体外培养过程中软骨细胞凋亡与Caspase-3基因表达的关系

目的:探讨软骨细胞在体外培养过程中或药物诱导下细胞凋亡与细胞表达Caspase-3之间的关系,TNF-α和Cycloheximide(CHX)诱导凋亡的软骨细胞,检测Caspase-3基因表达及细胞凋亡,为阻断细胞凋亡寻找理想的作用靶点;为增加软骨组织工程种子细胞的产量提供理论依据和新策略;为临床耳廓成型及修复提供新的材料来源。方法:①胎儿软骨细胞常规分离培养;不同浓度TNF-α+CHX组合诱导软骨细胞凋亡。②MTT法测定细胞生长曲线;TUNEL法和DNA片段化检测细胞凋亡。③所得数据用SPSS软件包分析。结果:①经不同浓度的TNF-α+CHX诱导体外培养的软骨细胞,流式细胞术和TUNEL法检测出细胞凋亡,凋亡指数在18.4%～67.9%之间。②TUNEL法和比色法检测分别显示诱导后凋亡发生时,不同代次软骨细胞Caspase-3基因表达和蛋白表达均比对照组有显著上升。结论:体外培养软骨细胞通过诱导凋亡,观察到凋亡发生时,Caspase-3基因和蛋白表达均出现显著上升。为体外规模培养工程细胞提供了阻滞凋亡的分子靶点。

三氯化镧对CBRH-7919细胞Cyclin D_1基因表达的影响

目的:研究三氯化镧对大鼠肝癌细胞CyclinD1基因表达的影响,探讨三氯化镧抑制肝癌细胞生长的机制。方法:以体外培养大鼠肝癌细胞株CBRH-7919为研究对象,给予0.01、0.1、1.0mmol/LLaCl3,培养3、5、7d后,运用流式细胞术检测CBRH-7919的细胞周期时相变化。采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学技术检测CyclinD1的基因表达。结果:0.1、1.0mmol/LLaCl3组培养3、5、7d后,G0/G1期细胞百分数均有显著性增加;CyclinD1的转录和蛋白表达均显著减弱。结论:LaCl3可通过下调CyclinD1的转录和蛋白表达,使肿瘤细胞从G1期进入S期受阻,从而抑制CBRH-7919细胞的生长。

大肠癌组织Runx3基因启动子甲基化的研究

目的:检测大肠癌患者肿瘤组织及其相应的癌旁组织中Runx3基因表达和启动子区域甲基化状态,探讨甲基转移酶抑制剂5-aza-dc对结肠癌细胞系中Runx3表达的作用。方法:将手术切除的37例大肠癌组织和对应癌旁组织提取RNA和基因组DNA,采用RT-PCR检测Runx3基因的表达,甲基化特异PCR方法(MSP)检测Runx3基因启动子区域甲基化状态,用5-aza-dC处理结肠癌细胞系后,RT-PCR方法检测Runx3基因的表达。结果:37例大肠癌和对应癌旁组织中Runx3基因表达阳性率分别为100%(37/37),2.7%(1/37)。癌组织中Runx3基因表达明显降低(P<0.01)。MSP检测发现11例(30%)大肠癌标本及1例(3%)癌旁正常组织中Runx3基因呈甲基化状态。癌组织中Runx3基因甲基化明显高于癌旁组织(P<0.05)。结肠癌细胞系HT29 5-aza-dC处理后Runx3基因表达水平增加。结论:Runx3基因启动子甲基化和Runx3基因表达在大肠癌的癌旁组织和原发癌灶间存在显著性差异,可能与结肠癌的发生发展有关。

