苗药紫金牛、铁扫帚组方干预慢性阻塞性肺疾病大鼠气道Wnt通路RhoA基因与TGF-β_(1)、MMP-9的相关性研究

目的研究苗药紫金牛、铁扫帚组方干预COPD大鼠气道Wnt通路RhoA基因与TGF-β_(1)、MMP-9的相关性,从而探讨苗药紫金牛、铁扫帚配方干预COPD大鼠气道重塑的调控机制。方法构建COPD大鼠模型,进行气道成纤维细胞的培养,采用ELISA检测气道成纤维细胞上清液中TGF-β_(1)、MMP-9细胞因子的含量,并运用Westernblot方法检测气道成纤维细胞中RhoA基因蛋白的表达,从而研究RhoA基因表达与TGF-β_(1)、MMP-9细胞因子的相关性及苗药紫金牛、铁扫帚的影响。结果与正常组相比,COPD大鼠模型组气道成纤维细胞上清液中TGF-β_(1)、MMP-9的含量升高,同时RhoA基因在也是表达增高。经苗药紫金牛、铁扫帚治疗后,细胞因子TGF-β_(1)、MMP-9与RhoA基因的表达则降低,从而得出TGF-β_(1)、MMP-9细胞因子与RhoA基因呈正相关。结论COPD大鼠气道成纤维细胞上清液中TGF-β_(1)、MMP-9细胞因子是COPD大鼠气道重建中成纤维细胞增殖的关键因子。而RhoA基因对组织纤维化有关,且能调控细胞因子TGF-β_(1)、MMP-9。苗药紫金牛、铁扫帚能够抑制炎性因子TGF-β_(1)、MMP-9的表达及WNT通路的RhoA基因的增殖,从而寻求苗药紫金牛、铁扫帚配方干预COPD气道重塑的机制。

敲低NIPBL基因对TGF-β1与IGF-1联合诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化的影响

目的:探讨敲低NIPBL基因对TGF-β1与IGF-1联合诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化的影响。方法:将慢病毒转染的NIPBL shRNA骨髓间充质干细胞分为TGF-β1组、TGF-β1+IGF-1组、NIPBL-空白对照组,并设立未转染的NIPBL+组,对上述四组细胞进行成软骨诱导分化;在培养7、14、21天时应用Western blot技术分别检测Sox-9、Collagen-Ⅱ的蛋白表达水平。结果:(1)在成软骨诱导的各阶段,Sox-9、Collagen-Ⅱ的蛋白表达量均为TGF-β1+IGF-1组高于TGF-β1组,NIPBL+组高于TGF-β1组和NIPBL-对照组(P<0.05);(2)在诱导7、21天时,Sox-9基因的蛋白表达量TGF-β1+IGF-1组高于NIPBL-对照组(P<0.05);(3)在各诱导阶段,TGF-β1+IGF-1组和NIPBL+组间差异无统计学意义。结论:敲低NIPBL基因导致TGF-β1与IGF-1联合诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化的能力降低。

γ-干扰素基因修饰肝细胞对感染日本血吸虫小鼠TGF-β_1及其受体的影响

目的： 探讨γ－干扰素 （ＩＦＮ－γ） 基因治疗对感染日本血吸虫小鼠转化生长因子－β１ （ＴＧＦ－β１） 及其受体的影响与抗肝纤维化作用的关系。方法： 将小鼠ＩＦＮ－γ基因重组腺病毒载体转染的肝细胞经脾移植到感染日本血吸虫尾蚴１６ ｗｋ 的小鼠， 采用ＥＬＩＳＡ、免疫组化和斑点杂交方法分析小鼠血清ＩＦＮ－γ与ＴＧＦ－β１ 表达的关系， 小鼠肝内ＩＦＮ－γ、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－βＲＩＩ与Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的关系。结果： ＩＦＮ－γ基因修饰的肝细胞经脾移植后能有效地表达， 显著地降低ＴＧＦ－β１ 、ＴＧＦ－βＲＩＩ的表达和Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量。结论： ＩＦＮ－γ基因治疗能有效地发挥抗血吸虫病肝纤维化作用， 可能与降低ＴＧＦ－β１及其受体有关。

