南江黄羊FSHβ亚基基因内含子1序列的测定及分析

利用GenBank中公布的牛、绵羊等动物FSHβ亚基基因序列设计引物,采用PCR法扩增并测定出南江黄羊FSHβ亚基基因内含子1(in-1)全序列(GenBank登录号为AY838283)。山羊FSHβ基因内含子1全序列长641 bp,A、C、G、T4种碱基分别占35．73%、13．88%、17．47%、32．92%,A+T (68．65%)的含量远高于G+C(31．35%)的含量。不同物种间FSHβ基因序列相似性的变异范围为24．1%～97．3%,分歧度则为2．6%～85．7%。利用FSHβ亚基基因内含子1序列进行的物种间系统发育分析结果与实际的物种演化顺序一致,表明它可用于物种间的系统发育分析。

南江黄羊FSHβ亚基基因内含子1序列的测定

利用牛、绵羊等动物FSHβ亚基基因序列设计引物,采用PCR法扩增并测定出南江黄羊FSHβ亚基基因内含子1全序列(GenBank登录号:AY838283)。山羊FSHβ基因内含子1全序列长641bp,A、C、G、T 4种碱基分别占35.73%,13.88%,17.47%,32.92%;A+T(68.65%)的含量远高于G+C(31.35%)的含量。所测定7个个体的碱基序列完全一致,表明FSHβ基因内含子1的保守性较强。

汉族人群促甲状腺素受体基因内含子1区域多态性与Graves病及临床表现的关系

目的:探讨汉族人群促甲状腺素受体(TSHR)基因内含子1区域上单核苷酸多态性(SNPs)位点与Graves病(GD)及临床表现的关系。方法:选取699例汉族GD患者和563名健康对照者入组。用Taq Man探针技术,检测GD患者和健康对照者14号染色体TSHR基因内含子1区上6个SNPs位点的基因分型,进行相关性分析,研究这6个SNPs与GD易感性关系。结果:GD患者和对照组rs179247、rs2284722、rs12101261、rs4903964四个位点在病例-对照中的分布上均具有显著差异(P<0.01);rs12101261为与GD相关性最强的主效易感位点,与血清TRAb水平、性别有关,与甲状腺肿大程度、眼征无明显关联。结论:TSHR基因内含子1区域多态性与GD显著相关,其中rs12101261为相关性最强的主效易感位点,与促甲状腺素受体抗体阳性的GD患者发病密切相关。

TSHR基因内含子1区域多态性与Graves病的关联研究

目的探讨中国江苏徐州地区汉族人群促甲状腺素受体（TSHR）基因内含子1上单核苷酸多态性位点（SNP）rs179247和rs12101261与Graves病的关系。方法应用TaqMan探针技术，在FluidigmEPl平台上对1066例Graves病患者和1107名健康对照者进行基因分型；同时检测样本血清甲状腺激素和TSH受体抗体（TRAb）水平。结果rs179247-A、rs12101261-T与Graves病易感性关联（分别为OR=1．35，95％C／1．19～1．54，JP=5．92x10-：OR=1．32，95％C／1．16～1．50，P=2．22×10^-5）；Logistic回归提示rs179247是独rL的易感位点。在rs179247_GG、AG、AA3种基因型之间相比，血清TRAb水平具有统计学差异（P=0．015）；其他临床表现其差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论TSHR基因内含子1区域rs179247、rs12101261与徐州地区汉族人群Graves病相关联，并且rs179247是一个独立易感位点；该多态性与血清TRAb水平有关，与血清甲状腺激素水平、发病年龄、甲状腺肿大程度、Graves病眼征分级、复发与否无明显关联。、