电针对吗啡戒断大鼠不同脑区FosB基因表达的影响

目的:观察电针对吗啡戒断大鼠戒断症状及不同脑区内FosB基因表达的影响。方法:采用逐日增量背部皮下注射盐酸吗啡注射液,末次注射后3h给予纳洛酮快速戒断建立吗啡戒断大鼠模型,随后治疗组采用电针穴位干预。戒断后1、3、7d,分别采用戒断症状评分表评定各组大鼠戒断症状,应用RT-PCR测定大鼠前额叶皮质、伏隔核内FosB基因的表达水平。结果:戒断后各组症状评分显示:与空白组比较,戒断后1、3、7d模型组与电针组评分均明显升高(P<0.01),而随戒断时间增加模型与电针组评分均逐渐下降;与模型组比较,戒断后1、3、7d电针组戒断评分均明显降低(P<0.01);实时荧光定量PCR结果表明:戒断后1、3、7d电针组大鼠伏隔核FosB mRNA表达较模型组显著下降(P<0.01),且呈先快后慢的趋势;前额叶皮质内FosB mRNA表达较模型组下降(P<0.05),但呈先慢后快的趋势。结论:电针可以逐渐改善吗啡戒断后大鼠戒断症状,同时下调不同脑区内FosB mRNA的表达,且其表达变化规律在奖赏环路不同脑区内存在差异。

WNT3A基因在先天性巨结肠症中的表达研究

目的:探讨WNT3A基因及其相关蛋白在先天性巨结肠症(HD)中的表达及WNT3A与HD的发病关系。方法:利用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质印迹检测60例HD患者狭窄段(无神经节细胞)和正常段(有神经节细胞)肠管组织WNT3A的表达情况,并对其表达进行定量分析与比较。结果:WNT3A在HD狭窄段肠管中mRNA表达量是正常段肠管中的2.6倍(P<0.05)。Western blot结果显示:WNT3A在HD狭窄段肠管中蛋白相对表达量为34.56±3.21,在正常段肠管中蛋白相对含量为16.37±2.46(P<0.05)。结论:WNT3A mRNA与蛋白在HD狭窄段肠管中高表达,提示WNT3A与HD的发生有密切关系,可能在先天性消化道畸形的肠管发育中具有重要作用。

抗凋亡基因Bag-1在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的:探讨抗凋亡基因Bag-1在不同分化程度非小细胞肺癌与正常组织中的表达。方法:采用免疫组织化学法检测60例非小细胞肺癌与9例正常组织中抗凋亡蛋白Bag-1的表达水平。结果:Bag-1在非小细胞肺癌组织中的阳性表达率为46.67%,正常组织中的表达率为11.11%,两者相比有显著性差异(P<0.01);而且Bag-1在低分化肺癌较高分化肺癌组织的表达增强(P<0.05)。结论:抗凋亡基因Bag-1在非小细胞肺癌组织表达增强,且与其病理分化程度有一定相关性,抑制其有效表达也许会成为肺癌分子靶向治疗的方向。

大肠癌组织中转移抑制基因nm23表达的意义

目的探讨nm23-H1基因表达与大肠癌生物学行为及预后的关系。方法应用抗nm23-H1单克隆抗体,采用免疫组化ABC方法对121例大肠癌组织进行标记分析。结果nm23-H1蛋白在大肠癌低分化组的阳性率明显低于高、中分化组(P<0.05),淋巴结转移组的阳性率明显低于淋巴结未转移组(P<0.05)。而临床Dukes分期中A期组阳性率分别显著高于C期组及D期组(P<0.05)。结论nm23-H1表达缺失的大肠癌具有更强的浸润及淋巴结转移能力,nm23-H1基因可作为判断大肠癌预后的一个重要指标。

非小细胞肺癌组织中RASSF_(1A)和p16基因启动子甲基化研究

目的:研究肺癌新型侯选抑癌基因Ras相关结构域家族基因1A(RASSF1A)和p16基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中的甲基化情况,揭示两基因表达失活的机制,为NSCLC的基因诊断和治疗寻找新途径。方法:用甲基化特异性PCR(MSP)方法对96例NSCLC患者癌组织及相应的远癌正常肺组织中RASSF1A和p16基因启动子甲基化状态进行检测。结果:(1)96例NSCLC组织RASSF1A甲基化率48.96%,p16基因34.38%,96例远癌正常肺组织均未发现此两基因甲基化。(2)RASSF1A甲基化率鳞癌组(64.29%)高于腺癌组(37.04%,P<0.05);p16基因甲基化率50岁以上组(44.93%)高于50岁以下组(7.41%,P<0.05),鳞癌(61.90%)高于腺癌(12.96%,P<0.05),有淋巴结转移组(46.67%)高于无淋巴结转移组(13.89%,P<0.05)。(3)RASSF1A与p16基因启动子CPG岛甲基化呈正相关(r=0.256,P<0.05)。结论:RASSF1A和p16在NSCLC尤其是鳞癌中频繁甲基化,可能是两基因表达失活的主要原因。

