新四军皖南山地游击斗争及其红色基因内核研究

皖南事变后的新四军皖南山地游击斗争在中国共产党领导下,历经皖南抗日反顽游击斗争策源地、皖南群众性游击斗争大发展根据地、策应渡江战役和解放皖南全境战略基地三个阶段,形成了以皖南为腹地的苏浙皖赣边区人民解放战争格局,为新民主主义革命的决定性胜利做出了积极贡献。其孕育铸就的红色基因包括:牢固的大局意识和自觉的服从意识、敢于担当的精神和善于斗争的韧性、为民务实的初心和依靠群众的原则。

一种新的β-珠蛋白基因内含子Ⅱ碱基缺失和插入突变的基因型和表型分析

目的:分析β-地中海贫血的基因型,明确是否存在新的突变。方法:对病例进行血液学分析、血红蛋白(Hb)分析及荧光PCR及DNA测序分析地中海贫血基因突变类型。结果:共194例确诊为β-地中海贫血,其中1例为新的β-珠蛋白基因内含子Ⅱ基因突变杂合子。病例男患儿,2岁,临床有轻度贫血。Hb分析结果Hb A 92.9%,Hb A2、Hb F均升高,Hb A2为4.2%,Hb F为2.9%。基因分析显示为杂合子β-珠蛋白基因IVS-Ⅱ-561至IVS-Ⅱ-562有1个碱基缺失和13个碱基插入突变,基因突变类型为IVS-Ⅱ-561-562(-1 bp,+13 bp)。结论:新的β-珠蛋白基因IVS-Ⅱ-561至IVS-Ⅱ-562突变的杂合子导致β-地中海贫血,临床表现为轻度贫血,Hb A2水平升高。

DMD基因内含子突变致Becker型肌营养不良1例报告并文献复习

目的:探讨DMD基因内含子突变所致Becker型肌营养不良(BMD)的临床表现及基因变异特征。方法:回顾分析1例确诊BMD患儿的临床资料、肌肉病理及基因检测结果并复习相关文献。结果:患儿,男,12岁,2年前活动后出现乏力伴双下肢不适感,小便如茶色,急性期肌酸激酶、肌红蛋白水平可升高至正常值100倍以上;尿液分析示隐血3+,红细胞计数正常;代谢缺陷筛查(血、尿有机酸分析)无异常。后患儿乏力及尿液异常反复发生,全外显子检测无DMD基因相关突变;肌肉病理示骨骼肌呈肌病样改变,Dystrophin表达下降;DMD基因mRNA测序示存在异常剪接。患儿最终确诊为BMD。结论:反复横纹肌溶解的患者亦应考虑BMD的可能;对DMD基因外显子检测无异常,但Dystrophin表达异常的患者,需警惕内含子突变所致基因异常剪接。

USH1C基因内含子新突变导致一耳聋家系的研究

目的 对一个耳聋家系,应用高通量测序技术、Minigene实验,对其听力损失病因及分子生物学致病原因进行探究。方法 首先采集先证者及家系成员的病史、绘制家系图,并进行听力学评估及耳部影像学检查。获取该家系2代3人外周血提取基因组DNA,对患儿采用高通量测序方法对406个耳聋基因编码区的全部外显子及部分内含子和启动子进行检测,筛选疑似致病突变,针对变异位点对家系成员进行Sanger测序验证,应用Minigene实验进行验证。结果 患儿表现为双侧极重度聋,高通量测序结果为USH1C纯合突变c.388-1G>A,导致氨基酸发生剪接突变,根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)指南,该变异初步判定为疑似致病性变异;Sanger测序验证其父母均为该位点的杂合携带者。Minigene实验表明该位点突变会导致m RNA异常剪接。结论 本家系中发现的USH1C基因内含子新突变为致病性突变,该突变导致先证者耳聋。