TSHR基因内含子1区域多态性及其与Graves病的关系

目的探讨中国安徽蚌埠地区汉族人群Graves病患者促甲状腺激素受体（TSHR）基因内含子1上单核苷酸多态性位点（SNP）rsl79247、rsl2101261、rs2284722、rs4903964、rs2300525、rsl7111394与Graves病的关系。方法用TaqMan探针技术，在FluidigmEPl平台上对618例Graves病患者和646名健康对照者进行等位基因分型；同时对Graves病患者检测促甲状腺激素受体抗体（TRAb）水平。结果在6个分析的SNP位点中，除rs2300525外，余5个SNPs均与Graves病易感性关联，以rsl79247-G，rsl2101261-C，rs4903964-G与Graves病相关性最显著（P=2．85x10-10，OR=1．73，95％C／1．46～2．05；P=1．74×10-10，OR=1．73，95％C／1．46～2．05；P=2．24×10-10，OR=1．69，95％C／1．44～1．99）；logistic回归提示rs12101261和rs4903964是TSHR基因内含子1上的主效易感位点。rsl79247-G，rsl2101261-C及rs4903964-G与TRAb阳性Graves病患者显著关联（P=4．24×10-13=5．48×10-13，P=3．89×10-12）。结论TSHR基因内含子1区域rs179247、rs12101261、rs4903964与蚌埠地区汉族人群Graves病明显相关联；并且rs12101261和rs4903964是TSHR基因内含子1上的主效易感位点；TSHR基因可能是TRAb持续阳性Graves病患者的一个主效易感基因。

倒位PCR法检测血友病A FⅧ基因内含子22/1倒位

目的建立血友病A(hemophilia A,HA)FⅧ基因第22内含子倒位PCR检测法,并初步应用于HA直接基因诊断。方法应用倒位PCR(inversion-PCR,I-PCR)方法对24个HA家系中所有先证者的FⅧ基因22内含子倒位进行检测,对检测阳性者的母亲进一步用上述方法行携带者诊断,并对其中1例进行羊水产前基因诊断。检测阴性者再行内含子1倒位筛查。结果 24个HA家系中,7例先证者的F基因内含子22倒位检测为阳性,阳性检出率、可诊断率分别为29.17%、100%,未发现内含子1倒位;7例内含子22倒位突变阳性患者的母亲有6例为倒位携带者,羊水诊断未发现内含子22/1倒位。结论 I-PCR法能准确地检测F基因22内含子倒位突变,可应用于HA患者及携带者FⅧ基因22内含子倒位基因诊断及产前诊断。

新疆锁阳线粒体nad 1基因第2内含子序列居群间变异分析

目的:对分布于新疆的锁阳Cynomorium songaricum 4个居群22个个体进行了线粒体nad1基因第2内含子序列的比较研究,分析序列居群差异。方法:提取锁阳DNA,用通用引物扩增线粒体nad1基因第2内含子序列,Clustal W软件比较分析序列。结果:锁阳22个样本的nad 1基因第2内含子序列变异均表现为插入和缺失,无碱基替换发生,有13个个体序列完全一致,9个个体有变异位点,变异位点为10个;4个居群间分化不明显,其中b居群可能存在一定的分化,有两个个体y4和a19存在较大的变异,可能具有一定的遗传学意义。结论:线粒体nad 1基因第2内含子序列给出的锁阳4个居群分化不明显。

猪Nramp1基因内含子6的SNP多态性分析

本研究以大白猪、长白猪和杜洛克猪为研究对象,通过构建DNA混合池并利用PCR产物直接测序的方法,对Nramp1基因内含子6的SNP多态性进行分析。结果发现,3个猪种在Nramp1基因内含子6中均有4个SNP位点,分别为C^(111)A、C^(225)T、G^(296)T和T^(297)G。基因频率估算结果表明,等位基因C、C、G和T分别是4个SNP位点的优势等位基因。本研究结果可为猪免疫疾病研究和抗病分子育种提供理论基础。

重型血友病A凝血因子Ⅷ第1号内含子倒位的研究进展

近年来发现凝血因子Ⅷ基因第1号内含子倒位是仅次于第22号内含子倒位、导致重型血友病A的常见原因。现就引起重型血友病A的凝血因子Ⅷ第1号内含子倒位的分子机制、检测方法及与抗体形成关系的研究进展作一综述。

