PCR-SSP在HLA低分辨中常见问题及解决措施

目的探讨PCR-SSP在HLA低分辨分型中常见问题的原因,提出解决的措施。方法应用盐析法提取基因组DNA,用PCR-SSP法对参加造血干细胞资料库志愿者的血样进行HLA分型,琼脂糖凝胶电泳后紫外光灯下分析判读,并进行统计学分析。结果在4800份血样标本中,4187份标本能够准确判读出结果,检出率为87.2%,其余613份样本无法判读出确定的基因型。在这613份血样标本中所遇到的问题包括有漏检占41.9%(其中单孔漏检多达90.2%);假阳性及非特异性所占比例也较大,为29.2%;模棱两可的结果所占比例为23.2%;人为因素影响分析的占4.4%;仪器因素影响分析的占1.3%。结论SSP法用于HLA分型时,有99.5%问题可找到其原因所在,并通过相应的方法加以解决。