甲状腺肿瘤组织中p14^(ARF)基因纯合性缺失及其产物表达状况的研究

目的:检测甲状腺肿瘤组织中p14ARF基因变异及其产物的表达,探讨此基因与甲状腺肿瘤发生发展的关系。方法:应用双重PCR和免疫组化SP法分别检测20例甲状腺腺瘤和28例甲状腺癌组织中p14ARF基因纯合性缺失及其蛋白表达状况。28例甲状腺癌包括11例甲状腺滤泡癌,12例乳头状癌,4例髓样癌以及1例未分化癌。结果:1)p14ARF基因在甲状腺腺瘤及癌中的纯合性缺失率分别为5.0%(1/20)和42.9%(12/28),两者差异有统计学意义,P=0.0036。2)p14ARF蛋白在甲状腺腺瘤及甲状腺癌中的阳性率分别为90.0%(18/20)和35.7%(10/28),两者差异有统计学意义,P=0.0002。结论:甲状腺肿瘤中p14ARF基因的纯合性缺失是其蛋白表达失活的重要机制之一,与甲状腺肿瘤的发生发展密切相关。p14ARF可能是甲状腺肿瘤的分子标志物之一,可作为鉴别甲状腺腺瘤与滤泡癌的辅助指标。

KAI1基因转染协同ATRA诱导对肺腺癌细胞株抑制作用的研究

目的 :探讨新抑癌基因KAI1与全反式维甲酸 (all trans retinoicacid ,ATRA)对肺腺癌A5 49细胞株抑制增殖和诱导分化的作用。方法 :用脂质体介导的基因转染方法 ,借助质粒表达载体 (PCMV NEO XhoI) ,将抑癌基因KAI1转入肺腺癌A5 49细胞中 ,经G418筛选 ,获得稳定表达的细胞克隆。用 10 6mol/LATRA作用于转染及未转染KAI1基因的肺腺癌A5 49细胞株 ,MTT法检测细胞体外增殖能力 ,流式细胞仪进行细胞周期和凋亡分析 ,间接免疫荧光染色结合流式细胞仪检测转染前后细胞CD82 蛋白的表达。免疫组化测定myc、基质金属蛋白酶 (MMP 1)的表达 ,放射免疫测定层连蛋白(LN)表达。结果 :ATRA处理KAI1基因转染的肺腺癌细胞CD82 表达降低 ,细胞增殖能力下降 ,凋亡增加 ,更多的细胞被阻止于G1/G0 期 ,myc、MMP 1及LN表达下降 ,比对照组及单纯转染组细胞差异有统计学意义 ,P <0 0 5。结论 :抑癌基因KAI1与ATRA对抑制肺腺癌A5 49细胞株的增殖浸润转移有协同作用。

RECK基因与肿瘤侵袭转移

RECK是最近发现的基质金属蛋白酶(MMP)抑制基因,在肿瘤组织中低表达,与肿瘤的侵袭转移能力密切相关。现主要综述RECK的结构、功能及其与肿瘤侵袭转移关系的研究进展。

p63基因及其在泌尿系肿瘤中的意义

p6 3是最新发现的p5 3同族基因 ,主要表达于上皮组织的基底层和基底细胞中 ,是外胚层发育过程中重要的调节基因。近来发现p6 3基因在很多上皮肿瘤中表达异常 ,提示该基因可能为肿瘤相关基因 ,在肿瘤的发生发展过程中具有重要作用。现综述p6 3基因及其蛋白产物的特点 ,并详述p6 3基因表达变化在泌尿系统肿瘤研究中的意义。

