46XY女性性反转综合征一例sry基因的错义突变分析

目的探讨46XY女性性反转综合征患者发病的分子机制。方法应用荧光原位杂交技术(FISH)、聚合酶链反应(PCR)扩增、限制性内切酶分析、单链构象多态性分析及基因测序技术对1例46XY女性性反转综合征进行sry基因的错义突变分析。结果本例FISH证实为X、Y染色体结构,无嵌合体存在;PCR扩增出现609 bp特异性片段;限制性内切酶分析及单链构象多态性分析发现单链电泳带发生变异;且基因克隆测序分析证实HMG盒内第244位核苷酸位置存在点突变(A→T),造成第82位密码子由原来编码天冬酰胺Asn(AAT)变为编码酪氨酸Tyr(TAT),发生错义突变,以致出现女性表型。结论 sry基因在性别决定中起主导作用,对46XY女性患者应在sry基因检测的基础上寻找其他相关病因,以进一步了解其发生性反转的分子遗传学机制,为判断真实性别提供依据。

第二性征正常的SRY阴性46,XX男性综合征一例并文献复习

46,XX男性综合征是一类罕见的性发育障碍性疾病,通常染色体为46,XX且Y染色体性别决定区(sex-determining region Y gene,SRY)阳性,有正常的外生殖器和男性表型,多因成年后不育就诊。而SRY阴性的46,XX男性综合征患者多伴发外生殖器发育畸形,多因年幼时性发育异常就诊。报告1例SRY阴性的46,XX男性综合征患者,该患者外生殖器及第二性征发育均为正常男性型,检查发现患者核型为46,XX、SRY阴性、AZF区域缺失、高促性腺激素性性腺功能减退症且无精子症,其生育建议行供精人工授精。

SRY基因在先天性尿道下裂中的研究进展

尿道下裂是一种较常见的男性先天性生殖器畸形,主要表现为尿道开口部位异常伴阴茎下弯畸形,影响患儿排尿及成年后性功能及生育力。目前,手术矫正是唯一的治疗措施,但术后并发症较多,手术失败率高,易造成尿道下裂残废。其发病机制尚未明确,研究表明造成尿道下裂的病因有很多种,主要包括遗传、内分泌及环境因素等。有多篇文献报道,Y染色体性别决定区(SRY)基因与性别分化及生殖器官的发育密切相关。SRY基因的缺失与突变可导致性发育的一系列异常改变,尿道下裂的发生可能与SRY基因的缺失、变异有关。由于SRY基因与男性生殖系统关系密切,所以该基因的研究也备受男性生殖方面学者的关注。但SRY基因与尿道下裂疾病的易感性相关研究报道仍然比较少,有的研究报道需要进一步验证。该文对SRY基因与尿道下裂的相关性作一综述。

一例46,XX,Y染色体性别决定基因阳性女性胎儿家系的产前诊断与遗传分析

本文报告了1例染色体核型为46,XX,Y染色体性别决定基因(sex-determining region on the Y chromosome,SRY基因)阳性的孕妇及其女性胎儿。孕12周+6时,超声显示胎儿颈项透明层增厚,羊水染色体核型和定量荧光聚合酶链反应检测结果显示胎儿核型为46,XX,SRY基因阳性。但B超显示胎儿社会性别为女性,与46,XX,SRY阳性男性综合征表型不一致。通过荧光原位杂交技术分析结果发现1条X染色体长臂2区8带(Xq28)包含Y染色体短臂1区1带3亚带(Yp11.3)片段。同时,染色体微阵列分析技术检出Yp11.31p11.2的片段重复,长度约1 Mb,证实了胎儿X染色体含有部分Y染色体片段,与孕妇本人一致。经遗传咨询,胎儿父母选择继续妊娠至足月分娩,随访未见异常。

女性性反转综合征合并性腺母细胞瘤及无性细胞瘤一例

性反转综合征是一类染色体性别与性腺性别不相符的遗传性疾病,其发病率极低、发病机制不详且相关临床表现各异。现报告1例染色体核型为46,XY,但其社会性别、内外生殖器均为女性,且右侧卵巢伴有性腺母细胞瘤及无性细胞瘤患者的病例资料,以期为该病的相关诊疗及研究提供一些新的临床思路。

46,XX男性综合征患儿五例的临床特征及基因分析

目的 探讨46,XX男性综合征的临床特点及分子遗传学特征.方法 回顾性分析2010年8月至2014年8月上海瑞金医院儿科5例46,XX男性综合征患儿的临床及分子遗传学资料.结果 5例患儿社会性别均为男性,分别因矮小、外生殖器畸形或乳房发育就诊,染色体核型均为46,XX,身高均低于正常男性均值;经Y染色体性别决定基因（SRY基因）检测,其中1例SRY基因阳性,自幼矮小,具有正常男性表型,外生殖器无畸形,睾丸功能缺陷,为SRY基因易位至X染色体末端所致.4例SRY基因阴性者中,3例外生殖器畸形伴隐睾,睾丸细胞不同程度发育不良,其中1例SOX9基因上游基因拷贝数增加,1例DHH基因杂合性缺失,另1例尚未发现明确的病因.还有1例SRY基因阴性但外生殖器正常者,因青春期乳房发育就诊,其SOX9基因及其上游基因拷贝数均增加.结论 46,XX男性综合征患儿呈男性表型,可有矮小、外生殖器畸形或乳房发育,染色体为46,XX,性腺为睾丸或（和）卵睾,无子宫.SRY基因易位、SOX9基因及其上游基因拷贝数增加皆可导致46,XX男性综合征的发生,尚有未确定的病因.

