分别为99 2 % ,87 8%。两种牛黄均有较好的疗效。心电图及实验室各项检查表明 ,两种牛黄治疗患者均未见明显毒副作用和不良反应。

体外培育牛黄糊剂治疗牙龈病的疗效观察

目的:观察体外培育牛黄糊剂治疗牙菌斑性牙龈病(GDP)和药物性牙龈病(GDM)的短期疗效。方法:GDP患者63例随机分为两组:第1组31例采用局部基础治疗后体外培育牛黄糊剂局敷,第2组32例对照组仅采用局部治疗;GDM患者33例随机分为两组:第3组16例采用局部基础治疗后体外培育牛黄糊剂局敷,第4组17例对照组仅采用局部治疗,观察牙龈肿大、疼痛、出血、龈沟出血指数、龈袋探诊深度。结果:通过牙龈的指标评价,第1组优于第2组,第3组明显优于第4组,差异有非常显著性。体外培育牛黄组(47例)显效率、有效率、总有效率分别为40.4％,51.1％,91.5％,对照组(49例)分别为32.7％,42.9％,75.5％,均具有统计学意义。未发现不良反应。结论:体外培育牛黄糊剂治GDP和GDM具有较好的短期临床疗效。