基因修饰细胞介导的肿瘤治疗

肿瘤的基因治疗最终是通过基因修饰细胞介导完成的。本文就免疫基因修饰的肿瘤细胞疫苗、自杀基因或抑癌基因修饰的细胞疫苗、基因修饰的树突状细胞疫苗以及基因修饰的淋巴细胞、造血干细胞等各种基因修饰细胞在介导肿瘤治疗中的特点、作用及进展作一综述。

基于基因修饰细胞系的生物检定法研究进展

以药物的作用机制为基础,采用细胞与分子生物学技术构建特定基因修饰细胞系并开发相应的检测方法,可用于相关产品的生物检定。这种基于基因修饰细胞系的生物检定法在药物的质量控制领域具有广泛的应用前景。本文探讨了基因修饰细胞系的构建策略及检测方法的基本原理,并概述了基于基因修饰细胞系的生物检定法在重组蛋白类、疫苗类、基因治疗类等不同产品质量评价中的研究进展及应用情况。

基因修饰细胞介导的肿瘤治疗

肿瘤的基因治疗 ,最终都是通过基因修饰细胞介导完成的。这些基因修饰细胞可分为①免疫基因修饰的肿瘤细胞疫苗 ;②自杀基因或抑癌基因修饰的细胞疫苗 ;③基因修饰的树突状细胞 (DC)疫苗 ;④基因修饰造血干细胞 ;⑤基因修饰淋巴细胞 ;⑥基因修饰血管内皮细胞及其它。它们在肿瘤的基因治疗中各有特点 ,本文主要介绍这些方面的研究进展。

脑内移植的机理探讨及基因修饰细胞在脑内移植中的应用

脑内移植从１８９０年至今虽有百年的历史，但成功的脑内移植仅是近十余年的事。理想的脑内移植是移植入宿主脑内的胚脑神经元能与宿主神经元重建突触环路并相互整合，移植存活的细胞在宿主脑内发挥生物学微泵的作用。随着分子生物学的发展，神经科学家们利用基因工程技术，将已知疾病所缺乏的基因，通过转染的方法将所需基因转染入供体细胞，再移植入宿主脑内，以替供失去的神经元。目前研究工作还刚兴起，但可能预测，在未来的世纪中，基因修饰细胞脑内移植将成为治疗神经系失常疾病的新手段，新措施。

基因修饰细胞治疗产品及欧盟监管法规介绍

随着医学技术的不断进步和科学研究的不断深入,基因修饰细胞治疗作为一种新的治疗方式受到社会各界的广泛关注,并成为辅助肿瘤治疗的一种新手段。各国对于其政策监管各有不同。本文对欧洲药品管理局(EMA)发布的关于基因修饰细胞治疗产品的监管政策进行梳理分析,以期为我国基因修饰细胞治疗类产品的发展提供一些启示与借鉴。

嵌合抗原受体基因修饰T细胞免疫疗法在肺癌治疗中的研究进展

肺癌是全世界所有癌症中发病率和病死率最高的恶性肿瘤之一,目前仍缺乏较好的治疗手段。嵌合抗原受体基因修饰T(CAR-T)细胞免疫疗法作为一种新的治疗方法在血液系统恶性肿瘤中疗效显著,也为肺癌等实体肿瘤的免疫治疗开辟了新途径。然而,由于实体瘤的异质性、肿瘤微环境免疫抑制、肿瘤靶抗原逃逸及脱靶毒性等问题,造成CAR-T细胞免疫疗法在肺癌治疗中的应用存在挑战和障碍。本文总结了CAR-T细胞免疫疗在肺癌治疗中的最新研究进展,包括CAR-T细胞生物学特征、靶点选择、早期临床研究和治疗不良反应,并提出肺癌CAR-T细胞免疫疗法的优化策略,旨在为肺癌的临床免疫治疗提供新思路。

微囊化Maspin基因修饰细胞对乳腺癌细胞Bcap37运动及黏附功能的影响

目的探讨Maspin在抗肿瘤转移过程中的作用及微囊化基因修饰细胞治疗恶性肿瘤的可能性和可行性。方法将微囊化Maspin基因修饰的中国仓鼠卵巢上皮细胞(CHO细胞)与乳腺癌细胞Bcap37进行共同培养,观察Bcap37细胞运动功能的变化;观察Bcap37细胞对同质细胞(Bcap37)和异质细胞(人血管内皮细胞ECV204)黏附功能的变化;同时观察被干预后的Bcap37细胞黏附分子CD44v6和E2Cadherin表达的改变。结果经微囊化Maspin基因修饰的CHO细胞处理后的Bcap37细胞,其迁徙功能明显减弱,对Bcap37细胞同质黏附功能明显增强,对ECV204细胞异质黏附功能明显减弱;经微囊化CHO/Maspin细胞处理后,Bcap37细胞的黏附分子E2Cad表达增强,而CD44v6表达有所降低。结论微囊化Maspin基因修饰的CHO细胞对乳腺癌细胞Bcap37的运动和黏附功能有一定影响;Maspin通过抑制肿瘤细胞的运动功能、异质黏附功能和增强同质黏附功能抑制肿瘤细胞的转移;微囊化基因修饰细胞可以用于治疗恶性肿瘤。