肝纤维化不同证型与TGF-β_1/Smad基因蛋白表达关系的实验研究

目的:观察肝纤维化不同证型与TGF-β1/Smad基因蛋白的关系。方法:分别设立正常对照组、单纯肝纤维化组、肝纤维化肝郁脾虚证组和气虚血瘀证组,各模型组先用CCl4注射法复制肝硬化疾病模型,然后肝郁脾虚证组附加夹尾和大黄灌胃法、气虚血瘀证组附加游泳疲劳法,并以相应药物干预。采用免疫组化法测定肝组织TGF-β1、TβR-Ⅰ、Smad2/3及Smad7水平,用比色法测定肝组织Smad3 mRNA。结果:TGF-β1、TβR-Ⅰ、Smad2/3和Smad7在模型对照组中表达明显增强,以肝纤维化气虚血瘀组最为显著,肝纤维化肝郁脾虚组和单纯肝纤维化组的表达面积和强度相似。各模型组Smad3 mRNA呈上调表达,差异均具有十分显著的意义(P<0.01),以气虚血瘀组升高最明显,单纯肝纤维化组与肝郁脾虚组比较差异无显著性意义。结论:TGF-β1/Smad信号转导通路参与了肝纤维化的发生发展,肝纤维化不同证型之间TGF-β1/Smad基因蛋白表达有差异。

基因修复关节软骨缺损的可行性研究:外源性Ad-TGF-β_1转染修饰兔骨髓间充质干细胞

目的利用 Ad5/CMV－ TGF－β 1转染体外培养兔骨髓间充质干细胞，测定 TGF－β 1的表达产物为关节软骨缺损的基因治疗提供实验基础。方法采用体外培养法对兔骨髓间充质干细胞进行原代培养，应用已构建好的 Ad5/CMV－ TGF－β 1真核载体对其进行转染，并用免疫组织化学方法对转染细胞进行表达产物测定。结果采用腺病毒转染技术能够成功的实现骨髓间充质干细胞的外源性基因修饰，没有发生明细的细胞毒性反应； Ad5/CMV－ TGF－β 1对骨髓间充质干细胞的转染率为 95％左右；转染 8周后仍能观察到 TGF－β 1的表达。结论采用真核表达载体 Ad5/CMV－ TGF－β 1可以成功转染体外培养的骨髓间充质干细胞并可获得 TGF－β 1的高表达。

肝细胞癌组织中TGF-β_1基因mRNA和蛋白表达的研究

目的 从转录和翻译两个水平探讨转化生长因子 β1(TGF β1)在肝细胞癌 (HCC)中的表达。方法 用免疫组化技术 ,分别检测 36例肝癌组织和癌旁肝组织中TGF β1及转化生长因子 β1Ⅱ型受体 (TβRⅡ )蛋白的表达 ;用原位杂交方法检测 2 6例肝癌组织和癌旁肝组织中TGF β1mRNA的表达 ,并将TGF β1蛋白与TGF β1mRNA ,TGF β1mRNA与TβRⅡ蛋白进行比较。 结果 (1)肝癌组织中TGF β1mRNA、TGF β1蛋白表达均明显高于癌旁组织 (P <0 0 1) ;肝癌组织TβRⅡ蛋白表达明显低于癌旁组织 (P <0 0 1)。 (2 )肝癌组织中TGF β1mRNA与TGF β1蛋白呈正相关 ,TGF β1mRNA与TβRⅡ蛋白表达呈负相关。 结论 肝癌组织中TGF β1基因的变化发生在多个水平 ;TGF β1在肝癌发生中发挥重要作用 ;TGF β1抑制作用的减弱主要是由于TβRⅡ蛋白表达减弱引起。本研究为肝癌发病机制和基因治疗提供理论依据。

贵州汉族TGF-β_1基因多态性与系统性红斑狼疮相关性的研究

目的:探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)基因启动子-509C/T多态性与贵州汉族人群系统性红斑狼疮(SLE)的相关性。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,分析80例SLE患者及95例正常对照组的TGF-β1基因启动子-509C/T多态性。结果:SLE组与正常对照组-507C/T基因型频率分布有差异(P<0.05),-509CC基因型SLE组高于对照组(35% vs 21.1%),而-509TT型SLE组明显低于正常对照组(18.75% vs 36.8%);SLE患者组-509位点的等位基因频率与正常对照组比较差异也有显著性(P<0.005),SLE组C等位基因频率显著高于对照组(58.1% vs 42.1%),T等位基因频率低于对照组(41.9% vs 57.9%)。结论:贵州汉族人群TGF-β1基因启动子-509C/T多态性与SLE显著相关。