Survivin基因及其与肿瘤靶向治疗

Survivin是凋亡抑制蛋白(inhibi-torofapoptosisprotein,IAP)家族中的新成员。其具有抗凋亡的特征性结构:较为保守的N端BIR结构域,缺乏RING锌指的C端α螺旋结构,以及2个剪接变构体(Sur-vivin-DeltaEx3与Survivin-2B);而且具有特异性的抗凋亡效应通路:对caspase-3和/或caspase-7的直接和/或间接作用途径,以及对纺锤体装置的调节途径。Survivin可见于胚胎发育过程及部分胎儿组织,在成人终末分化组织低表达或不表达,而在肿瘤组织高表达。近年研究显示,Survivin在肿瘤的发生发展中起重要作用,与肿瘤预后密切相关,有望成为一种广谱的肿瘤诊断标记物,并可能是抗肿瘤治疗的重要标靶。近来针对Survivin的反义核酸和其突变体的靶向治疗研究显示,其可诱导肿瘤细胞凋亡,抑制细胞增殖,并增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,为肿瘤的综合防治提供了新的思路。Survivin在肿瘤组织中独特的高表达性及其具有的重要意义,迫使人们今后需重新认识抗细胞凋亡与细胞恶变的关系及抗凋亡基因与癌基因的界定;激励人们揭开Sur-vivin基因的激活机制;促进人们加速对Survivin靶向治疗临床应用的探索。

DR-nm23基因与肿瘤发生发展关系的研究进展

转移是恶性肿瘤的重要生物学行为,也是肿瘤患者死亡的主要原因之一。肿瘤转移抑制基因是参与肿瘤转移形成的重要分子生物学调控因子,研究证实,nm23基因家族与肿瘤的发生、发展及转移具有明确的相关性。现对该家族新成员DR-nm23基因的结构、功能及其参与肿瘤形成、进展等方面的研究作简要综述。

KiSS-1基因及其与肿瘤转移的关系

KiSS-1基困是近年发现的肿瘤转移抑制基因。研究表明,KiSS-1基因与黑色素瘤、乳腺癌、胃癌、胰腺癌等数种肿瘤的转移密切相关,可望成为某些肿瘤抗转移的治疗靶点。现综述KiSS-1基因的结构、抗肿瘤转移相关机制及KiSS-1基因与人类肿瘤转移的相关性研究进展。

C57小鼠源性淋巴瘤的基因枪途径抗肿瘤免疫研究

[目的]诱导C57小鼠建立有效的抗肿瘤免疫.[方法]用基因枪途径给C57小鼠腹部接种含有粒巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)基因的质粒,24h后在同一部位注射FBL3肿瘤细胞破碎后的上清液,15d后用3×106个FBL3肿瘤细胞皮下接种攻击.[结果]肿瘤的生长受到抑制,小鼠的生存时间明显延长.[结论]基因枪途径局部接种含有GMCSF基因的质粒,可增强机体的抗肿瘤免疫,抑制肿瘤细胞的生长.

DBCCR1基因在膀胱肿瘤中的研究进展

DBCCR1基因(deletedinbladdercancerchromosomeregioncandidate1,DBCCR1)定位于人染色体9q32-33上的一种新的候选抑癌基因。目前研究表明DBCCR1编码蛋白对细胞周期G1/S期有负性调控作用。杂合性缺失(lossofheterozygosity,LOH)和CpG岛的高甲基化(Hypermethylation)是导致DBCCR1失活的主要机制。在膀胱肿瘤组织及膀胱癌细胞系的研究中发现该区域异常改变普遍存在,提示DBCCR1的失活与膀胱肿瘤的发生有十分密切的关系。

低剂量率照射下肿瘤细胞抑癌基因表达和细胞凋亡研究进展

低剂量率照射能够增强p53、p21等抑癌基因的表达,并可通过肿瘤细胞G2-M期阻滞和bcl-2等基因的改变引起细胞凋亡。

RUNX3基因与肿瘤的关系

人类runt相关转录因子3(RUNX3)基因是新近发现的一种肿瘤抑制基因,其失活的主要机制是高甲基化和杂合性缺失。RUNX3基因可能是转化生长因子-β(TGF—β)转导通路中的一个重要环节,参与TGF—β上皮细胞生长的负调控作用。现综述RUNX3的基因定位、结构特点、抑癌机制及其与肿瘤发生发展的关系等方面的研究进展。