TSHR内含子1区段与4p14区段单核苷酸多态性及基因交互作用与Graves病相关性研究

目的探讨中国安徽蚌埠地区汉族人群促甲状腺素受体（TSHR）基因内含子1区段各单核苷酸多态性（SNP）位点（rs12101261、rs4903964、rs179247、rs2284722、rs17111394和rs2300525）、4p14区段SNP位点rs6832151与Graves病的关系以及TSHR内含子1区段各SNP位点与4p14区段SNP位点rs6832151之间基因．基因交互作用。方法用TaqMan探针技术，在FluidigmEP1平台上对611例Graves病患者和555名健康对照者的TSHR内含子1区段SNP位点、rs6832151位点进行等位基因分型、相关性分析、连锁分析、单体型分析及交互作用分析。结果TSHR基因内含子1区域的5个位点（rs12101261、rs4903964、rs179247、rs2284722、rs17111394）和4p14位点rs6832151与蚌埠地区汉族人群Graves病发病相关（均P〈0．05）。单体型分析显示，TSHR内含子1区段的rs179247、rs2284722、rs12101261、rs4903964四个SNP位点组成的AGTA、GGCG、AATA单体型及rs2300525、rs17111394组成的cc单体型频率分布在2组之间差异有统计学意义（均P〈0．01）。TSHR基因rs179247与rs12101261之间存在交互作用（P=0．001）；rs179247（TSHR基因）、rs4903964（TSHR基因）、rs6832151（4p14基因）三者之间存在交互作用（P=0．001）。结论TSHR内含子1区段基因多态性及单体型、4p14区段基因多态性与蚌埠地区汉族人群Graves病相关。TSHR、4p14两基因的单核苷酸多态性存在交互作用，这种作用使得Graves病的发病风险发生改变。

重型血友病A患者及其携带者直接基因诊断结果分析

目的进一步提高重型血友病A(HA)及其携带者的诊断水平。方法检测120例无亲缘关系的重型HA患者和HA家系中的18例女性(可能携带者)血浆凝血因子FⅧ(FⅧ:C)活性和血管性血友病因子(vWF)浓度;采用长链聚合酶链反应(LD-PCR)和双组PCR方法检测FⅧ基因内含子22倒位(IVS22)和内含子1倒位情况进行直接基因诊断。结果 120例HA患者中IVS22者46例(或家系),占38.3%;其中10个IVS22家系的18例女性检出FⅧ基因IVS22携带者7例,非IVS22的74例患者无内含子1倒位者。结论通过检测FⅧ基因内含子22倒位和内含子1倒位可对重型HA患者及其携带者进行准确、快速的直接基因诊断。

基于线粒体nad1 intron2序列的金钗石斛和混淆品亲缘关系及DNA条形码研究

为了建立简便、重复性高的金钗石斛的分子鉴别方法,对金钗石斛及其混淆品的亲缘关系进行分析并构建稳定的序列条形码分析,根据金钗石斛及其混淆品的nad1 intron 2序列,寻找其中存在的特异性位点并设计特异性鉴别引物,运用Mega 5. 0等软件进行遗传关系分析并构建系统进化树。根据序列中存在的单核苷酸多态性(SNP)位点及特异性鉴别引物,可在53℃的复性条件下扩增得到约400 bp的条带,将金钗石斛与其混淆品成功分开;构建的UPGMA树可以将金钗石斛及其混淆品鉴别开。SNP位点及位点特异性PCR具有高效、准确、省时的特点,有广泛的应用前景。同时,通过nad1基因第2内含子可以分析正品与混淆品之间的亲缘关系并成功构建物种分析的条形码序列,为石斛药材的鉴别提供了可靠的科学依据,也为构建更完整的DNA barcoding(DNA条形码)数据库奠定基础。