胃癌组织中TGF-β_1和TβR_1基因的表达及意义的研究

目的 :观察转化生长因子β1 (TGF-β1 )及其受体 I(TβR1 )基因在人类胃癌组织中的表达及其与胃癌病理生物学行为的关系。方法 :应用抗 TGF-β1 和 TβR1 多克隆抗体对 10 7例胃癌组织中的 TGF-β1 和 97例胃癌组织中的 TβR1 基因表达蛋白进行了 S- P免疫组织化学方法检测。结果 :TGF-β1 在胃癌组织中的阳性表达 (75 % )明显高于癌旁组织 (2 4.4% )及正常组织 (2 9.2 % ) ,差异非常显著 (P <0 .0 1) ;TRβ1 在胃癌组织中阳性表达 (19.6 % )明显低于癌旁组织 (79.6 % )和正常组织 (75 .6 % ) ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :TGF-β1 和 TβR1 基因的异常表达与胃癌的发展及恶性程度有关。

大鼠半乳糖性白内障晶状体中TGF-β_1基因的表达

目的 研究转化生长因子 β1(TGF β1)基因在大鼠白内障发生过程中的表达。方法 给 3周龄大鼠单眼球后注射 2 0 %半乳糖生理盐水诱导白内障的发生 ,运用RT PCR方法测定在不同时相大鼠晶状体中TGF β1基因的表达。结果 半乳糖注射后晶状体上皮细胞TGF β1mRNA于 8h开始上升 ,2 4h达高峰 ,是正常对照的 4倍 ,2d后迅速下降 ,4d完全恢复到正常水平。结论 在白内障形成的早期 ,晶状体细胞中TGF β1呈高表达 ,提示TGF

TGF-β_1基因修饰树突状细胞对免疫排斥反应影响的研究

目的探讨术前输注TGF-β1基因修饰的供者树突状细胞(dendriticcell,DC)对大鼠肝移植免疫排斥的抑制作用及相关机制。方法TGF-β1重组腺病毒转染供者DC,静脉输注受体大鼠,1周后建立大鼠肝移植免疫排斥模型并鉴定表达,记录存活时间,凝胶电泳迁移率试验法检测脾T细胞、Kupffer细胞NF-кB活性及相关细胞因子TNF的表达,观察移植肝排斥病理改变。结果Ad-TGF-β1-DC输注组移植大鼠的T细胞、Kupffer细胞活性及TNF表达明显低于对照组,排斥病理改变明显减轻,存活时间延长,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论TGF-β1-DC能有效降低T细胞和Kupffer细胞活性,提高移植肝免疫耐受,延长存活时间。

p15^(INK4B)基因转染联合TGF-β_1对人食管鳞癌的抑制作用

目的:探讨p15INK4B基因转染与TGF-β1联合应用对人食管鳞癌细胞系EC109细胞增殖和凋亡的影响。方法:脂质体介导将pCDNA3.1(+)-p15转染EC109细胞,稳定筛选后加入10ng/ml的TGF-β1。PCR检测外源p15基因,Westernblot检测转染细胞P15蛋白的变化。用MTT、集落形成实验、流式细胞仪和透射电镜检测p15转染TGF-β1对EC109增殖和凋亡的影响。结果:联合应用与二者单独应用相比,明显抑制EC109生长速度,集落形成率显著降低(P<0.01),发生G1/S阻滞,G1期比例显著升高(P<0.05),S期比例明显降低(P<0.05),凋亡率明显升高(P<0.01)。透射电镜发现二者联合应用诱导EC109发生明显的细胞凋亡。结论:p15基因转染与TGF-β1联合应用可以进一步增强对食管鳞癌EC109细胞的抑制作用并诱导其凋亡。