杨树抗逆转录因子基因内SSR标记的开发

利用直接测序法开发小叶杨抗逆转录因子基因内一套新的核基因组SSR标记。通过对3个抗逆转录因子共21个成员在36个小叶杨基因型个体中的序列比较分析后共检测到31个SSR多态性位点,SSR出现的频率为1/1916bp。在小叶杨自然群体中,SSR多态性位点的碱基重复呈现出2～5碱基形式,基元重复次数变异范围为3～20次,其中以二碱基重复的位点较多,占总数的51.6%。在此基础上,依据SSR位点两侧的保守序列,设计31对SSR位点PCR扩增引物对。利用设计的引物检测所开发的SSR位点在杨属内22个基因型个体中PCR扩增的有效性及SSR位点的保守性。PCR扩增结果显示,93.5%的SSR位点能够在杨属内至少4个派内有效扩增,每对引物组合可检测到SSR多样性位点数3～12个,平均6个。基于抗逆转录因子基因内开发的SSR标记位点为分子标记辅助小叶杨抗逆性状育种提供工具。

将红色基因内化为独特文化优势

蛇山南麓,长江之滨,这里是号称“九省通衢”的英雄之城武汉。走在宽阔通达的张之洞路上,中国船舶701所门口摆放的两尊近代巡洋舰舰炮的雕像格外引人注目。当清晨的第一缕阳光照射在所区上空,每一个上班的701人都要穿过这两尊大炮护卫着的大门。大炮底座上刻着的“勿忘国耻振兴中华”八个红色大字,正在每天的晨钟暮鼓中给予701人精神和信仰上的激励。

南江黄羊FSHβ亚基基因内含子1序列的测定及分析

利用GenBank中公布的牛、绵羊等动物FSHβ亚基基因序列设计引物,采用PCR法扩增并测定出南江黄羊FSHβ亚基基因内含子1(in-1)全序列(GenBank登录号为AY838283)。山羊FSHβ基因内含子1全序列长641 bp,A、C、G、T4种碱基分别占35．73%、13．88%、17．47%、32．92%,A+T (68．65%)的含量远高于G+C(31．35%)的含量。不同物种间FSHβ基因序列相似性的变异范围为24．1%～97．3%,分歧度则为2．6%～85．7%。利用FSHβ亚基基因内含子1序列进行的物种间系统发育分析结果与实际的物种演化顺序一致,表明它可用于物种间的系统发育分析。

基于nrDNA GapC基因内含子序列的资源冷杉遗传多样性研究

通过nrDNAGapC基因内含子序列的测序和分析,揭示资源冷杉遗传多样性水平和种群分化的强弱并推断其进化历史。资源冷杉3个种群的34个个体共获得70条GapC基因内含子序列,有8个核苷酸变异位点,鉴别出12种单倍型。银竹老山、大院和舜黄山种群分别有10种、6种和7种单倍型;有7个个体得到了2种以上的单倍型。资源冷杉物种水平的单倍型多样性（h）为0.817 0,种群的在0.683 3~0.883 1之间;物种水平的核苷酸多样性（π）为0.003 90,种群的在0.002 63~0.003 82之间。种群遗传分化研究结果（Gst=0.103,p〈0.05）说明种群间存在显著的遗传分化,分子方差分析（AMOVA）结果也证明虽然大多数的核苷酸多态性（88.64%,p〈0.001）来源于种群内个体间的变异,但是仍有显著性比例存在种群间（11.36%,p〈0.05）。Tajima’s D、Fu＆Li’s D、Fu＆Li’s Fs中性检验结果都表明资源冷杉在物种和种群水平上都不拒绝中性进化。资源冷杉单倍型的谱系没有出现地区特异性谱系分支,核苷酸不配对分析（mismatch analysis）结果表明没有发生近期的群体扩张,资源冷杉的Nst（0.131）与Gst（0.103）没有显著性差异（p〉0.05）,表明种群没有明显的地理结构。推测现存资源冷杉是相对较近的时间内片断化的产物。