电针“内关"对急性心肌缺血大鼠心肌c-fos基因表达的影响

目的:探讨电针“内关”改善急性心肌缺血的机制。方法:将96只大鼠随机分为假手术组、心肌缺血模型组、心肌缺血模型加电针组,采用结扎冠状动脉左前降支建立急性心肌缺血实验模型,造模成功后,电针双侧“内关”。用生化方法检测血清心肌酶活性,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测心肌中c-fos基因的表达。结果:心肌缺血模型组血清心肌酶活性和心肌c-fosmR—NA表达显著高于假手术组(P<0.05),电针后降低,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:电针“内关”改善急性心肌缺血的机制与下调心肌组织c—fosmRNA的表达有关。

c-erbB-2基因与非小细胞肺癌细胞株放疗抵抗的相关性

目的:探讨人类表皮生长因子受体-2(c-erbB-2)基因与非小细胞肺癌细胞株放疗抵抗的关系。方法:采用RT-PCR测定肺腺癌(CALU-3和A549)和鳞癌NCL-H520细胞株的c-erbB-2 mRNA水平;采用流式细胞术检测CALU-3、A549和NCL-H520细胞株的c-erbB-2蛋白水平;绘制CALU-3、A549和NCL-H520细胞株的存活曲线。结果:肺腺癌CALU-3细胞株的c-erbB-2 mRNA水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株,有显著性差异(P均<0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间无显著性差异(P>0.05);CALU-3细胞株c-erbB-2蛋白的阳性率均高于A549和NCL-H520细胞株,有显著性差异(P均<0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间无显著性差异(P>0.05)。存活曲线显示,CALU-3、A549和NCL-H520细胞株间D0值无显著性差异(F=0.287,P>0.05),CALU-3和A549、A549和NCL-H520、CALU-3和NCL-H520细胞株间Dq值均有显著性差异(P值分别<0.05、<0.05、<0.01)。结论:肺腺癌CALU-3细胞株的c-erbB-2基因在mRNA和蛋白水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株;3种细胞株中,CALU-3对γ射线最不敏感,NCL-H520最敏感;推测c-erbB-2基因高表达可能与肺腺癌CALU-3细胞株放疗抵抗有关。

MIF基因、CCL_5基因及其受体CCR_5基因多态性与肺结核易感相关性研究

目的:探讨MIF基因、CCL_5基因及其受体CCR5基因多态性与青海地区不同人群肺结核易感性相关性。方法:病例组95例选择我院临床诊断和确诊的肺结核患者,对照组80例选择来我院健康体检人群,探讨MIF基因、CCL5基因及其受体CCR5基因多态性与青海地区不同区域不同人群肺结核易感性之间关系。结果:MIF基因、CCL5基因SNP位点的等位基因以及基因型在病例组和对照组分布差异均无统计学意义(P>0.05)。病例组CCL5-rs22800788的基因频率在和对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CCL_5-rs22800788的基因频率在病例组与对照组比较有差异,与青海地区结核病易感性可能存在相关性。

c-erbB_2和p53基因在乳腺癌表达中相关性及其意义

资料与方法 1 临床资料乳腺癌标本78例,患者年龄24～63岁,中位年龄51岁. 1期8例, 2期41例,3期 29例.保乳手术3例,改良根治术45例,根治术30例.术后病理检查腋窝淋巴结无转移12例, 转移66例.对照组为25例乳腺纤维瘤患者手术时切除的瘤旁正常乳腺组织标本, 患者年龄20～45岁,中位年龄43岁.