TGF-β_1对甲状腺相关性眼病眼外肌成纤维细胞Smads基因表达的影响

目的:测定转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对甲状腺相关性眼病(thyroid-associated ophthalmopathy,TAO)患者纤维化眼外肌来源的成纤维细胞(orbital fibroblasts,OF)细胞Smad3,Smad4,Smad7基因表达的影响。方法:采用实时荧光定量逆转录聚合酶连反应(real-time quantitative RT-PCR)观察5μg/L TGF-β1刺激OF在不同时间点(0h;15,30min;1,2,4h)表达Smad3 mRNA,Smad4 mRNA,Smad7 mRNA的变化。结果:5μg/L TGF-β1刺激OF 15min后,Smad3 mRNA的表达量已显著增加,为对照组的10.71倍,于1h达顶峰,为对照组的25.07倍(P<0.01),持续近2h,然后呈下降趋势,4h基本恢复正常;5μg/L TGF-β1刺激OF 15min后,Smad4 mRNA的表达量开始增加,为对照组的1.54倍,于1h达顶峰,为对照组的15.99倍(P<0.01),然后呈下降趋势,4h基本恢复正常;5μg/L TGF-β1刺激OF30min后,Smad7 mRNA的表达量明显开始增加,为对照组的3.21倍,持续至4h为对照组的14.66倍(P<0.01)。结论:TGF-β1可活化眼眶成纤维细胞Smads信号通路。在一定的时间范围内,诱导OF表达Smad3 mRNA和Smad4 mRNA呈先增加后下降的趋势,而Smad7 mRNA表达则呈现持续增加的趋势,说明TGF-β1/Smads这一纤维化相关的经典信号转导通路可能在TAO眼外肌纤维化机制中发挥了重要的作用。

应用RT-PCR方法研究FSK88处理的UMR106细胞TGF-β_1的基因表达

FSK88是本实验宣从植物中提取纯化的二萜类活性物质,是一种诱导分化剂。以大鼠成骨肉瘤细胞(UMR106)为模型,分别用FSK88、RA、FR处理UMR106细胞,研究了FSK88处理的UMR106细胞TGF-β1的基因表达,结果与对照组相比,FSK88组TGF-β1的基因表达上调了23.18％。

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β_1mRNA基因表达的影响

目的:采用治疗小儿病毒性肺炎痰热闭肺证的有效中药制剂清肺口服液,研究其对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞的转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA基因表达的影响。方法: 以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,用清肺口服液含药血清作用于该细胞,另设正常细胞组、病毒对照组、利巴韦林组,采用原位杂交法检测不同组细胞TGF-β1的mRNA 基因表达,并进行比较。结果:病毒对照组较正常细胞组的TGF-β1mRNA基因表达明显增强(P <0．01),含药血清组可显著降低3I、7b型腺病毒攻击后细胞TGF-β1的mRNA表达(P<0．01)。结论:腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TGF-β1mRNA表达增高;清肺口服液可下调TGF-β1的mR- NA表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。

雌二醇代谢产物对肝星状细胞增殖及TGF-β_1、CTGF表达的影响

目的研究雌二醇(E2)代谢产物:2-羟雌二醇(2OHE)、2-甲氧雌二醇(2MeOE)、4-羟雌二醇(4OHE)对活化的人肝星状细胞(LX-2)增殖及对细胞内转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)水平的影响。方法用不同浓度的E2、2OHE、4OHE、2MeOE处理LX-2细胞48 h,实验终点用MTT法检测LX-2增殖情况、RT-PCR方法检测TGF-β1、CTGF mRNA的水平及细胞免疫化学法检测TGF-β1、CTGF蛋白的水平。结果在10-9M^10-7M的药物浓度范围,E2及E2代谢产物干预组的LX-2细胞光密度值(optical density,OD)和细胞内TGF-β1、CTGF mRNA及蛋白水平均较空白对照组低,E2代谢产物干预组各项指标下降更为明显,尤以2MeOE组突出,差异具有显著性(P<0.05)。结论 E2及E2代谢产物均能抑制肝星状细胞的增殖、下调TGF-β1和CTGF蛋白浓度,并呈剂量效应关系;比较同一浓度的不同干预药物,E2代谢产物的作用均强于E2,其中2MeOE的生物活性最强。

带蒂大网膜包肾术对肾小球硬化大鼠肾皮质TGF-β_1基因表达的影响

目的 :探讨带蒂大网膜包肾术 (POT)对肾小球硬化大鼠肾皮质转化生长因子 (TGF - β1 )基因表达的影响。方法 :采用单侧肾切除加2次注射阿霉素制备肾小球硬化大鼠模型 ,观察带蒂大网膜包肾术对肾小球硬化大鼠肾皮质TGF - β1 基因表达的影响。结果 :带蒂大网膜包肾术使肾小球硬化大鼠肾皮质TGF - β1 基因表达明显上调 ,肾小球硬化减轻。结论 :带蒂大网膜包肾术能上调肾小球硬化大鼠肾皮质TGF - β1 基因表达 。

宫颈鳞状细胞癌组织中TGF-β_1、p53基因的原位杂交检测

宫颈癌是最常见的女性生殖道恶性肿瘤，死亡率居妇科肿瘤第２位，其发生是多因素、多步骤的复杂过程〔１〕。通过研究宫颈鳞状细胞癌组织中ＴＧＦ－β１、ｐ５３基因的变化，进一步揭示宫颈癌发生的分子机制。１材料和方法１．１标本２２例宫颈鳞状细胞癌均为本院妇产科手...