倒位PCR法检测血友病A FⅧ基因内含子22/1倒位

目的建立血友病A(hemophilia A,HA)FⅧ基因第22内含子倒位PCR检测法,并初步应用于HA直接基因诊断。方法应用倒位PCR(inversion-PCR,I-PCR)方法对24个HA家系中所有先证者的FⅧ基因22内含子倒位进行检测,对检测阳性者的母亲进一步用上述方法行携带者诊断,并对其中1例进行羊水产前基因诊断。检测阴性者再行内含子1倒位筛查。结果 24个HA家系中,7例先证者的F基因内含子22倒位检测为阳性,阳性检出率、可诊断率分别为29.17%、100%,未发现内含子1倒位;7例内含子22倒位突变阳性患者的母亲有6例为倒位携带者,羊水诊断未发现内含子22/1倒位。结论 I-PCR法能准确地检测F基因22内含子倒位突变,可应用于HA患者及携带者FⅧ基因22内含子倒位基因诊断及产前诊断。

遗传规划中的基因内区研究

利用试验证实遗传规划的个体中存在基因内区。它们是冗余的表达式 ,附加在算法树上 ,使个体变得臃肿 ,但对实际的输出结果没有影响。它对进化的收敛既有积极作用 ,也有消极作用。通过对遗传操作方法和参数的研究 ,揭示出基因内区发生的规律 ,并提出扬长避短的途径。

南江黄羊FSHβ亚基基因内含子1序列的测定

利用牛、绵羊等动物FSHβ亚基基因序列设计引物,采用PCR法扩增并测定出南江黄羊FSHβ亚基基因内含子1全序列(GenBank登录号:AY838283)。山羊FSHβ基因内含子1全序列长641bp,A、C、G、T 4种碱基分别占35.73%,13.88%,17.47%,32.92%;A+T(68.65%)的含量远高于G+C(31.35%)的含量。所测定7个个体的碱基序列完全一致,表明FSHβ基因内含子1的保守性较强。

汉族人群促甲状腺素受体基因内含子1区域多态性与Graves病及临床表现的关系

目的:探讨汉族人群促甲状腺素受体(TSHR)基因内含子1区域上单核苷酸多态性(SNPs)位点与Graves病(GD)及临床表现的关系。方法:选取699例汉族GD患者和563名健康对照者入组。用Taq Man探针技术,检测GD患者和健康对照者14号染色体TSHR基因内含子1区上6个SNPs位点的基因分型,进行相关性分析,研究这6个SNPs与GD易感性关系。结果:GD患者和对照组rs179247、rs2284722、rs12101261、rs4903964四个位点在病例-对照中的分布上均具有显著差异(P<0.01);rs12101261为与GD相关性最强的主效易感位点,与血清TRAb水平、性别有关,与甲状腺肿大程度、眼征无明显关联。结论:TSHR基因内含子1区域多态性与GD显著相关,其中rs12101261为相关性最强的主效易感位点,与促甲状腺素受体抗体阳性的GD患者发病密切相关。

猪IGF-2基因内含子3突变检测及其多态性分布

采用错配PCR—RFLP法，检测8个品种314头猪IGF-2基因内含子3的3072位点多态性及其在群体中的分布。结果表明：引入错配碱基构造出新的酶切位点，在很大程度上降低了试验成本且不影响基因型判定结果。IGF-2基因内含子3的3072位点（G→A）变异多态在猪群中分布差异极显著。国外品种猪中等位基因A的频率高于我国地方品种猪，我国地方品种猪（二花脸猪、梅山猪、五指山猪、淮猪）群体中绝大多数为GG基因型；而国外品种猪（长白猪、大约克猪、杜洛克猪）群体中GA和AA基因型频率分别为60％-70％和20％～30％。由杜洛克猪与二花脸猪、梅山猪杂交育成的苏太猪，其群体中GA基因型频率接近78％，大大超过地方品种猪。

