我国新出现的基因Ⅴ型乙脑病毒全基因组分子特征

目的了解我国新分离基因Ⅴ型乙脑病毒（XZ0934）与60年前马来亚（马来西亚）分离株（Muar）全基因组分子特征。方法使用ClustalX 2．0．9、DNAStar 7．1、Bioedit 7．2．5、MEGA 6．06等生物学软件系统分析两株乙脑病毒全基因组核苷酸、氨基酸序列同源性并进行系统进化分析。结果我国2009年西藏蚊虫标本中新分离基因Ⅴ型乙脑病毒（ XZ0934）与1952年马来亚（马来西亚）脑炎病例脑组织分离的基因Ⅴ型乙脑病毒（ Muar ）全基因组分别为10983和10988核苷酸，两株病毒核苷酸和氨基酸同源性分别为90．6％和98．3％。两株基因Ⅴ型乙脑病毒开放读码框（ ORF）均编码3433氨基酸，而其他4个基因型（1～4型）乙脑病毒ORF编码3432氨基酸。与其他基因型乙脑病毒相比，基因Ⅴ型乙脑病毒较其他基因型乙脑病毒在非结构基因NS4a区段插入一个丝氨酸（Ser），在3′非编码区（3′UTR）插入10～14核苷酸。 E基因分子遗传进化分析显示，XZ0934病毒株与2010年韩国蚊虫标本中检测到的基因V型病毒10-1827处于相邻进化分支，而与Muar株距离较远，提示基因Ⅴ型乙脑病毒在近60年间存在分子遗传进化差异。结论两株分离年代相距约60年的基因Ⅴ型乙脑病毒核苷酸与氨基酸之间均维持较高同源性，均保留了基因Ⅴ型乙脑病毒在非结构基因NS4a的氨基酸插入，但是新分离病毒与60年前分离病毒在分子遗传进化中存在差异。

抗白叶枯病Ⅴ型菌基因在杂交稻上的遗传表达研究初报

含显性抗病基因Xa -3的品种IRBB2 0 3和含Xa -7基因的IRBB7、80 72 -2与不育系珍汕97A、珍汕 972 3A杂交 ,其后代表现出不同的遗传特性 :IRBB2 0 3与两不育系的杂交F1均只抗Ⅴ型菌而不抗Ⅳ型菌 ;80 72 -2与两不育系的杂交F1表现抗Ⅳ型菌而感Ⅴ型菌 ,与珍汕 972 3A杂交的F2 对Ⅴ型菌的抗感分离比接近 9∶7,回交F1抗感分离比接近 3∶1 ;而IRBB7与两不育系的杂交F1为全感。说明不育系对抗病基因的表达有复杂的互作效应 。

中国专业长跑运动员Ⅴ型胶原蛋白α1链基因多态性分析

目的:解析中国专业长跑运动员Ⅴ型胶原蛋白α1链(COL5A1)基因rs12722、rs13946多态位点,探讨COL5A1基因多态性与杰出有氧运动能力的关联性。方法:采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术解析rs12722、rs13946单核苷酸多态性在201名专业长跑运动员和337名对照组中的分布特征。结果:(1)COL5A1 rs12722基因型在专业长跑运动员中的分布频率与对照组相比无显著性差异,但马拉松组T等位基因频率显著高于对照组。(2)COL5A1 rs13946等位基因和基因型在专业长跑运动员中的分布频率与对照组无显著性差异。(3)rs13946和rs12722位点组成的TC单体型在5 km、10 km组中的分布频率显著高于对照组。结论:rs12722位点T等位基因与马拉松跑能力有关联。