IL-21和CCL19修饰可提高NKP30 CAR-T细胞对肺癌的杀伤效率并促进其肿瘤浸润

目的探讨细胞因子IL-21和趋化因子CCL19修饰的NKP30 CAR-T细胞是否增强对肺癌的杀伤和浸润作用。方法在NKP30 CAR基础上融合基因IL-21和CCL19构建IL-21-CCL19 NKP30 CAR;CAR-T细胞的培养使用CD3CD28单抗及细胞因子IL-2刺激;流式细胞术检测免疫细胞表型;迁移实验检测IL-21对免疫细胞的迁移作用;乳酸脱氢酶(LDH)及成球实验检测CAR-T细胞的杀伤及浸润能力;酶联免疫斑点技术(ELISPOT)检测IFN-γ的分泌数量;ELISA检测IL-21及CCL19的分泌情况;体内实验中,将肿瘤细胞显微注射到斑马鱼卵黄囊,构建斑马鱼移植瘤模型,24 h后将免疫细胞注射至同样部位,体式荧光显微镜拍摄荧光。结果NKP30配体(B7H6)在正常组织及血液细胞不表达,在肺癌细胞上高表达(90%以上)。IL-21-CCL19 NKP30 CAR-T细胞与NKP30 CAR-T细胞和常规T细胞相比,具有更强的增殖能力、迁移能力及中心记忆T细胞的形成(P<0.001),免疫抑制分子CTLA4与PD1显著降低(P<0.005),对肺癌细胞具有更强的杀伤能力(P<0.001),伴随IFN-γ数量明显增加(P<0.001)。IL-21-CCL19 CAR-T细胞杀伤肺癌细胞中产生大量细胞因子IL‑21(3152.33±526.74 pg/mL)和趋化因子CCL19(1853±211.95 pg/mL)。体内实验中,CAR-T细胞和普通T细胞比较,具有较强的杀伤能力和增殖能力,但2种CAR-T细胞无明显差异(P>0.05)。结论IL-21-CCL19 NKP30 CAR-T细胞更容易浸润到肿瘤内部,有效杀伤肿瘤细胞,同时产生更多的记忆T细胞。

基因修饰细胞在脑内移植研究中的应用

用外源正常基因修饰细胞,使之获得合成和分泌神经营养因子或特异性神经递质的功能,然后把这种细胞植入脑内以治疗中枢神经系统疾患。这种新的脑内移植治疗模式,有其独特的优越性,可望在临床中得到应用。

NT_3基因修饰施万细胞促进移植的神经干细胞在损伤脊髓内分化为神经元样细胞

目的探讨神经营养素-3(NT-3)基因修饰施万细胞(SCs)对植入全横断性脊髓损伤处的神经干细胞(NSCs)分化为神经元样细胞的影响。方法将NSCs单独移植或与NT-3基因修饰SCs、LacZ基因修饰SCs和SCs联合移植到全横断性脊髓损伤处,67 d后用免疫组织化学方法观测NSCs的分化,并计算其中神经元样细胞的分化率。结果NSCs在损伤脊髓内可分化为神经元样细胞和神经胶质样细胞,与未基因修饰的SCs的作用相比,NT-3基因修饰的SCs能更有效地提高NSCs向神经元样细胞的分化率,而LacZ基因修饰的SCs与未修饰SCs没有明显区别。结论NT-3基因修饰SCs能促进NSCs在损伤脊髓内向神经元样细胞分化。