DNMT3a通过提升基因内部甲基化介导紫杉醇诱导的LINE-1异常表达

药物诱导的长散在重复序列LINE-1异常激活可促进细胞基因组不稳定,而基因组不稳定是促进肿瘤发生发展和耐药表型形成的重要因素。因此,探索LINE-1异常激活的分子机制具有重要的理论和临床意义。DNA甲基化是调控基因表达的重要方式,已知DNA甲基转移酶家族成员DNMT3a不仅能通过促进基因启动子甲基化抑制基因表达,还可通过增强基因内部甲基化上调基因表达。本实验室前期研究发现,将乳腺癌细胞暴露于化疗药物可诱导LINE-1异常高表达,但LINE-1启动子甲基化水平并无显著改变。本研究进一步探讨了在化疗药物压力下DNMT3a是否可通过增强LINE-1基因内部甲基化水平促进LINE-1在乳腺癌细胞中的异常高表达。ChIP实验和甲基分析结果显示,用化疗药物紫杉醇(PTX)处理乳腺癌细胞,不仅可以诱导DNMT3a表达,而且可以促进DNMT3a与LINE-1基因内部区域的结合,提升其基因内部甲基化水平,进而上调LINE-1的表达水平。利用表达载体增加细胞内DNMT3a的表达水平,可显著上调LINE-1基因内部的甲基化及基因的表达水平,而下调DNMT3a的表达可有效抑制LINE-1表达。上述研究结果表明,DNMT3a介导的基因非启动子区甲基化在药物诱导的LINE-1异常激活中发挥重要作用,为认识LINE-1在乳腺癌化疗耐药性形成过程中异常激活的机制提供了新思路。

PCR方法检测人白介素-1受体拮抗剂基因内含子2多态性

白介素-1(IL-1)受体拮抗剂是一种酶链反应方法检测了130例正常人外周血IL-1受体拮抗利内含子2多态性。结果:发现了3种等位基因产物:410bp,240bp和500bp。结论:该基因区含有3个蛋白质结合点,可能与IL-1受体拮抗剂产生有关,该多态性可能与免疫介导的炎症反应有关。

牦牛MSTN基因内含子2多态性及与生长性状的相关性

采用PCR-SSCP技术对大通牦牛、甘南牦牛和天祝白牦牛(共277头)肌肉抑制素基因(MSTN)内含子2的部分序列进行了多态性研究,分析该基因与牦牛生长性状的相关性。结果表明,牦牛MSTN基因内含子2存在2个等位基因和3种基因型。在该基因座上,甘南牦牛、天祝白牦牛呈Hardy-Weinberg平衡状态,大通牦牛呈不平衡状态。3种基因型与牦牛部分生长性状的最小二乘法分析表明,MSTN基因内含子2对成年牦牛胸围、体质量、胸围指数、体长指数和肉用指数均显著相关(P<0.05),而不同基因型的牦牛体高、管围、体长和管围指数差异不显著。初步推断牦牛MSTN基因内含子2可作为牦牛标记辅助选择的遗传标记之一。

