以LacZ为报告基因探讨促进基因表达及基因免疫应答物质的筛选

应用分子生物学技术构建了LacZ报告基因的pcDLacZ真核表达载体 ,并对多种促进基因表达的物质进行了筛选。应用筛选的促进基因表达物质对pcDST基因疫苗的免疫增强效果进行了观察。结果 :构建的LacZ报告基因的pcDLacZ真核表达载体 ,肌注后 1天就有表达 ,到第 7天达到高峰。通过对多种促进基因表达的物质进行筛选证明 ,4.5 %斯苯、1 %甘油、2 5 %蔗糖有明显促进基因的表达作用。 4.5 %斯苯、1 %甘油能促进pcDST猪瘟基因疫苗的免疫效果。表明 :4.5 %斯苯、1

全反式维甲酸对基因免疫应答的调节作用

目的 研究全反式维甲酸 (ATRA)对TR4 2 1 hCGβ质粒基因免疫诱生的特异性细胞免疫与体液免疫应答的调节作用。方法 肌肉注射重组质粒TR4 2 1 hCGβDNA(每只鼠 5 0 μg 10 0 μl)初次免疫小鼠 ,以灌胃的方式给予ATRA ,并以灌溶剂和TR4 2 1质粒免疫为对照 ;3周与 6周后经同样的方式加强免疫各组小鼠 ,采用ELISA方法对基因免疫小鼠血清中IgG抗体水平进行动态观察 ,分析小鼠血清中IgG抗体亚类 ;3H TdR掺入法测定特异性细胞增殖和细胞杀伤功能。结果 ELISA结果表明 ,TR4 2 1 hCGβ质粒基因免疫诱生较高的抗hCGβ抗体水平 ,ATRA增强TR4 2 1 hCGβ质粒基因免疫诱生的抗hCGβ特异性IgG抗体水平并且伴随IgG2a IgG1显著性降低 ;TR4 2 1 hCGβ质粒基因免疫诱生较强的淋巴细胞增殖活性和CTL活性 ,ATRA抑制TR4 2 1 hCGβ质粒基因免疫诱生的特异性细胞增殖和细胞杀伤功能。结论 ATRA促进基因免疫诱生的TH2免疫应答 ,抑制TH1型免疫应答 ,为改变基因免疫诱生的特异性免疫应答类型提供了一条新的途径。

肺间质纤维化大鼠肺泡巨噬细胞STAT_1的活化及其依赖性免疫应答基因ICAM-1的表达

目的:探讨肺泡巨噬细胞(AM)中STAT1(signal transducersand activators of transcription 1)的活化在大鼠肺间质纤维化中的作用。方法:50只健康雌性Wistar大鼠随机分成博莱霉素(BLM)组和生理盐水(NS)组各25只,气管内分别灌注BLM和NS。用Western-blot法测定AM中STAT1活化的动态变化;用免疫组化染色法测定AM的ICAM-1(intercellular adhesionmolecule-1)的表达。结果:NS组中的AM内只有少许STAT1活化,气管内灌注BLM后1d,AM中STAT1的活化即开始显著增高,于第7天达高峰,以后逐渐下降,但28 d后仍高于NS组(P<0.05)。NS与BLM组的AM中表达ICAM-1的细胞数增高的模式,与AM中STAT1活化的模式相同。AM中STAT1活化的程度与AM中ICAM-1的表达呈正相关(r=0.913,P<0.01),而后者又与肺组织炎症的积分呈正相关(r=0.947,P<0.01)。结论:实验性肺间质纤维化大鼠AM中存在STAT1的异常活化,并参与了肺泡炎和肺纤维化的形成。

鲤免疫应答相关基因的克隆与鉴定

为研究鲤(Cyprinus carpio L.)白细胞免疫应答相关的分子机理,以体外培养的鲤外周血白细胞为实验材料,用荧光标记的mRNA差异显示(FluoroDDRT-PCR)技术,研究丝裂原(50μg/mL LPS、50μg/mL PHA和50μg/mL ConA)在刺激白细胞4、12和24 h内诱导白细胞免疫应答相关基因的mRNA表达差异,共获得92个差异片段,其中87个片段有再扩增产物,再扩增率为94.6%;将差异片段克隆,经PCR鉴定,获得81个阳性克隆,鉴定率为93.1%;差异片段序列同源性功能分析结果表明,本研究共获得3个免疫应答相关的cDNA克隆,它们分别编码鲤的蛋白酶体激活因子PA28α亚基、翻译延伸因子(EF-1α)和基质金属蛋白酶13(Mmp13)部分序列,为进一步研究这些差异表达基因在鱼类免疫中的作用机制奠定了基础。