FHIT 基因甲基化及其与肿瘤的关系

抑癌基因cpG 岛的异常甲基化可引起其转录抑制,基因失活,从而造成功能异常, 导致恶性肿瘤发生。FHIT 基因的甲基化与多种肿瘤的发生有关,因此对其甲基化的检测在恶性肿瘤的早期诊断、治疗及预后判断中具有重要意义。

肝癌抑制基因-1肿瘤靶向性表达及其特异性抗肿瘤作用

目的建立肝癌抑制基因-1（HCCS1）肿瘤靶向性表达载体，提高肿瘤治疗的安全性。方法活细胞计数试剂盒测定HCCS1高表达对正常细胞和肿瘤细胞的影响，荧光素酶试验检测肿瘤特异性启动子PEG3p在正常肝细胞和肝癌细胞中的相对转录活性，AdEasyTM系统包装并利用PCR鉴定重组腺病毒Ad—PEG-3p—HCCS1，Westernblot检测重组腺病毒感染后HCCS1在正常细胞和肿瘤细胞中的表达情况，结晶紫试验和四甲基偶氮唑盐试验观察该重组腺病毒体外抗肿瘤的靶向性。结果HCCS1高表达对肿瘤细胞株BEL7404和SW-620的生长抑制作用明显超过正常细胞株L02和正常人肺成纤维细胞，96h抑制率达60％。荧光素酶试验显示，PEG-3p在BEL-7404、BEL7405、QGY-7703中的相对转录活性分别为L02的3．9、4．7、1．5倍。成功构建了新抑癌基因HCCS1肿瘤靶向性表达的重组腺病毒Ad—PEG3p—HCCS1，Westernblot检测结果显示，在BEL7404和QGY7703中，HCCS1表达高于在L02中的表达。结晶紫试验和四甲基偶氮唑盐试验显示，Ad—PEG-3p—HCCS1与Ad—CMVHCCS1相比，在不降低对肿瘤抑制效果的前提下，明显降低了对正常细胞的杀伤作用。结论肿瘤细胞对HCCS1的生长抑制作用更为敏感，PEG3p在肝癌细胞中也具有肿瘤特异性，AdPEG-3p—HCCS1可特异性地在肿瘤细胞中表达HCCS1，从而提高HCCS1基因治疗的安全性。

乳腺癌侵袭及转移相关基因研究现状

从分子生物学、细胞学角度 ,对近年来乳腺癌细胞粘附分子 (CD4 4 )、细胞外基质分解酶 (MMP、TIMP)、转移抑制基因 (nm2 3)、凋亡抑制基因 (Survivin)、抑癌基因 (p5 3)等在乳腺癌侵袭、转移过程中的作用机制作一综述 ,并揭示其在预测乳腺癌侵袭与转移过程中的应用价值。

CD82和CD63及CD9基因与卵巢癌进展的相关性研究

目的:探讨转移抑制基因Kail/CD82、ME491/CD63和MRP-1/CD9在卵巢癌发生、发展中的作用。方法:应用HIS方法检测30例正常卵巢组织、10例卵巢良性上皮肿瘤组织、6例卵巢交界性肿瘤组织和48例卵巢癌组织中Kail/CD82、ME491/CD63及MRP-1/CD9基因mRNA和蛋白的表达,及其在卵巢癌发生、发展中的作用和相关性,分析与临床病理因素的相关性。结果:Kail/CD82、ME491/CD63和MRP-1/CD9在卵巢癌组的年龄(P值分别为0·507、0·507和0·507)、病理分型(P值分别为0·071、0·070和0·072)上差异无统计学意义;高、中分化的表达与低分化比较差异有统计学意义,P值分别为0·038、0·038和0·037;在Ⅲ、Ⅳ期中表达减弱,与Ⅰ、Ⅱ期相比差异有统计学意义,P值分别为0·012、0·011和0·012;有、无淋巴转移的组织中的表达差异有统计学意义,P值分别为0·020、0·019和0·020。无淋巴转移者出现高表达。结论:Kail/CD82、ME491/CD63和MRP-1/CD9基因在卵巢癌中表达趋势一致,并随期别增加其mR-NA及蛋白表达逐渐降低,与卵巢癌的发生、发展负相关。