鲫鱼生长激素Ⅰ基因内含子2的多态性分析

利用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 (Denaturing PolyacrylamidGelElectrophoresis,DPAGE)和单链构象多态性(Single StrandConformationPolymorphism ,SSCP)分析技术 ,在普通鲫鱼种群 (7个野生鲫鱼群体和 2个金鱼群体 )和银鲫种群 (1个方正银鲫群体 )共 16 2个个体生长激素Ⅰ (GrowthHormoneⅠ ,GHⅠ )基因的内含子 2中检测到丰富的长度和序列多态性。在所有群体中 ,GHⅠ基因内含子 2的长度存在 7种类型 ,分别为A、B、C、D、E、F和G型 ,变异频率为 4 32 % ;其序列存在 15种单倍型 ,分别为A1、A2、A3、B、C1、C2、D1、D2、D3、D4、D5、E1、E2、F和G型 ,变异频率为 9 2 6 %。对这 15种单倍型的DNA序列进行分析 ,结果表明 :1)鲫鱼GHⅠ基因内含子 2的扩增DNA片段长为 2 4 3～ 2 6 3bp ,其中包括部分外显子 2 (3′端 ,33bp)、内含子 2和部分外显子 3(5′端 ,2 1bp)。 15种单倍型A、T、G、C碱基平均百分比组成分别为 34 13%、37 36 %、15 13%、13 38% ,其中G +C(2 8 5 1% )含量明显小于A +T(71 4 9% )含量。内含子 2与外显子 2、3的接头区存在GT—AG保守序列 ,此为真核基因中mRNA剪接的识别信号。内含子 2的 5′端存在有一序列为GTAAGAT的保守区域 ,在其近 3′端分布有一高丰度嘧啶区 ;2 )内含子 2的

甜樱桃DFR基因内含子2和内含子3的多态性

【目的】研究70个甜樱桃品种DFR基因多态性与果皮颜色的相关性。【方法】通过DNA序列分析,以不同果皮颜色的10个甜樱桃品种(Prunus avium L.)为材料,检测DFR基因的多态性。根据多态性出现的位点设计特异引物,通过PCR扩增检测70个甜樱桃品种DFR基因的多态性。【结果】获得甜樱桃DFR基因约1 kb的片段,测序结果用BLAST分析发现,其核苷酸序列与樱桃李(Prunus cerasifera)的核苷酸相似性为80%,预测的氨基酸序列与已知的甜樱桃(P.avium)DFR氨基酸序列相似性达99%。该片段由3个外显子和3个内含子组成,2个多态性位点分别在内含子2和内含子3上。在黄色、黄底红晕和红色果皮3个组的70个甜樱桃品种中发现3个单倍型,共5种单倍型组合。通过SAS 9.0软件分析发现,所检测到的DFR基因的等位基因频率在黄底红晕果皮品种组和红色品种果皮组中的分布无显著差异。【结论】本研究在甜樱桃DFR基因座上得到2个差异位点,分别在内含子2和内含子3内,其优势基因频率依次为:0.864和0.679;但未发现DFR基因内含子2和内含子3的多态性与果皮颜色之间存在直接关系。

籽鹅GH基因内含子3多态性及其与体重和屠体性状的关联分析

根据鸭生长激素基因内含子3的序列设计引物,利用PCR-SSCP方法对籽鹅进行了单核苷酸多态性分析,并检测其多态性。结果表明,籽鹅生长激素基因内含子3长约364 bp,共发现了7个突变位点,分别为A160G、C167G、T264C突变,以及AA型个体在176、177位点G、A碱基缺失和BB型个体在231、232位点C、T碱基缺失。产生AA、AB和BB 3种基因型,其中BB基因型为优势基因型,且基因型频率表现为BB>AB>AA;卡方检验结果表明,基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。不同基因型与体重和屠体性状的关联分析结果表明:BB基因型个体的7周龄体重、9周龄体重、10周龄体重、胸肌重、胸肌率及心脏重显著高于AA型个体(P<0.05);BB基因型个体8周龄体重显著高于AB型个体(P<0.05);在所分析的性状中,BB基因型个体的均值最大,AB型次之,AA型最小。

鹅生长激素基因内含子2单核苷酸多态性与体重性状的相关研究

本文以莱茵鹅为实验材料,根据鹅生长激素(GH)基因CDS序列设计引物进行PCR扩增,获得了鹅GH基因内含子2序列,并对扩增产物进行SSCP分析。结果表明:第441位碱基发生了C-A突变;第449位碱基发生了T-C突变。经最小二乘分析,这两个多态性位点所产生的6种基因型的个体间体重差异极显著(P<0.01),BB基因型个体体重显著高于其他基因型个体。这提示我们可以利用该多态位点对鹅体重性状进行标记辅助选择。