糖尿病肾病患者外周血单个核细胞TGF-β_1基因表达的临床研究

为探讨外周血单个核细胞转化生长因子 (TGF- β1 )在糖尿病肾病 (DN)发生、发展中的作用 ,采用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)技术半定量方法 ,对糖尿病 (DM)及 DN肾功能衰竭 (DRF)患者外周血单个核细胞(PBMC) TGF-β1 m RNA的表达水平进行测定 ,并与健康人 (对照组 )比较。结果显示 ,DRF组 TGF-β1 的表达最强 ,其次为 DN、DM组 ,对照组表达最弱 ,三者间两两比较 P均 <0 .0 1。认为 TGF- β1 参与了 DN病理变化的全过程 ,测定 PBMC中 TGF- β1 m RNA的表达 ,是判断 DN患者

IL-2基因转移对卵巢癌细胞系SKOV3细胞周期及TGF-β_1表达的影响

目的 探讨人白细胞介素2(IL-2)基因转移对卵巢癌细胞周期和转移生长因子β_1(TGF-β_1)表达的影响。方法 采用流式细胞术探讨IL-2基因转移对卵巢癌细胞SKOV3细胞周期及TGF-β_1表达的影响。结果 SKOV3/IL-2细胞GO、G1期细胞比例明显高于对照组,而S、M期细胞明显少于对照组,P<0.001,表现为G0/G1期阻滞。SKOV3、SKOV3/Neo、SKOV3/IL-2细胞TGF-β_1阳性百分率及荧光强度分别为98.64％、97.00％、99.52％和143、138、163,SKOV3/IL-2平均荧光强度较亲本细胞明显提高,P<0.001,差别非常显著。结论 IL-2基因转移可引起卵巢癌细胞系SKOV3细胞周期G0/G1期阻滞,TGF-β_1表达的增强有可能是IL-2基因转移诱发细胞增殖抑制的原因之一。

凋亡相关基因bcl-2和TGF-β_1在输尿管移行细胞癌中的表达研究

目的 了解输尿管移行细胞癌组织中bcl 2和TGF β1 蛋白的表达。方法 采用免疫组化技术 ,检测 5 2例输尿管移行细胞癌与 1 1例正常输尿管移行上皮细胞中bcl 2和TGF β1 蛋白的表达。结果 1 1例正常输尿管中bcl 2蛋白表达阳性 2例 (1 8.2 % ) ,TGF β1 蛋白表达阳性 1 1例 (1 0 0 % )。 5 2例输尿管移行细胞癌中bcl 2蛋白表达阳性 2 0例 (3 8.5 % ) ,TGF β1 蛋白表达阳性 2 6例 (5 0 % )。bcl 2阳性率在高、中、低分化癌中分别为 2 1 .1 %、3 6 .4%和 72 .7%。在TiS～T1 和T2 ～T4期阳性率分别为 3 1 .6 %和5 7.1 %。TGF β1 阳性率在高、中、低分化癌中分别为 73 .7%、45 .5 %和 1 8.2 %。在TiS～T1 和T2 ～T4期阳性率分别为 6 0 .5 %和 2 1 .4%。在输尿管移行细胞癌中bcl 2表达程度随肿瘤分级增加而增加 ,在各级肿瘤分化间差异有显著性 (χ2 =7.93 ,P <0 .0 5 )。浅表性癌bcl 2表达阳性率低于浸润性癌 ,但差异无显著性 (χ2 =2 .82 ,P >0 .0 5 )。随肿瘤分级增加 ,TGF β1 阳性率下降 (χ2 =8.90 ,P <0 .0 5 ) ,随肿瘤由浅表型向浸润型转化 ,阳性率下降 (χ2 =6 .2 6 ,P <0 .0 5 ) ,差异均有显著性。结论 bcl 2和TGF β1 参与了输尿管移行细胞癌的发生发展过程 ,可作为评估其生物行为的瘤标。