基于NLRP3/caspase-1通路沉默I-Aβ1基因对肾小球肾炎系膜增殖的影响

目的探究基于NOD受体(NLRP)3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-1信号通路中沉默免疫应答基因(I-Aβ1)基因对肾小球肾炎细胞的表现及其系膜细胞的增殖影响。方法将人系膜增生性肾小球肾炎细胞(MsPGN),经培育后分为对照组、过表达组、沉默组,对照组不做处理,过表达组转染I-Aβ1模拟物(mimics)上调载体,沉默组转染I-Aβ1抑制剂(inhibitor)下调载体。测定每组MsPGN细胞I-Aβ1转染程度,双荧光素酶报告基因系统验证NLRP3、caspase-1、I-Aβ1基因增殖、凋亡,MsPGN细胞侵袭、迁移水平,NLRP3/caspase-1信号通路表达量。结果与对照组比较,过表达组I-Aβ1表达量升高,沉默组I-Aβ1表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05);与过表达组比较,沉默组I-Aβ1表达量显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告基因结果显示,与过表达组相比,沉默组NLRP3/caspase-1野生型荧光素酶活性显著上升(P<0.05);NLRP3/caspase-1突变型荧光素酶活性无显著变化(P>0.05);与对照组比较,过表达组(24、48、72 h)系膜细胞增殖率降低,凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05);沉默组(24、48、72 h)系膜细胞增殖率升高,凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05);与过表达组比较,沉默组(24、48、72 h)系膜细胞增殖率升高,凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,过表达组MsPGN细胞迁移数、侵袭数增多,沉默组MsPGN细胞迁移数、侵袭数减少(P<0.05);与过表达组比较,沉默组MsPGN细胞迁移数、侵袭数减少(P<0.05);与对照组比较,过表达组NLRP3、caspase-1升高,沉默组NLRP3、caspase-1降低(P<0.05);与过表达组比较,沉默组NLRP3、caspase-1显著降低(P<0.05)。结论抑制I-Aβ1可明显改变系膜细胞增殖、凋亡率及MsPGN细胞迁移、侵袭数,经过调节NLRP3/caspase-1信号通路,在防治、调控肾小球肾炎系膜增殖中有重要意义。

抗Ia单克隆抗体对异基因小鼠皮肤移植物的影响

目的 探讨抗Ia抗体对移植皮片存活期的影响。方法 用A .TL鼠 (H 2 k)皮肤及淋巴细胞免疫A .TH鼠(H 2 S) ,取脾细胞与骨髓瘤细胞 (P3U1 )融合后 ,经HAT培养基选择性培养 ,得到杂交瘤细胞 ,用补体依赖的细胞毒试验检测上清中的抗体与人B细胞反应的活性 ,阳性孔细胞以有限稀释法进行克隆化 ,得到抗Ia单克隆抗体 ,预先将抗Ia抗体注入异基因皮肤移植的受体小鼠腹腔后 ,观察移植皮片存活期。结果 实验组皮肤移植物存活期与对照组相比明显延长 (P <0 .0 1 )。

免疫应答基因1的研究进展

免疫应答基因1(IRG1)是一种促炎状态下在巨噬细胞线粒体中高表达的基因,IRG1催化衣康酸的产生,并抑制琥珀酸脱氢酶的活性,影响线粒体三羧酸循环进而改变巨噬细胞的代谢状态,是连接细胞代谢与免疫的枢纽,IRG1及其代谢产物通过多种通路及机制发挥抗菌、抗炎抗氧化、影响肿瘤进程等效应,其在感染、免疫相关疾病以及部分肿瘤进程中发挥重要作用。本文就IRG1的研究进展做简要综述。