鼻内翻性乳头状瘤预后相关基因表达及临床意义

对鼻内翻性乳头状瘤（IP）预后相关基因表达及临床意义探讨如下。 1 对象和方法 1．1对象我院1980—02～1990—12鼻腔及副鼻窦内翻性乳头状瘤患者30例，其中男24例，女6例，男：女为4：1。年龄23～72岁（平均52）岁。40岁以上26例，40岁以下4例。发病部位依次为鼻腔，上颌窦，筛窦，鼻中隔。临床表现为鼻塞，鼻痒，流涕，易出血。部分患者可伴有头痛，嗅觉减退。获得随访结果20例，

siRNA沉默NGAL基因对结肠癌细胞行为的影响

目的探讨中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophils gelatinases-associated lipocalin,NGAL)的基因沉默作用对结肠癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法采用转染试剂盒ribo FECTTMCP Transfection Kit负载NGAL siRNA转染结肠癌细胞株HT-29(转染组),以未转染的HT-29细胞为对照组。实时荧光定量PCR和ELISA分别检测细胞NGAL mRNA水平和细胞培养上清液中NGAL蛋白水平,采用细胞划痕实验、Promega Cell Proliferation Assay G3580和BD C6流式细胞仪分别检测细胞迁移、增殖和凋亡情况。结果 HT-29细胞转染NGAL siRNA72 h后,转染组NGAL mRNA水平为对照组的0.123(P<0.05);转染48 h后,转染组细胞培养上清液中NGAL蛋白为(0.328±0.055)μg/L,低于对照组的(1.071±0.143)μg/L(t=8.205,P=0.001)。转染48 h后,转染组凋亡率为(18.87±1.65)%,低于对照组的(11.93±1.90)%(t=-4.752,P=0.009)。转染24 h后,转染组细胞迁移率为对照组的(23.35±6.35)%(t=11.930,P<0.01)。转染48 h后,转染组细胞增殖率为对照组的(90.00±5.30)%(t=1.983,P=0.118)。结论 NGAL siRNA可以抑制结肠癌细胞NGAL基因和蛋白的表达,抑制细胞迁移,促进细胞凋亡。

MMP-9、bcl-2基因与胃癌相关性研究

目的:探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、细胞凋亡抑制基因(bcl-2)在胃癌组织中的表达及其相关性分析。方法:利用免疫组化S-P法检测60例胃癌组织及20例癌旁正常组织中MMP-9、bcl-2的表达。结果:MMP-9的表达与肿瘤细胞的分化程度及临床病理分期密切相关(P<0.05),bcl-2的表达与胃癌的临床病理分期及细胞分化程度无显著性差异(P>0.05),MMP-9与bcl-2表达无明显相关性。结论:MMP-9、bcl-2表达与胃癌生物学行为之间关系密切。

中枢神经系统感染患儿脑脊液内神经肽Y和降钙素基因相关肽水平的变化及临床意义

目的:探讨神经肽Y(NPY)和降钙素基因相关肽(CGRP)在儿童中枢神经系统感染中的水平变化及临床意义。方法:采用放免法对29例中枢神经系统感染患儿和21例其他排除中枢神经系统感染的患儿进行脑脊液NPY和CGRP检测。结果:细菌性脑膜炎患儿脑脊液NPY明显高于对照组(P<0.01),而病毒性脑炎与对照组相比无显著性差异(P>0.05);细菌性脑膜炎、病毒性脑炎与对照组CGRP水平相比无显著性差异(P均>0.05)。结论:NPY在中枢神经系统感染时均升高,但以细菌性脑膜炎增高更明显,且与疾病的严重程度成正相关,是鉴别细菌性脑膜炎与病毒性脑炎的良好指标。CGRP在中枢神经系统感染时可升高,但对鉴别诊断意义不大。