基因修饰神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后神经营养素养-3表达及神经细胞凋亡的影响

目的探讨基因修饰神经干细胞(NSCs)移植大鼠损伤脊髓后对神经营养素-3(NT-3)表达及神经细胞凋亡的影响。方法 SD大鼠80只随机分为假手术组(Normal组)、单纯损伤组(SCI组)、NSCs移植组(NSC组)、NT-3基因修饰NSCs移植组(NT-NSC组)。采用电控脊髓损伤打击装置致大鼠SCI模型,25g/cm(10g×2.5cm)力致伤T13脊髓。5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)法标记处于对数生长期的NSCs,SCI后即刻进行NSCs及基因修饰NSCs移植,分1、3、7、14、28d5个时间点运用免疫组织化学的方法检测NT-3、BrdU的表达,采用原位末端脱氧核苷转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸生物素缺口末端标记技术(TUNEL法)标记凋亡细胞,改良Rivlin法(斜板试验)观察大鼠后肢运动功能的恢复情况。结果 NT-NSC组与NSC组在脊髓损伤区域内均可检测到Brdu阳性细胞,移植后7、14、28dBrdU阳性NSCs数与NSC组相比明显增多,差异有统计学意义(t=9.439、8.918、4.185,P均<0.05)。NT-NSC组NT-3表达高峰延迟,在14d达到最高值,其平均OD值与其他实验组各时间点相比均增高,差异有统计学意义(P<0.05);移植后7、14、28d凋亡细胞数比NSC组明显减少(P<0.05),斜板试验评分比NSC组明显提高(P<0.05)。结论 NT-3基因修饰NSCs移植较单纯NSCs移植更容易在脊髓损伤区域存活,并能通过增强NT-3的表达来抑制神经细胞的凋亡,从而促进大鼠损伤脊髓的功能恢复。

基因修饰细胞治疗产品的非临床研究关注点讨论

随着嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)系列重磅产品的获批上市,基因修饰细胞作为新型治疗产品,引发了越来越多的研发热情。此类产品在带来全新治疗思路的同时,又因其细胞产品、基因产品的叠加风险,使高风险与高预期并存。由于具有个性化、多样化、复杂性、特殊性等特点,对此类产品的安全性、有效性评价面临着特殊的科学挑战,特别是其非临床研究与传统小分子药物具有显著区别。首次应用于人体前的安全性评价、药理毒理等非临床研究对于客观评价产品、保护受试者均具有极其重要的意义。本研究结合近期国内外药品监管机构发布的指导原则讨论了基因修饰细胞治疗产品的非临床研究关注点,以期为行业提供参考。

嵌合抗原受体基因修饰T细胞治疗胶质母细胞瘤的研究进展

胶质母细胞瘤(GBM)是成人最常见、最致命的原发性脑肿瘤。目前GBM的常规治疗包括手术、局部和全身化疗、放疗等,但治疗效果常不理想。嵌合抗原受体基因修饰T细胞(CAR-T细胞)治疗作为一种新的过继性免疫疗法,已经在血液肿瘤治疗中取得了较好的临床效果。CAR-T细胞可穿过血脑屏障,且不通过抗原呈递、不依赖主要组织相容性复合物即可识别预定义的肿瘤表面抗原。在GBM体外试验中,CAR-T细胞治疗的效果显著,但其临床应用仍存在诸多挑战。

基因修饰T细胞肿瘤过继免疫治疗安全性的研究进展

基因修饰T细胞(CAR-T,TCR-T)赋予其肿瘤靶向性、更强的杀伤活性和持久的生命力,在恶性血液肿瘤和实体瘤的临床试验中取得了可喜的效果。然而,不断积累的的临床资料也发现了安全性担忧:炎症细胞因子级联反应引发的肿瘤靶向毒性;抗原识别相关的脱靶效应、非肿瘤靶向效应、移植物抗宿主病等,不仅难以预见而且复杂难治,促使研究人员以毒性发生机制为切入点,尝试应用自杀基因开关、细胞内凋亡酶调控、分离式CAR受体、抑制性CAR受体等调控策略,实现对基因修饰T细胞时间和空间的精准控制,预防毒性反应的发生。本文综述基因修饰T细胞的安全问题及应对策略。

嵌合抗原受体基因修饰T淋巴细胞治疗肺癌的研究进展和挑战

近年来,免疫疗法尤其是单克隆抗体靶向药物越来越多地应用于肺癌的临床治疗,但仍有很多局限性。嵌合抗原受体基因修饰T淋巴细胞(chimeric antigen receptor gene modified-T lymphocytes,CAR-T)疗法对于部分B细胞淋巴瘤和白血病的疗效显著,也为实体瘤的免疫治疗开辟了新途径。肺癌CAR-T疗法的热门靶点包括间皮素(MSLN)、黏蛋白突变体(TnMUC1)、表皮生长因子受体(EGFR)、人表皮生长因子受体2(HER2)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)和δ样配体3(DLL3)等,但相关临床研究均处于早期探索阶段。所面临的主要障碍包括脱靶毒性、肿瘤免疫抑制微环境和CAR-T细胞体内效能不足等。通过基因编辑改进CAR结构、设计多靶点CAR或组合应用多靶点CAR-T细胞、精细调控CAR-T细胞体内动态分布、改进给药方式或联合其他免疫治疗等策略可能有助于解决这些问题。