原发无精子症患者Y染色体AZF微缺失研究

目的:研究原发无精子症患者Y染色体无精子症因子(AZF)基因微缺失频率,为细胞质内单精子注射(ICSI)辅助生育治疗前的临床检验及不育症的遗传咨询提供方法和依据。方法:采用多重PCR法,对天津地区染色体核型均正常的正常生育者30例(正常组)和68例原发无精子症患者(患者组)进行Y染色体AZF区6个位点微缺失检测。结果:患者组存在AZF区微缺失共12例(17.65%)。其中缺失位点在AZFa的sY84者3例(4.41%),AZFb的sY127有1例(1.47%),AZFc的sY254或sY254和sY255共6例(8.82%),AZFb+c的sY134和sY254有1例,sY127、sY254和sY255的1例。正常组各位点均无缺失,2组微缺失率差异有统计学意义(χ2=6.033,P<0.05)。结论:天津地区原发无精子症患者AZF区6位点微缺失检测,缺失率较高。

男性不育患者的遗传学病因研究

目的研究染色体异常、SRY基因突变及Y染色体AZF基因微缺失等遗传学病因与男性不育的关系。检测少精子症不育患者血液和精子基因组AZF微缺失情况。方法采用染色体G显带对87例男性不育患者进行核型分析,采用PCR技术对患者SRY基因突变及Y染色体AZF基因微缺失进行检测。结果 87例男性不育患者中发现染色体异常25例(28.74%);XX男性反转1例(1.15%);AZF微缺失4例(4.60%)。总的遗传学异常检出率为34.48%。结论染色体异常及Y染色体AZF微缺失等是引起男性不育的重要遗传学病因。

孕妇血浆中胎儿表观遗传标记的检测效率评价

目的 分析母血中非性别依赖的胎儿表观遗传学标记超甲基化Ras相关区域家族1A（Ras association domain family 1A,RASSF1A）基因的检测效率,探讨其替代SRY基因检测游离胎儿DNA的可行性. 方法 选择2011年5月1日至2012年4月30日于山西省大同市第一和第五人民医院进行产前检查的正常妊娠妇女50例,分别于妊娠早、中、晚期采集外周静脉血,胎儿出生后确定为男胎的孕妇（28例）为研究对象.选择20例同期体检的健康未妊娠女性作为阴性对照.通过甲基化敏感的限制性内切酶消除母源性（非甲基化）RASSF1A基因,采用TaqMan实时荧光定量聚合酶链反应检测胎源性（超甲基化）RASSF1A基因,同时测定孕妇血浆中SRY基因并作为参照,对检测结果进行相关性分析.统计学方法采用Shapiro-wilk分析、Pearson或Spearman秩相关分析和x2检验. 结果 28例男胎孕妇共进行84次检测,超甲基化RASSF1A基因最早于妊娠第8＋2周检出,检出率97.62％（82/84）.对照组未检测到超甲基化RASSF1A基因和SRY基因.妊娠早、中、晚期孕妇血浆中酶切后RASSF1A基因及SRY基因的含量分别为（60.19±14.16） copies/ml与（58.22±15.13） copies/ml（r=0.933,P＜0.01）、（99.18±28.44） copies/ml与（95.43±32.33） copies/ml（r=0.931,P＜0.01）、（144.93±33.51） copies/ml与（132.96±28.24） copies/ml（r=0.654,P＜0.01）.酶切后RASSF1A和SRY基因含量均与孕周呈正相关（r分别为0.933和0.896,P均＜0.01）. 结论 检测表观遗传学标记超甲基化RASSF1A基因所得的游离胎儿DNA结果与SRY基因具有较高的一致性,该基因突破了胎儿性别的局限,有助于扩大无创伤性产前诊断的临床应用范围.

