虹鳟肿瘤坏死因子(TNFα)基因体外表达与纯化的研究

将虹鳟两种肿瘤坏死因子TNFα1和TNFα2基因的成熟肽编码区域 ,用带有BamHI和HindIII酶切位点的基因特异性引物进行PCR扩增。扩增片段用限制性内切酶消化并连接到pQE30表达载体上 ,连接产物转化到大肠杆菌JM10 9感受态细菌中。转化子经PCR筛选 ,质粒测序 ,完成了虹鳟两种TNFα基因重组子的构建。重组子经体外培养和诱导后 ,获得了高效表达的TNFα重组蛋白。高效表达的重组TNFα不受诱导剂IPTG的影响 ,并且由于重组子高效表达而形成了包涵体 ;重组蛋白产量约占菌体蛋白总量的 2 5 %— 30 %。应用Ni NTA和固定金属亲和层析 (IM PC)技术 ,在变性条件下获得了高度纯化的重组蛋白 ,纯化重组蛋白的产量约为 0 5— 1mg L。