重组人p53腺病毒与常用化疗药物对大肠癌-174细胞株生长抑制的对比

目的:对比了解重组人p53腺病毒注射液对大肠癌-174细胞株的体外抑制效应及其半数致死量(IC50),更好地指导临床应用。方法:通过体外细胞培养、利用MTT法对比检测重组人p53腺病毒注射液与5-氟尿嘧啶、替加氟、顺铂、奥沙利铂、丝裂霉素以及紫杉醇等大肠癌常用化疗药物的IC50和残存肿瘤细胞存活率(Imax%),明确重组人p53腺病毒注射液体外抑瘤的活性。结果:rAdp53的IC50为5.73×1011VP/ml,具剂量、时间依赖性抑瘤效应,但与常用化疗药物相比抑瘤效应较弱;5-氟脲嘧啶、紫杉醇、丝裂霉素单用时抑瘤效应最强;紫杉醇、5-氟脲嘧啶体外抑瘤效应敏感性最好。结论:重组人p53腺病毒注射液具有良好的体外抑瘤效应,IC50为5.73×1011VP,且有剂量和时间依赖性;但其单用时体外抑制大肠癌-174细胞株的作用远逊于经典的化疗药物,如丝裂霉素、5-氟尿嘧啶和顺铂。

子宫内膜癌中p27蛋白与肿瘤相关抗原SC3A的表达及临床意义

目的探讨抑癌基因p27蛋白与肿瘤相关抗原SC 3A在子宫内膜癌中的表达及临床意义。方法应用免疫组化S-P法检测66例子宫内膜癌中p27、SC 3A的蛋白表达。结果p27与SC 3A在66例子宫内膜癌中的阳性表达率分别为53.0%和81.8%,与子宫内膜非典型增生及正常增生期子宫内膜对照组比较差异有显著性(P<0.05)。p27蛋白的阳性表达率与子宫内膜癌的组织分级、临床分期呈负相关(P<0.05),而与子宫内膜癌的肌层浸润、淋巴结转移无明显相关性(P>0.05)。SC 3A的阳性表达率与组织分级、临床分期、肌层浸润及淋巴结转移无明显相关性(P>0.05)。结论同时检测p27、SC 3A对提高子宫内膜癌的检出率及判断预后有重要的指导意义。

腺病毒介导的PTEN和p16基因对前列腺癌细胞系的作用

【目的】探讨腺病毒介导的PTEN和p16基因蛋白对抑制前列腺癌细胞增殖和调控其凋亡的作用。【方法】构建携带人PTEN和p16基因的腺病毒载体,转染体外培养的前列腺癌细胞系PC-3,采用RT-PCR、Western blot检测目的基因的表达。通过细胞生长试验、流式细胞仪检测PC-3转染前后细胞增殖和凋亡的变化。【结果】病毒滴度Ad-PTEN为1.8×107pfu/ml、Ad-p16为1.2×1010pfu/ml,RT-PCR检测可见PTEN-mRNA(462bp)和p16-mRNA(520bp)表达,Western blot检测有PTEN蛋白(60KD)和p16蛋白(16KD)特异表达,并可明显抑制PC-3细胞的增殖,诱导其凋亡,联合基因治疗组与单基因组相比差异显著。【结论】PTEN和p16可明显的抑制前列腺癌细胞株PC-3的增殖,增加细胞的凋亡,转染携带PTEN和p16的重组腺病毒载体有望成为治疗前列腺癌的有效方法。