孕妇外周血中游离胎儿DNA检测在无创产前诊断中的临床应用

目的 探讨孕妇外周血中游离胎儿DNA检测在无创产前诊断中的临床应用价值.方法 2010年9月至2012年3月在河南省人民医院因性连锁遗传性疾病家族史行产前诊断的孕9 ～12周的孕妇共103例为早孕组;2010年10月至2012年1月在河南省人民医院行羊水染色体产前诊断的孕14 ～ 24周的孕妇205例为中孕组.采用实时定量PCR和荧光标记PCR技术检测早孕组孕妇外周血中游离胎儿DNA的Y染色体性别决定基因（SRY）和牙釉质基因（AML）,其中33例男性胎儿及其父亲进行12个Y染色体短串联重复序列（Y-STR）基因座检测.采用大规模平行测序法对中孕组孕妇外周血中游离胎儿DNA进行染色体非整倍体检测.结果（1）早孕组103例游离胎儿DNA检测结果中,有53例SRY检测阳性,50例SRY检测阴性;与绒毛组织中 SRY检测结果相比较,游离胎儿DNA检测SRY有1例假阴性和1例假阳性,其敏感度为98％,特异度为98％.在AML检测中,男胎样本扩增产物中有片段为102 bp的X染色体扩增产物（AML-X）和片段为108 bp的Y染色体扩增物（AML-Y）两种;女胎扩增产物样本仅有AML-X的产物峰.早孕组103例中,52例检测到102 bp和108 bp产物峰,51例仅检测到102 bp产物峰.与绒毛组织中SRY检测结果相比较,有2例出现假阴性,敏感度为96％,特异度为100％.（2）对SRY定量分析浓度≥30 copy/ml的33例胎儿的游离DNA及其父亲外周血基因组DNA进行了Y-STR基因座分型.游离胎儿DNA 200 bp以下的Y-STR基因座均得到成功分型,200 ～ 300 bp之间的Y-STR峰值显著降低,部分基因座扩增失败,未检出超过300 bp的STR基因座.Y-STR基因座分型成功的胎儿与父亲分型结果相比较,发现其中1例存在污染,其余32例均与其父亲分型结果完全一致.（3）中孕组 205例游离胎儿DNA检测结果中,共检出了6例染色体数目异常,其中21三体2例、18三体3例、45,X1例;与羊水染色体核型分析结果完全一致.此外,测序结果显示,X染色体偏少（45,Y）、chrl6偏多（16三体）各1例,而羊水染色体核型分析结果正常;测序结果显示X或Y染色体偏少1例,羊水染色体核型分析结果为47,XYY.结论 （1）孕妇外周血中游离胎儿DNA检测在早孕期无创产前胎儿性别基因诊断中具有较高的灵敏度和特异度,但是必须注意到极微量和高母源背景特点对检测结果可能的影响.（2）孕妇外周血中游离胎儿DNA大规模测序,对于中孕期21三体和18 三体的检测具有较高的准确性,可以作为传统产前诊断技术的有效辅助手段,但是在其他染色体异常的检测中还需要进一步研究.

荧光定量PCR检测孕妇血浆中胎儿DNA的研究

目的探讨荧光定量PCR(fluorescenecequantitativePCR,FQ-PCR)方法检测孕妇血浆中胎儿DNA的可行性,探讨胎儿DNA在孕妇血浆中的含量及其在孕期的变化规律。方法以胎儿SRY基因序列作为胎儿DNA在孕妇血浆中的标志,应用荧光MGB(MinorGrooveBinder)探针实时定量PCR方法连续测定30例孕妇在不同孕期和产后共237份血浆标本中胎儿DNA的含量。结果使用该方法最低可检测到20000个女性DNA中的一个男性DNA。孕妇血浆中最早检出SRY序列的时间为孕6+6周。孕8周起,所有怀男胎孕妇的标本中均可检出SRY序列,其含量随着妊娠的进展而增高,在晚期妊娠达高峰,产后24-48h血浆中SRY序列检测均为阴性。胎儿DNA在孕妇血浆总DNA含量中的相对浓度分别为孕早期4．88％、孕中期6．10％、孕晚期4．77％。全部实验无假阳性和假阴性出现。结论FQ-PCR方法是一种灵敏度和准确性高,特异性强的定量检测孕妇血浆中胎儿游离DNA的方法,孕妇血浆中存在高浓度的胎儿DNA,可用于无创伤性产前基因诊断。

46，XX男性性逆转综合征发生机制及其导致不育的原因探讨

目的分析性逆转综合征患者Y染色体性别决定因子（SRY）及AZF是否存在缺失并探讨其发生机制及导致不育的原因。方法利用PCR方法对4例被确诊为性逆转综合征的男性不育患者进行Y染色体SRY因子及6个AZF位点（SY84，SY86，SY127，SY134，SY254及SY255）进行检测，利用化学发光法进行血清卵泡刺激素（FSH），黄体生成素（LH）及睾酮（T）的测定，利用彩色多普勒进行盆腔探查。结果4例性逆转综合征患者Y染色体SRY因子均存在，但其中2例6个AZF位点均缺失，1例SY127，SY134，SY254及SY255缺失，1例SY254及SY255缺失。血清中T水平降低，FSH和LH水平上升。盆腔彩色多普勒探查均见双侧睾丸小，前列腺和精囊腺发育不良，未见子宫及附件等女性内生殖器组织。结论Y染色体SRY因子存在是该性逆转综合征患者表现为男性的原因，而性腺发育不良导致的睾丸功能低下及Y染色体AZF位点的缺失是导致其不育的原因。