氯胺酮对缺血再灌注脑损伤小鼠海马Bcl-2、Bax的影响

目的:研究氯胺酮对缺血再灌注脑损伤小鼠海马Bcl-2、Bax蛋白及大脑梗死体积的影响。方法:昆明纯种小白鼠共30只,随机分为4组,S组(n=7)为假手术组,C组(n=8)为缺血再灌注损伤对照组,I组(n=8)为线栓缺血梗死后氯胺酮治疗组,R组(n=7)为线栓缺血梗死再灌注后氯胺酮治疗组。结果:C组海马Bax蛋白表达明显高于其他3组(P<0.05),C组海马Bcl-2蛋白表达低于I组和R组(P<0.05)。C组脑梗死体积明显高于I组和R(P<0.05)组。C组、I组、R组的神经功能缺失体征评分无显著性差异(P>0.05)。结论:氯胺酮可降低缺血再灌注脑损伤小鼠海马凋亡基因Bax的蛋白表达和大脑梗死体积,提高抑制凋亡基因Bcl-2的蛋白表达。

低氧浓度改变对神经干细胞增殖分化及HIF-1α表达的影响

目的:探讨不同的低氧浓度下离体培养胎鼠脑皮质神经干细胞(NSCs)的增殖分化及HIF-1α的表达情况,以此分析HIF-1α对神经干细胞的增殖分化作用。方法:体外低氧条件下(3%O2和10%O2)培养扩增胚鼠皮质来源的神经干细胞,实验组分为3%O2低氧1、3、5d组;10%O2低氧1、3、5d组,常氧为对照组。免疫细胞化学染色法鉴定神经干细胞及其子代细胞。RT-PCR检测实验组细胞HIF-1αmRNA的表达。结果:各低氧组NSCs内HIF-1αmRNA的表达量均明显高于对照组,且10%O2组与3%O2组相比,低氧5dHIF-1αmRNA的表达量显著增加;实验组NSE阳性神经元的比率均明显高于对照组,10%O2组与3%O2组相比,低氧5d10%O2组中NSE阳性神经元的比率明显增高。结论:低氧可促进NSCs增殖分化及HIF-1αmRNA的表达,且HIF-1αmRNA的表达量与低氧浓度及时间有关。

siRNA靶向抑制MACC_1对结直肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:采用小干扰RNA(siRNA)靶向抑制结直肠癌细胞中MACC_1的表达,观察其对肿瘤细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:Real time-PCR检测MACC_1在结直肠癌组织和细胞株中的表达水平;利用Lipofectmin2000将MACC_1特异性siRNA转染进入结直肠癌细胞株LoVo和SW620;利用Real time-PCR和Western blot法明确细胞中MACC_1在mRNA和蛋白水平上的表达变化;通过CCK-8法检测肿瘤细胞增殖水平的变化,并利用Transwell系统检测肿瘤细胞体外迁移和侵袭能力的变化。结果:MACC_1在结直肠癌中表达较正常肠黏膜显著升高;与阴性对照比较,MACC_1siRNA能够特异性抑制LoVo和SW620细胞中MACC_1基因的表达,并引起肿瘤细胞的增殖水平降低,迁移和侵袭能力减弱。结论:利用siRNA特异性抑制MACC_1的表达,可以降低结直肠癌细胞的增殖水平和侵袭能力。MACC_1是抗肿瘤转移治疗的重要潜在靶点。

小鼠骨髓干细胞移植对生殖细胞生成的影响

目的:探讨绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓干细胞移植对不育模型小鼠生殖细胞的影响。方法:用白消安造小鼠无精子症模型,将绿色荧光转基因小鼠骨髓细胞处理后移植到无精子症模型小鼠睾丸网内,在小鼠分组干预后用Western-Blot方法检测各组小鼠睾丸VASA基因表达水平。结果:模型鼠睾丸病理切片显示睾丸曲细精管内生殖细胞显著减少(P<0.05),Western-Blot结果显示VASA基因蛋白水平较正常鼠显著降低(P<0.05)移植成功组小鼠VASA基因蛋白表达水平较模型对照组高(P<0.05),但仍低于正常鼠水平。结论:1含骨髓干细胞的骨髓混合细胞移植到无精子症模型小鼠睾丸网内,可明显促进生殖细胞生成。2VASA基因表达水平可作为睾丸性不育动物模型评价指标。