基因组Ⅰ型和Ⅴ型传染性胰脏坏死病毒的分离与鉴定

为调查造成中国西北某虹鳟Oncorhynchus mykiss养殖场幼鱼出现持续性死亡的病因,采用组织病理切片观察及分子鉴定的方法对患病虹鳟进行了鲑鳟常见病毒筛查,同时采用系统发育分析、电镜观察、滴度测定及人工回归感染等方法对分离获得的毒株进行了基因型分析、显微结构观察及毒力特性分析等研究。结果表明:患病虹鳟的肝、脾及肾组织细胞发生广泛性坏死,并伴随空泡化及溶解等现象;由病鱼内脏组织制备的组织匀浆悬液均能够感染CHSE-214细胞并产生典型细胞病变(CPE);从该养殖场的不同养殖区域共分离到3株传染性胰脏坏死病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV),其中IPNV-F1和IPNV-W2属于基因组Ⅰ型,分别与IPNV中国分离株WZ2016(KX355401)和ChRtm213(KX234591)同源性最高,VP2基因片段序列一致性分别为100%和98.5%,IPNV-W1属于基因组Ⅴ型,与意大利毒株IPNV/O.mykiss/I/PN/208/Mar88(MG543567)同源性最高,二者的VP2基因片段序列一致性为99.1%;接种病毒后的CHSE-214细胞内存在大量呈晶格状排列的无囊膜病毒粒子,3株IPNV分离株在CHSE-214细胞上的平均滴度分别为107.43 TCID 50/0.1 mL(IPNV-F1)、107.30 TCID 50/0.1 mL(IPNV-W1)和107.29 TCID 50/0.1 mL(IPNV-W2);分别以0.1 mL/尾的剂量向健康虹鳟幼鱼腹腔注射各IPNV分离株,在攻毒后60 d内虹鳟未出现死亡,攻毒后30 d时,病毒在组织中的平均滴度分别为104.50 TCID 50/0.1 g组织(IPNV-F1)、105.38 TCID 50/0.1 g组织(IPNV-W1)和104.13 TCID 50/0.1 g组织(IPNV-W2),攻毒后60 d时,病毒在组织中的平均滴度下降为103.43 TCID 50/0.1 g组织(IPNV-F1)、104.50 TCID 50/0.1 g组织(IPNV-W1)和103.21 TCID 50/0.1 g组织(IPNV-W2)。研究表明,该发病养殖场同时存在基因组Ⅰ型和Ⅴ型的IPNV,本研究首次从同一养殖场分离到两种基因型的IPNV,可为中国传染性胰脏坏死病(IPN)的防控提供参考。

根癌农杆菌Ⅵ型分泌系统关键组分ClpⅤ型ATPase基因表达及活性位点分析

细菌Ⅵ型分泌系统(type Ⅵ secretion system,T6SS)是近年发现的一种分布广泛且与细菌致病性密切相关的新型分泌系统,ClpⅤ型ATPase是不同细菌T6SS中均含有的关键保守组分,据推测可能为底物蛋白的分泌提供动力,但对其生化功能尚未进行深入鉴定。在本研究中,我们克隆了根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)C58中的ClpⅤ型ATPase基因atu4344并在大肠杆菌中表达,酶学检测证实了其ATPase活性,定点突变分析发现K232/608和E299/675突变体均丧失ATPase活性,表明Walker A模体和Walker B模体与其活性密切相关。这是首次对植物病原细菌T6SS中的ClpⅤ型ATPase进行生化鉴定和突变分析研究。

Ⅴ型胶原蛋白a1链基因多态性与有氧耐力表型的关联性

目的:通过分析Ⅴ型胶原蛋白a1链(COL5A1)基因多态性与60名中国北方汉族女子专业长跑运动员机能指标的关联性,探寻预测有氧耐力表型的分子标记。方法:采用联合测试法测得无氧阈和最大摄氧量相关指标,肺功能仪测得肺功能相关指标。用PCR-RFLP分析COL5A1基因的rs13946、rs12722多态性。结果:1)rs12722位点:不同基因型运动员之间无氧阈摄氧量、无氧阈摄氧量相对值有显著性差异(P<0.05),TT型运动员显著大于CC和CT型。2)rs13946位点:该位点与有氧耐力表型以及肺功能之间无关联(P>0.05)。3)rs13946-rs12722单体型:携带TC单体型运动员的无氧阈摄氧量和无氧阈摄氧量相对值指标均显著高于非TC单体型运动员(P<0.025)。结论:1)COL5A1 rs12722 TT基因型可作为预测中国北方汉族女子长跑运动员无氧阈强度下机体氧耗量的分子遗传学标记。2)TC单体型可作为预测北方汉族女子长跑运动员无氧阈摄氧量及其相对值指标的分子遗传学标记。