血友病A患者凝血因子Ⅷ抑制物产生机制及相关遗传因素研究进展

血友病A是一种发病率为1/5000的出血性疾病,目前主要的治疗方式仍为替代治疗,治疗过程中产生凝血因子Ⅷ(FⅧ)的中和性抗体(FⅧ抑制物)是本病最大的并发症之一,将大大影响疾病治疗效果。抑制物的产生是多因素共同作用的结果,包括遗传因素和非遗传因素,遗传因素是主要因素,非遗传因素为次要因素。遗传因素包括FⅧ基因突变、免疫应答基因多态性、种族、家族史、血型。本文综述血友病A患者FⅧ抑制物产生机制及相关遗传因素的最新进展。

IL-18真核表达载体的构建及其在HO-8910细胞株的表达

目的:通过构建人白细胞介素18(IL-18)真核表达载体,观察其在HO-8910细胞株的表达情况。方法:应用分子克隆技术将IL-18基因插入pCI真核表达载体,应用脂质体介导法转染人卵巢癌HO-8910细胞株。转染分3组,空白组:人卵巢癌HO-8910细胞株+脂质体;对照组:卵巢癌HO-8910细胞株+pCI;实验组:卵巢癌HO-8910细胞株+pCI-hIL-18。以RT-PCR方法分别检测3组的IL-18表达情况。结果:成功构建pCI-hIL-18真核表达载体并转染HO-8910细胞株,RT-PCR、ELISA显示转染pCI-hIL-18重组质粒组在转染的细胞内获得表达。结论:IL-18基因能够转染到HO-8910细胞株中并获得表达。

CD4＋CD25^high调节性T细胞在异基因造血干细胞移植后的变化

移植物抗宿主病（GVHD）是异基因造血干细胞移植（do—HSCT）最严重的并发症之一，移植后免疫耐受的改变和免疫稳态的失衡促进GVHD的发生。近年来研究发现，CD4＋CD25^high（CD25高表达）调节性T细胞是重要的调节性细胞亚群，参与维持免疫稳态和自身免疫耐受。其在移植后控制异基因免疫应答和GVHD的发生方面亦发挥重要调控作用。移植后CD4＋CD25^high调节性T细胞重建延迟及其与效应性T细胞比例的失衡可能是GVHD发生的重要机制之一。我们通过动态监测移植后CD4＋CD25^high T细胞的比例及外周血单个核细胞（PBMNC）叉头翼状螺旋转录因子（FOXP3）基因的表达，分析CD4＋CD25^high调节性T细胞的早期重建情况及其在急性GVHD（aGVHD）发生前后的变化，探讨其在aGVHD发生和转归中的调节作用。

重组人干扰素α1b对呼吸道合胞病毒感染小鼠免疫炎症反应作用机制研究

目的探讨重组人干扰素α1b(rhIFN-α1b)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠免疫炎症反应的影响及机制。方法小鼠随机分为正常组、感染组和实验组,除正常组外,其余两组鼻腔滴入RSV病毒液建立感染模型。实验组给予rhIFN-α1b 50μg进行雾化治疗,正常组和感染组使用生理盐水雾化,连续干预5 d。检测T淋巴细胞亚群水平、气道高反应性、炎症因子水平、细胞类型计数和免疫应答基因1(IRG^(-1))蛋白表达。结果正常组、感染组、实验组CD3^(+)CD4^(+)分别为(70.43±1.56)%,(78.86±1.41)%和(72.14±1.51)%;CD3^(+)CD8^(+)分别为(25.36±1.35)%,(17.59±1.24)%和(23.71±1.48)%;CD3^(+)CD4^(+)/CD3^(+)CD8^(+)分别为2.78±0.23,4.48±0.24,3.06±0.29;3.125,12.50和50 mg·mL^(-1)乙酰甲胆碱激发时增强呼气间歇(Penh)分别为0.73±0.04,2.55±0.32,1.03±0.19;1.52±0.17,4.49±0.36,1.89±0.25;2.72±0.32,6.69±0.59,3.21±0.37;白细胞介素-4(IL-4)水平分别为(53.19±7.56),(185.83^(+)13.24)和(75.81±8.29)pg·mL^(-1);γ干扰素(IFN-γ)水平分别为(93.19±10.56),(35.83±6.24)和(82.81±8.29)pg·mL^(-1);细胞总数分别为(1.06±0.54),(10.24±0.81)和(2.67±0.58)×10^(7) cell·L^(-1);中性粒细胞占比分别为(1.12±0.36)%,(4.37±0.43)%和(1.96±0.38)%;巨噬细胞占比分别为(13.96±1.36)%,(36.65±1.78)%和(16.18±1.65)%;淋巴细胞占比分别为(1.16±0.37)%,(5.13±0.51)%和(2.52±0.41)%;IRG^(-1)蛋白表达水平分别为0.13±0.03,1.12±0.09和0.39±0.05。感染组与正常组比较,实验组与感染组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论rhIFN-α1b可调节体内免疫平衡,改善RSV感染引起的炎症反应和肺损伤,可能与抑制IRG1表达有关。