嵌合抗原受体基因修饰的T细胞免疫治疗骨肉瘤的研究进展

骨肉瘤(OS)是一种常见骨恶性肿瘤。常规治疗方式对患者预后生存率有一定改善,但对已转移患者的作用十分有限。靶向骨肉瘤相关抗原的嵌合抗原受体基因修饰的T细胞(CAR-T)疗法是一种很有前景的治疗方式。包括靶向HER-2、IL-11Rα、ROR1和GD2等骨肉瘤相关抗原的特异性CAR-T治疗在一些基础和临床研究中均有报道,且已经表现出了对骨肉瘤良好的治疗效果。

嵌合抗原受体基因修饰T细胞早期临床试验的探讨

目的对影响早期临床试验设计的因素进行探讨,并深入分析早期临床试验的设计原则和方法。方法从产品特征、临床前研究、安全性风险等方面分析CAR-T细胞临床试验的影响因素,并从试验目的、研究对象、试验设计等角度总结CAR-T细胞早期临床试验的考虑要点。结果 CAR-T细胞的产品特征、临床前研究方法和安全性风险与其它药物有显著差异,对早期临床试验有重要影响。结论在早期临床试验中探索CAR-T细胞的有效剂量、不良反应、初步的有效性非常重要,此外,还应在早期临床试验中验证CAR-T细胞的临床可及性及工艺稳定性。

GM-CSF基因修饰肿瘤细胞疫苗治疗前后黑素瘤患者CD8^+T细胞的变化及其对预后的影响

目的:探讨粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因修饰的肿瘤细胞疫苗(GM-CSF modified tumor cell vaccine,GVAX)治疗前后黑素瘤患者外周血免疫指标的变化及其对预后的影响。方法:收集2007年10月至2012年12月期间于天津医科大学肿瘤医院接受GVAX治疗的56例黑素瘤患者,采用流式细胞技术检测患者治疗前后外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、调节性T细胞(Treg)、自然杀伤细胞(NK)及树突状细胞(DC1和DC2)的比例,分析治疗前后外周血各免疫细胞比例的变化,并探讨其与患者预后的关系。结果:GVAX治疗后患者外周血CD8+T细胞比例较前升高[(37.56±12.76)%vs(34.71±12.30)%,P=0.006],CD4+T细胞比例降低[(53.44±13.36)%vs(56.27±13.15)%,P=0.017],CD4+/CD8+比值降低[1.61(1.37)vs 1.75(0.71),P=0.009]。治疗后CD3+T、NK、Treg、DC1、DC2与治疗前的差异无统计学意义(P>0.05)。晚期患者GVAX治疗前外周血CD8+T细胞比例大于均值组与小于均值组相比,中位生存时间显著延长(29.16 vs 13.34个月,P=0.012)。结论:GVAX治疗黑素瘤可增强CD8+T细胞为主的抗肿瘤免疫应答,晚期患者外周血CD8+T细胞比例可作为预测GVAX疗效的指标,为判断预后起到一定的提示作用。

细胞因子基因修饰瘤苗对膀胱癌的免疫治疗作用

为了探讨不同细胞因子基因修饰的肿瘤细胞制备的瘤苗对膀胱癌的治疗作用，作者构建了表达不同细胞因子的逆转录病毒载体N2／IL-2、M／CMV／GM—CSF、DC／TK／IL—14、N2／CMV／IL—1β、DC／SV／R／IFN-γ，将其分别转染包装细胞GP-env AM12，获得含病毒的细胞上清，再将其分别感染小鼠膀胱癌细胞MBT-2，

嵌合抗原受体修饰淋巴细胞在多发性骨髓瘤中的研究进展

嵌合抗原受体修饰淋巴细胞是过继免疫治疗的一种类型,其通过体外改造细胞表面受体,使淋巴细胞过表达,从而促进淋巴细胞的抗肿瘤活性。这种技术是目前恶性肿瘤免疫治疗领域中的新疗方法之一,在恶性血液病尤其是B细胞系统恶性血液病中治疗效果令人振奋。多发性骨髓瘤是血液系统第二常见恶性肿瘤,好发于老年人,目前仍无法治愈,研究者们一直在探索该病的免疫治疗。本文对近年来嵌合抗原受体修饰淋巴细胞技术的发展及其在多发性骨髓瘤中的应用进行综述。