近交系小鼠C57BL/10和C57BL/6的全基因组学差异研究

目的:利用全基因组测序方法比较近交系小鼠C57BL/10和C57BL/6的基因组差异,并筛选免疫应答差异基因,对建立药物体内活性评价动物模型具有重要参考意义。方法:采用Illumina Hiseq 2500测序平台对近交系小鼠C57BL/10进行全基因组测序,与近交系小鼠C57BL/6参考全基因组进行比对。将变异检测得到的SNP位点,去掉同义突变之后,利用NCBI中BioMart进行功能注释。提取出免疫相关的转录本ID、基因ID和功能注释的信息,并与近交系小鼠C57BL/6参考全基因组进行比对。结果:获得C57BL/10小鼠原始数据量80.871G,过滤后的有效数据量79.322G,通过与C57BL/6小鼠参考基因组比对和基因功能分类,筛选出4个免疫应答差异基因。结论:本研究发现近交系小鼠C57BL/10和C57BL/6基因组的免疫应答基因存在显著差异。在分析中筛选出4个小鼠免疫应答差异基因,为建立生物制品体内评价实验动物模型和标准化提供了新的线索和技术手段。

贝纳塞拉夫:独特的人生解密人生的独特

每个人就像世界上没有两片完全相同的树叶一样,与生俱来地拥有自身的独特性。这种独特不仅带来了整个动物界的多样和精彩,同时也保证了物种及个体自身的安全。这种独特背后涉及了免疫学的基本问题之一——机体识别＂自我＂和＂非我＂的机制。直到1960年,巴鲁赫·贝纳塞拉夫（1920—2011）借助遗传学方法鉴定出免疫应答基因的存在,才使人们对免疫机制有了科学的认识。商贾家境,

近交系小鼠C57BL/6和C57BL/10的转录组差异研究

目的:对近交系小鼠C57BL/6和C57BL/10进行转录组测序,对比其转录组差异,发现免疫反应相关差异基因,为药物体内活性评价动物选择提供参考。方法:采用Illumina Hiseq 2000测序平台进行测序,通过短序列分析获取转录本,通过基因功能分类(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库进行测序结果分析。结果:获得38 553 614个C57BL/6小鼠的原始序列和37 721 318个C57BL/10小鼠的原始序列。获得118 002个转录本,注释了46 193个差异基因。38 106个转录本注释到2 196个GO分类中,GO分类主要分为3类:细胞成分,分子功能和生物过程。1 600个转录本注释到254个KEGG通路中。另外,发现了4 651个单核苷酸(SNP)位点。结论:通过二代测序方法发现近交系小鼠C57BL/6和C57BL/10转录组存在显著差异基因。在KEGG通路分析中筛选了一系列与小鼠免疫应答相关的差异基因,为建立小鼠免疫评价模型积累了数据,对药物实验动物体内活性检测分析具有参考意义,为生物制品评价用实验动物的标准化提供技术支撑。

人物

巴鲁赫·贝纳塞拉夫:发现免疫应答基因1920年10月,巴鲁赫·贝纳塞拉夫出生在委内瑞拉的加拉加斯。他因对免疫学及免疫和基因关系的研究,与另两位科学家分享了1980年的诺贝尔生理学或医学奖。贝纳塞拉夫小时候患有支气管哮喘,这使他对过敏现象非常好奇。